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JP-2026077646-A - 腫瘍抗原特異的Ｔ細胞について濃縮されたＴＩＬ製品を生成するためのプロセス

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Abstract

【課題】腫瘍抗原特異的Ｔ細胞について濃縮されたＴＩＬ製品を生成するためのプロセスの提供。 【解決手段】本発明は、増加した治療有効性を有する治療用ＴＩＬ集団を調製するためにＴＩＬを再プログラミングするための改善及び／又は短縮されたプロセス及び方法を提供する。そのような再プログラミングされたＴＩＬは、治療用処置レジメンでの使用を見出す。 【選択図】なし

Inventors

  • シャルティエ－クルト，セシル
  • リッチピチャイ，クリット

Assignees

  • アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20260129
Priority Date
20180108

Claims (20)

  1. 腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法であって、 （ｉ）患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること； （ｉｉ）ＩＬ－２及び任意選択によりＯＫＴ－３を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することにより、第１の拡大培養を実施して第２のＴＩＬ集団を生じさせること； （ｉｉｉ）前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することにより、第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせること、ここで、前記第３のＴＩＬ集団は、前記第２のＴＩＬ集団よりも数において少なくとも１００倍多く、前記第２の拡大培養は、前記第３のＴＩＬ集団を得るために少なくとも１４日間にわたって実施され、前記第３のＴＩＬ集団は、治療用ＴＩＬ集団である；及び （ｉｖ）前記第２及び／又は第３のＴＩＬ集団を、転写因子（ＴＦ）及び／又はタンパク質発現を一過性に変化させることができる他の分子に曝露すること、ここで、前記ＴＦ及び／又はタンパク質発現を一過性に変化させることができる他の分子は、腫瘍抗原の変化した発現及び／又は前記治療用ＴＩＬ集団における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の数の変化を提供する； を含む方法。
  2. （ｖ）前記第３のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ－２、追加のＯＫＴ－３及び追加のＡＰＣを補充することにより、追加の第２の拡大培養をステップ（ｉｖ）前又は後に実施することを更に含み、前記追加の第２の拡大培養は、ステップ（ｉｉｉ）で得られたよりも大きい治療用ＴＩＬ集団を得るために少なくとも１４日間にわたって実施され、前記より大きい治療用ＴＩＬ集団は、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の数の変化を示す、請求項１に記載の方法。
  3. 腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法であって、 （ａ）患者から得られた腫瘍サンプルを複数の腫瘍断片に処理することにより、前記患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること； （ｂ）前記腫瘍断片を閉鎖系に添加すること； （ｃ）ＩＬ－２及び任意選択によりＯＫＴ－３を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することにより、第１の拡大培養を実施して第２のＴＩＬ集団を生じさせること、ここで、前記第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団を得るために約３～１４日間にわたって実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、前記第１のＴＩＬ集団よりも数において少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は、前記系を開放することなく行われる； （ｄ）前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することにより、第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせること、ここで、前記第２の拡大培養は、前記第３のＴＩＬ集団を得るために約７～１４日間にわたって実施され、前記第３のＴＩＬ集団は、治療用ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡大培養は、第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は、前記系を開放することなく行われる； （ｅ）前記第２及び／又は第３のＴＩＬ集団を、転写因子（ＴＦ）及び／又はタンパク質発現を一過性に変化させることができる他の分子に曝露すること、ここで、前記ＴＦ及び／又はタンパク質発現を一過性に変化させることができる他の分子は、腫瘍抗原の変化した発現及び／又は前記治療用ＴＩＬ集団における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の数の変化を提供する； （ｆ）ステップ（ｄ）から得られた前記治療用ＴＩＬ集団を回収すること、ここで、ステ ップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行は、前記系を開放することなく行われる；及び （ｇ）ステップ（ｅ）からの前記回収されたＴＩＬ集団を輸注バッグに移すこと、ここで、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行は、前記系を開放することなく行われる； を含む方法。
  4. 凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）における前記回収されたＴＩＬ集団を含む前記輸注バッグを凍結保存するステップを更に含む、請求項３に記載の方法。
  5. 前記凍結保存プロセスは、回収されたＴＩＬ集団と凍結保存培地との１：１の比率を使用して実施される、請求項４に記載の方法。
  6. 前記抗原提示細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である、請求項４に記載の方法。
  7. 前記ＰＢＭＣは、照射され、且つ同種異系である、請求項６に記載の方法。
  8. 前記ＰＢＭＣは、ステップ（ｄ）において９～１４日目のいずれかに細胞培養物に添加される、請求項６に記載の方法。
  9. 前記抗原提示細胞は、人工抗原提示細胞である、請求項６に記載の方法。
  10. ステップ（ｅ）における前記回収は、膜ベースの細胞処理系を使用して実施される、請求項３に記載の方法。
  11. ステップ（ｅ）における前記回収は、LOVO細胞処理系を使用して実施される、請求項３に記載の方法。
  12. 前記複数の断片は、約４～約５０個の断片を含み、各断片は、約２７ｍｍ ３ の容積を有する、請求項３に記載の方法。
  13. 前記複数の断片は、約１３００ｍｍ ３ ～約１５００ｍｍ ３ の総容積を有する約３０～約６０個の断片を含む、請求項３に記載の方法。
  14. 前記複数の断片は、約１３５０ｍｍ ３ の総容積を有する約５０個の断片を含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記複数の断片は、約１グラム～約１．５グラムの総質量を有する約５０個の断片を含む、請求項１に記載の方法。
  16. 前記細胞培養培地は、Ｇコンテナ及びXuri細胞培養バッグからなる群から選択される容器内に提供される、請求項３に記載の方法。
  17. ステップ（ｄ）における前記細胞培養培地は、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－２１を更に含む、請求項３に記載の方法。
  18. ＩＬ－２濃度は、約１０，０００ＩＵ／ｍＬ～約５，０００ＩＵ／ｍＬである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. ＩＬ－１５濃度は、約５００ＩＵ／ｍＬ～約１００ＩＵ／ｍＬである、請求項１７に記載の方法。
  20. ＩＬ－２１濃度は、約２０ＩＵ／ｍＬ～約０．５ＩＵ／ｍＬである、請求項１７に記載の方法。

Description

関連出願の相互参照 [0001] 本出願は、２０１８年１月８日に提出された米国仮特許出願第６２／６１４，８８７号、２０１８年４月２７日に提出された米国仮特許出願第６２／６６４，０３４号、２０１８年５月９日に提出された米国仮特許出願第６２／６６９，３１９号、２０１８年７月１３日に提出された米国仮特許出願第６２／６９７，９２１号、２０１８年９月２１日に提出された米国仮特許出願第６２／７３４，８６８号及び２０１８年１１月３０日に提出された米国仮特許出願第６２／７７３，７１５号に対する優先権を主張し、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。 配列表 [0002] 本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体は、参照により本明細書に組み込まれる。前記ＡＳＣＩＩの写しは、２０１９年１月７日に作成され、116983-5034-WO_ST25.txtという名称であり、１２２キロバイトのサイズである 。 発明の背景 [0003] 腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の養子移植を用いたかさ高い抵抗性の癌の処置は、予後不良の患者に対する治療への強力なアプローチとなる。Gattinoni, et al., Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 383-393。免疫療法の成功には多量のＴＩＬが必要であり、商業化に向けてロバストで信頼性のある方法が求められている。これは、細胞拡大培養に伴う技術上、物流上及び規制上の問題に起因して実現が課題となっている。ＩＬ－２ベースのＴＩＬ拡大培養、それに続く「急速拡大培養法」（ＲＥＰ）は、その速さ及び効率から、ＴＩＬ拡大培養に好ましい方法となりつつある。Dudley, et al., Science 2002, 298, 850-54；Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-57；Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-39；Riddell, et al., Science 1992, 257, 238-41；Dudley, et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42。ＲＥＰは、１４日の期間でＴＩＬの１，０００倍の拡大をもたらすことができるが、それには、フィーダー細胞として、多くの場合に複数のドナーからの大過剰の（例えば、２００倍の）照射した同種異系末梢血単核球（ＰＢＭＣ、単核球（ＭＮＣ）としても知られる）並びに抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び高用量のＩＬ－２が必要である。Dudley, et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42。Ｒ ＥＰ手順を経たＴＩＬは、黒色腫患者において宿主免疫抑制後に養子細胞療法の成功をもたらしている。現行の注入適合パラメータは、ＴＩＬの組成（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８又はＣＤ４陽性）の読み取り並びにＲＥＰ産物の拡大倍数及び生存率に依存するものである。 図面の簡単な説明 [00135]プロセス２Ａ、ＴＩＬ製造の２２日間プロセスの実施形態の概略図を示す。 [00136]ＴＩＬ製造のための１Ｃプロセス及び２Ａプロセスの実施形態の比較を示す。 [00137]１Ｃプロセスのタイムラインを示す。 [00138]より高い細胞数のために、投与及び共療法ステップを含む、ＴＩＬ製造のためのプロセス２Ａを使用したＴＩＬ療法の実施形態のプロセスを示す。 [00139]より低い細胞数のために、投与及び共療法ステップを含む、ＴＩＬ製造のためのプロセス２Ａを使用したＴＩＬ療法の実施形態のプロセスを示す。 [00140]２Ａプロセスの実施形態の詳細な概略図を示す。 [00141]凍結保存ステップを含む２Ａプロセスの実施形態の主要なステップを示す。 [00141]凍結保存ステップを含む２Ａプロセスの実施形態の主要なステップを示す。 [00141]凍結保存ステップを含む２Ａプロセスの実施形態の主要なステップを示す。 [00142]ステップＡ～Ｆの概要を提供する例示的なプロセス２Ａのチャートである。 [00143]プロセス２Ａデータ収集計画のプロセスフローチャートである。 [00144]急速拡大培養プロトコル（ＲＥＰ）の例示的な実施形態のスキームである。到着すると、腫瘍は、断片化され、１１日間、ＴＩＬ拡大培養（プレＲＥＰ拡大培養）を行うため、ＩＬ－２を含むG-Rexフラスコに入れられる。トリプルカクテル研究では、プレＲＥＰの開始時にＩＬ－２／ＩＬ－１５／ＩＬ－２１が追加される。急速拡大培養プロトコル（ＲＥＰ）の場合、ＴＩＬは、１１日間のＲＥＰ拡大培養のためにフィーダー及びＯＫＴ３で更に培養される。 [00145]凍結保存ＴＩＬの代表的な製造プロセス（約２２日間）である。 [00146]プロセス２Ａ、ＴＩＬ製造の２２日間プロセスの実施形態の概略図を示す。 [00147]プロセス１Ｃ及びプロセス２Ａの例示的な実施形態からのステップＡ～Ｆの比較表である。 [00148]プロセス１Ｃの実施形態とプロセス２Ａの実施形態との詳細な比較である。 [00149]凍結保存ＴＩＬ製造プロセスの実施形態の説明（２２日間）である。 [00150]Ｇｅｎ １からＧｅｎ ２へのプロセス改善の表である。 [00151]Ｇｅｎ ２凍結保存ＬＮー１４４製造プロセスのスキームである。 [00152]プロセス２Ａ、ＴＩＬ製造の２２日間プロセスの実施形態の概略図を示す。 [00153]重力血液フィルターの下部（単一ライン）へのＴＩＬ懸濁液移送パックの無菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00154]GRex100MCSから「上清」移送パックへの赤い培地の取り出しラインの無菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00155]セルコネクト装置の単一スパイク（Ｂ）を（Ｇ）で4S-4M60マニホールドの４スパイク端に置き換える、4S-4M60のCC2セルコネクトへの溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00156]4S-4M60のオスのルアーエンドの１つへのリピーター流体移送セットの溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00157]LOVO原料（source）バッグへの重力血液フィルターの長い終端の無菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00158]フィルターの２つの供給源ラインの１つの、「プールされたＴＩＬ懸濁液」収集バッグへの無菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00159]セルコネクト装置の単一スパイク（Ｂ）を（Ｇ）で4S-4M60マニホールドの４スパイク端に置き換える、4S-4M60のCC2セルコネクトへの滅菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00160]４つのオスルアーエンド（Ｅ）の１つを各バッグに交換する、ステップ８．１４．８で準備したハーネスへのＣＳ７５０クライオバッグの滅菌溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00161]4S-4M60のスパイクへのＣＳ－１０バッグの溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00162]ステップ８．１４．１０で準備した装置における残りのスパイク（Ａ）への「製剤化されたＴＩＬ」バッグの溶接（実施例１６のプロセスノート５．１１を参照されたい）の概略図を示す。 [00163]空の未透過液バッグ及びＣＳ－１０バッグを取り外す、Ｆでのヒートシール（実施例１６のプロセスノート５．１２を参照されたい）の図を示す。 [00164]一過性の遺伝子編集のためのＴＩＬプロセスの実施形態の概略図を示す。 [00165]一過性の遺伝子編集のためのＴＩＬプロセスの実施形態の概略図を示す。 [00166]一過性の遺伝子再プログラミングの目的で、ＲＮＡ移動ステップのＴＩＬプロセスへの組み込みに関する概略図を示す。 [00167]ＴＩＬの遺伝子発現を一過性に変化させるために提案された遺伝子工学アプローチの概要を示す。 [00168]腫瘍部位へのＴＩＬ輸送を改善するために一過性の遺伝子発現変化を利用できる、ケモカイン及びケモカイン受容体の概要を示す。 [00169]腫瘍部位へのＴＩＬ輸送を改善するために一過性の遺伝子発現変化を利用できる、ケモカイン及びケモカイン受容体の第２の概要を示す。 [00170]例示的な自己送達性リボ核酸（ｓｄ－ＲＮＡ）の実施形態の概略的な構造図を示す。Ligtenberg, et al., Mol. Therapy, 2018を参照されたい。 [00171]例示的なｓｄ－ＲＮＡの実施形態の概略的な構造図を示す。米国特許出願公開第２０１６／０３０４８７３号を参照されたい。 [00172]特別に設計されたプライマーを使用したＰＣＲによって得られるＤＮＡテンプレートを使用した、ｍＲＮＡ合成の例示的なスキームを示す。フォワードプライマーは、インビトロ転写に適したバクテリオファージプロモーターを含有し、リバースプライマーは、ポリＴストレッチを含有する。ＰＣＲ産物は、インビトロ転写に適した発現カセットである。新生ｍＲＮＡの３’末端にあるポリアデニル酸は、異常なＲＮＡランオフ合成及び二本鎖ＲＮＡ産物の生成を防止できる。転写の完了後、ポリＡテールは、ポリ（Ａ）ポリメラーゼで更に伸長できる。（米国特許第８，８５９，２２９号を参照されたい。） [00173]ＰＤＣＤ１、ＴＩＭ３、ＣＢＬＢ、ＬＡＧ３及びＣＩＳＨのＳｄ－ｒｘＲＮＡ媒介サイレンシングを示すグラフである。 [00174]ＴＩＬにおけるＳｄ－ｒｘＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシング；例示的なプロトコルである。例示的な腫瘍は、黒色腫（新鮮又は凍結；ｎ＝６）、乳房腫瘍（新鮮又は凍結；ｎ＝５）、肺腫瘍（ｎ＝１）、肉腫（ｎ＝１）及び／又は卵巣（ｎ＝１）を含む。 [00175]タンパク質発現の低減は、５つの標的の４つで検出された。ＰＤ１：ｎ＝９、ＴＩＭ３：ｎ＝８、ＬＡＧ３／ＣＩＳＨ：ｎ＝２、Ｃｂｌ－ｂ ｎ＝２。プレＲＥＰ黒色腫及び新鮮乳癌ＴＩＬからの調製物、２ｕＭ ｓｄ－ｒｘＲＮＡ。％ＫＤは、（１００－（１００×（目的の遺伝子／ＮＴＣ）））として計算される。 [00176]Ｓｄ－ｒｘＲＮＡ誘発性ＫＤは、時間及び刺激と共に下降した。ｎ＝３、プレＲＥＰ黒色腫ＴＩＬからの調製物、