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JP-2026077634-A - がん処置のためのベクター

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Abstract

【課題】がん細胞に対する免疫活性化を向上させる方法を提供する。 【解決手段】単一のがん特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをコードするヌクレオチド配列を含むアデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターであって、ベクターが、膨張性メモリＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する能力があり、ベクターが、さらなるがん特異的Ｔ細胞エピトープをコードする核酸を含まない、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターを提供する。該ベクターを含む免疫原性組成物、該組成物の治療有効量を投与するステップを含む、がんを処置または防止する方法も提供する。 【選択図】図１

Inventors

  • リー，リアン・ナイ
  • チンナカンナン，センティル
  • クレナーマン，ポール

Assignees

  • キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20251128
Priority Date
20191016

Claims (20)

  1. 単一のがん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープをコードするヌクレオチド配列を含むアデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターであって、ベクターが、膨張性メモリＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘導する能力があり、ベクターが、さらなるがん特異的Ｔ細胞エピトープをコードする核酸を含まない、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクター。
  2. ＣＸ３ＣＲ１＋、ＫＬＲＧ－１＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌ－を含む群から選択されるマーカーによって特徴づけられるＣＤ８＋ Ｔ細胞の産生を誘導する能力がある、請求項１に記載のベクター。
  3. ＣＸ３ＣＲ１＋、ＫＬＲＧ－１＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－（ｌｏｗ）、ＣＤ１２７－（ｌｏｗ）を含む群から選択されるマーカーによって特徴づけられるＣＤ８＋ Ｔ細胞の産生を誘導する能力がある、請求項１に記載のベクター。
  4. がん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープをコードするヌクレオチド配列が、１２個～４５個のヌクレオチド塩基対を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のベクター。
  5. がん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープをコードするヌクレオチド配列が、２４個～４５個のヌクレオチド塩基対を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のベクター。
  6. がん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープが腫瘍関連抗原に由来する、請求項１～５のいずれか一項に記載のベクター。
  7. Ｔ細胞エピトープががん細胞において変異している、請求項１～６のいずれか一項に記載のベクター。
  8. Ｔ細胞エピトープががん細胞において過剰発現している、請求項１～７のいずれか一項に記載のベクター。
  9. Ｔ細胞エピトープが、ＴＲＰ－１、ＣＥＡ、ＴＡＧ－７２、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ、ＣＬＰＰ、サイクリン－Ａ１、サイクリン－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１ｂ／ＧＡＧＥＤ２ａ、ＣＤ４５、グリピカン－３、ＩＧＦ２Ｂ３、カリクレイン－４、ＫＩＦ２０Ａ、レングシン、メロエ、ＭＵＣ５ＡＣ、サバイビン、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ１、ｇｐ７０、ＭＣ１Ｒ、ＴＲＰ－１／－２、β－カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、胎児タンパク質ＳＩＭ１からなる群から選択される腫瘍関連抗原に由来する、請求項１～８のいずれか一項に記載のベクター。
  10. Ｔ細胞エピトープが配列番号２（ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ）を含む、請求項９に記載のベクター。
  11. がん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープが、結腸直腸がん、前立腺がん、食道がん、肝臓がん、腎がん、肺がん、乳がん、乳がん、膵臓がん、脳がん、肝細胞がん、リンパ腫、白血病、胃がん、子宮頚がん、卵巣がん、甲状腺がん、黒色腫、癌腫、頭頚部がん、皮膚がん、上咽頭がん、エプスタインバー駆動型がん、ヒトパピローマウイルス駆動型がん、および軟組織肉腫に特異的である、請求項１～６のいずれか一項に記載のベクター。
  12. ヒト血清型５（ＡｄＨｕ５）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のベクター。
  13. ＣＭＶプロモーターを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のベクター。
  14. ＴＡＴＡボックスを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のベクター。
  15. Ｅ１およびＥ３タンパク質を欠損する、請求項１～１４のいずれか一項に記載のベクター。
  16. 請求項１～１５のいずれか一項に記載のベクターを含む、免疫原性組成物。
  17. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の少なくとも２個のベクターを含む、免疫原性組成物。
  18. 各ベクターが異なるがん特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープをコードする、請求項１７に記載の組成物。
  19. １つまたは複数の追加の活性成分、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の組成物。
  20. 請求項１～１５のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１６～１９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を含む、宿主細胞。

Description

本発明は、膨張性メモリＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘発する能力があるベクターに関する。膨張性メモリＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘発するこれらのベクターは、がんの処置に用いるのに適している。本発明はまた、そのベクターを作製するための方法、および膨張性メモリＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘導するための方法にも関する。 免疫のＣＤ８ Ｔ細胞アームを活性化することを目指す抗がん戦略は、顕著な効力を示している。慢性感染に対する良好なＣＤ８ Ｔ細胞応答のための必要条件とがんに対するものとの間には、かなりの重複がある－それらは、耐久性があり、機能的であり、持続的であり、正しい部位へホーミングし、長期のＴＣＲ刺激による疲弊に抵抗できなければならない。 エピトープに基づいたがんワクチンは、特定の腫瘍関連抗原に対するＴ細胞応答を活性化するために用いられている一つの戦略である。当初は、ペプチドに基づいた単一エピトープワクチンが用いられたが、これらは自然免疫系を十分には活性化しなかったため、不良な臨床応答を示した。免疫活性化を増強するために、複数のエピトープが一緒に投与される、複数ペプチドのワクチンが開発された。 複数エピトープを投与するこのアプローチはまた、アデノウイルスベクターを用いて実施されている。大きな導入遺伝子をコードする能力を有するアデノウイルスベクターを用いることにより、複数エピトープが、コードされ、かつコンカテマーとして送達され得る（ＢｅｉおよびＳｃａｒｄｉｎｏ．、Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１０；２０１０：１０２７５８）。あるいは、完全長抗原がコードされ、かつ送達され得る。しかしながら、がん細胞に対する免疫活性化を向上させる必要性がなおも存在する。 ＡＨ１ ＣＤ８＋ Ｔ細胞腫瘍エピトープをコードするＡｄＨｕ５複製欠損ベクターでのＢａｌｂ／ｃマウスの免疫化は、末梢において耐久性のあるＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を刺激する。図１Ａは、ＭＨＣ－１結合性ＣＴ２６特異的がんエピトープを発現するＡｄＨｕ５ベクターの作製に用いられる構築物の概略図である。図１Ｂは、ＡＨ１（左）およびＡｄ－Ｉ８Ｖ（右）ワクチン接種されたマウス由来の血液における％ＣＤ８＋ ＡＨ１テトラマー＋（ｔｅｔ＋） 細胞を示すＦＡＣＳプロットである。図１Ｃは、２つの独立した実験からの７日目（左）および５０日目（右）における血液中のＡＨ１テトラマー特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を示す図である。図１Ｄは、同じ試料由来の血液におけるＣＤ８＋ ＡＨ１－ｔｅｔ＋（左）およびＡＨ１－ｔｅｔ－（右）集団の示されたマーカーの存在を示すＦＡＣＳプロットである。図１Ｅは、２つの独立した実験からの７日目（左）および５０日目（右）における同じ群由来のＡＨ１－ｔｅｔ－ ＣＤ８＋ Ｔ細胞と比較したＡＨ１－ｔｅｔ＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の表現型を示す図である。Ｇｅｏ Ｍ ＦＩ＝幾何平均蛍光強度。膨張性メモリＡＨ１特異的Ｔ細胞は、Ａｄ－ＡＨ１での予防的ワクチン接種後も治療的ワクチン接種後も、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６腫瘍成長の阻害を示す。（Ａ）予防的ワクチン接種（Ｐ１およびＰ２の２回、独立して実施された）および治療的ワクチン接種（Ｔ１）についての実験設定を示す図である。星は、触知できる腫瘍の存在を示す。（Ｂ～Ｄ）予防的（Ｐ１およびＰ２）（ＢおよびＣ）および治療的ワクチン接種設定（Ｔ１）（Ｄ）における異なる群（群あたりＮ＝５）についての腫瘍成長曲線を示す図である。Ｔ１において、矢印は、ワクチン接種の時点を示す。Ａｄ－ＡＨ１（１×１０８ＩＵ）でワクチン接種されたマウスは緑色、Ａｄ－ＡＨ１ Ｌｏｗ（１×１０７ＩＵ）はオレンジ色、Ａｄ－ＡＨ１（１×１０８ＩＵ）＋Ａｄ－ＧＳＷ１１（１×１０８ＩＵ）は赤色、Ａｄ－ＧＳＷ１１（１×１０８ＩＵ）は薄紫色、Ａｄ－Ｉ８Ｖ（１×１０８ＩＵ）は灰色、ナイーブマウスは黒色で示されている。ＴＦ＝腫瘍なし。（Ｅ、Ｇ、Ｌ）曝露後１８日目における群間での腫瘍サイズの統計的有意差を示す図である。点は、個々のマウスを示す。（Ｆ、Ｈ、Ｊ）グラフは、腫瘍が明らかな腫瘍成長を示す日（対照については曝露後７日目、Ａｄ－ＡＨ１ワクチン接種マウスについては曝露後１８日目）からの線形回帰により決定された腫瘍成長曲線の傾きを示す。（Ｋ）腫瘍成長速度は、比成長速度を決定するように再計算された。移植と人道的なエンドポイントとの間の腫瘍成長速度は、以下の方程式を用いて計算された比成長速度（ＳＧＲ、％／日）のパラメータを用いて定量化された：［１５］ＳＧＲ＝ｌｎ（Ｖ２／Ｖ１）／（ｔ２－ｔ１）、式中、Ｖ１およびＶ２は、移植後１日目（Ｖ１は０．０１ｍｍに固定された）（ｔ１＝０日目）およびエンドポイント（ｔ２）、それぞれにおける腫瘍体積である。ＡＨ１特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、腫瘍と脾臓の間で存在量および表現型の両方が異なる。（Ａ）Ａｄ－ＡＨ１ワクチン接種マウス由来の腫瘍（上部パネル）および脾臓（下部パネル）における％ＣＤ８＋ ＡＨ１－ｔｅｔ＋ 細胞を示す代表的なＦＡＣＳプロット。陰性対照について、腫瘍および脾臓試料が、完全な範囲の蛍光色素コンジュゲート型抗体、および腫瘍試料についての無関係のＨ２－Ｌｄ結合テトラマー（ｐｐ８９）または脾臓試料についてのテトラマーなし（ｔｅｔなし）を用いて染色された。（Ｂ）グラフは、予防的（左パネル）および治療的（右パネル）ワクチン接種マウスからの腫瘍（上部パネル）および脾臓（下部パネル）における％ＣＤ８＋ ＡＨ１－ｔｅｔ＋ 細胞を示す。（Ｃ）予防的ワクチン接種マウス（Ａｄ－ＡＨ１）および対照マウス（Ａｄ－Ｉ８Ｖおよびナイーブ）からの腫瘍および脾臓におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の表現型を示すヒートマップ。細胞における値は、２つの独立した実験（Ｎ＝５～１０）の平均を示す。幾何的ＭＦＩにより定量化されたマーカーは、０～１００％スケールに標準化されている。（Ａ）Ａｄ－ＡＨ１ワクチン接種マウス由来の腫瘍において、制御性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ ＦｏｘＰ３＋ 細胞）の存在は、予防的ワクチン接種後（左）も治療的ワクチン接種後（右）も対照マウスと比較して低いように思われる。Ａｄ－ＡＨ１およびＡｄ－ＡＨ１＋Ａｄ－ＧＳＷ１１ワクチン接種マウスからのデータはグループ化され、同様に、Ａｄ－Ｉ８Ｖワクチン接種マウスおよびナイーブマウスがグループ化された（それぞれ、ワクチン接種および対照により示されている）。（Ｂ）ＡｄＨｕ５－ＡＨ１－ＭＧ免疫化は、腫瘍におけるＴｒｍ ｔｅｔ＋ 細胞のパーセンテージを増加させる。単独かまたは組み合わせてのＡｄＨｕ５－ＡＨ１－ＭＧで免疫されたマウスは、対照マウス（ナイーブまたは無関係のＡｄＨｕ５構築物（ＡｄＨｕ５－Ｉ８Ｖ－ＭＧまたはＡｄＨｕ５－ＧＳＷ１１）で免疫された）と比較してレジデントメモリ表現型を有する腫瘍におけるＡＨ－１特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（ＴＩＬ）のパーセンテージの増加を示している。ＡｄＨｕ５－ＡＨ１－ＭＧ免疫化は、腫瘍成長の間、機能的なままである、脾臓におけるＡＨ－１＋ ＣＤ８ Ｔ細胞を誘導する。脾細胞およびＴＩＬを、ＡＨ－１ペプチドで刺激して、ＩＦＮ－ガンマ分泌に基づいたそれらの細胞傷害性潜在能力を測定した。免疫化動物由来のＡＨ－１ペプチド特異的脾細胞は、ペプチド刺激に応答することができる（ＡおよびＢ）。対照的に、ＴＩＬにおけるＣＤ８ Ｔ細胞は、ペプチド刺激に応答しなかった（ＣおよびＤ）；しかしながら、ＰＭＡ－イオノマイシンに応答して分泌されたＩＦＮ－ｇのレベルもまた低く、腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞下方制御の全般的な状態を示している。（Ａ）図は、各動物（点で示されている）についての腫瘍成長曲線の傾きと血液（左）、脾臓（中央）におけるＣＤ８＋ ＡＨ－１特異的Ｔ細胞のパーセンテージ、および腫瘍におけるＣＤ８＋ ＡＨ１ ｔｅｔ＋ 細胞の絶対数（右）との間での相関を示す。データは、２つの独立した予防的実験（Ｐ１およびＰ２）および単一の治療的実験（Ｔ１）について示されている。より低い腫瘍成長速度が、腫瘍曝露後の脾臓および血液におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞のレベルの増加と相関しているが、腫瘍におけるＡＨ－１特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の絶対数とは弱く相関している。（Ｂ）は、比成長速度に関する様々なコンパートメント由来の抗原特異的細胞の比較を示す。（Ａ）完全長ｇｐ９０をコードするＡｄＨｕ５ベクター（ＡｄＨｕ５－ｇｐ９０ＦＬ）での治療的免疫化は、類似したレベルの腫瘍制御を与えない。各群における腫瘍の比成長速度は、Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて比較された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５。（Ｂ）治療的および予防的免疫化により腫瘍を排除したマウスは、循環中のＡＨ－１特異的細胞を有し続けている。６カ月前に腫瘍を完全に排除したマウスの血液がサンプリングされ、テトラマー染色によりＡＨ１＋ ＣＤ８ Ｔ細胞について染色された。ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ミニ遺伝子構築物で免疫されたＨＨＤマウスは、膨張性メモリ表現型を有するＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ Ｔｅｔ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞の長命の循環する集団を発生した。（Ａ） ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ Ｔｅｔ＋ 細胞のレベルは、ＨＨＤマウスの群（群あたりＮ＝４～５）が１×１０８ＩＵ ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１ｍｉｎｉまたは１×１０９Ｉ．Ｕ．ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１－ＦＬで免疫された後の血液においてテトラマー染色により測定された。用いられた構築物の概略図が示されている。これらの細胞は、（Ｂ）メモリサブセットを決定するためにＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌ、膨張性細胞のマーカー（Ｃ）ＣＸ３ＣＲ１および（Ｄ）ＫＬＲＧ－１、ならびに疲弊のマーカー（Ｅ）ＰＤ－１、（Ｆ）Ｔｉｍ３、および（Ｇ）Ｌａｇ－３に関して、表面染色により表現型を決定された。示された結果は、２つの独立した実験の１つからの群あたり４～５匹のマウスからである。ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ミニ遺伝子構築物で免疫されたＨＨＤマウスは、膨張性メモリ表現型を有するＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ Ｔｅｔ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞の長命の循環する集団を発生した。（Ａ） ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ Ｔｅｔ＋ 細胞のレベルは、ＨＨＤマウスの群（群あたりＮ＝４～５）が１×１０８ＩＵ ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１ｍｉｎｉまたは１×１０９Ｉ．Ｕ．ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１－ＦＬで免疫された後の血液においてテトラマー染色により測定された。用いられた構築物の概略図が示されている。これらの細胞は、（Ｂ）メモリサブセットを決定するためにＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌ、膨張性細胞のマーカー（Ｃ）ＣＸ３ＣＲ１および（Ｄ）ＫＬＲＧ－１、ならびに疲弊のマーカー（Ｅ）ＰＤ－１、（Ｆ）Ｔｉｍ３、および（Ｇ）Ｌａｇ－３に関して、表面染色により表現型を決定された。示された結果は、２つの独立した実験の１つからの群あたり４～５匹のマウスからである。ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ミニ遺伝子の単回投与でプライムされたマウスは、腫瘍曝露後、より高いパーセンテージの循環ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５ Ｔｅｔ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞を発生し、腫瘍成長のより良い制御を示している。（Ａ）１×１０８ＩＵ ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１ｍｉｎｉかまたは１×１０９Ｉ．Ｕ．ＡｄＨｕ５－ＮＹ－ＥＳＯ－１－ＦＬのいずれかでの免疫化後５３日目（実線）または９９日目（破線）において、動物に１×１０６（実線））かまたは５×１０５（破線）のいずれかのＨＨＤ－ＮＹ－ＥＳＯ－１肉腫細胞を皮下（ｓ．ｃ）注射した。陰性対照として、マウスの群を１×１０８Ｉ．Ｕ．の無関係のＡｄＨｕ５－ミニ遺伝子構築物で免疫するか（Ｎ＝５）またはナイーブのままにしてお