JP-2026077670-A - 免疫調節性Ｍ２単球を選択的に低減することによってがんを治療し、治療的免疫を増強するための方法および組成物

Abstract

【課題】本開示は、免疫調節性Ｍ２単球を選択的に低減することによってがんを治療し、治療的免疫を増強するための方法および組成物を提供する。 【解決手段】本開示に係る医薬組成物は、有効量のインスリン様成長因子１受容体アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）を含み、該医薬組成物を、循環中のＭ２細胞、腫瘍微小環境中のＭ２細胞、または未分化単球をＭ２細胞へと極性化する血清を有する対象に投与することにより、対象におけるＭ２細胞の数が低減される。 【選択図】なし

Inventors

• アンドリューズ、デビッド ダブリュ．
• フーパー、ダグラス シー．

Assignees

• トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ

Dates

Publication Date

20260513

Application Date

20260206

Priority Date

20150410

Claims (1)

1. 有効量のインスリン様成長因子１受容体アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）を含む医薬組成物であって、 前記医薬組成物を、循環中のＭ２細胞、腫瘍微小環境中のＭ２細胞、または未分化単球をＭ２細胞へと極性化する血清を有する対象に投与することにより、前記対象におけるＭ２細胞の数が低減される、医薬組成物。

Description

本開示は、Ｍ２細胞を、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）に特異的なアンチセンス核酸で標的化することによって選択的に低減することにより、がんを治療し、治療的免疫を増強するための方法および組成物に関する。 単球は、骨髄における骨髄前駆細胞に由来する白血球の１種である。単球は骨髄から末梢血流に侵入し、後に組織へ遊走する。組織内で局所成長因子、炎症促進性サイトカイン、および微生物化合物への曝露後、単球はマクロファージおよび樹状細胞に分化する。単球前駆物質由来のマクロファージは、古典的に極性化された（Ｍ１）マクロファージおよび非古典的に活性化された（Ｍ２）マクロファージへの特異的分化を経る。通常、マクロファージは免疫系における３つの主な機能を果たす。これらは、食作用、抗原提示、およびサイトカイン提示である。さらに、特定タイプのがん（例えば、乳がん、星状細胞腫、頭頸部扁平上皮細胞がん、乳頭状腎細胞がんタイプＩＩ、肺がん、膵がん、胆嚢がん、直腸がん、神経膠腫、古典的ホジキンリンパ腫、卵巣がん、および結腸直腸がんなど）は、腫瘍内部のＭ２様マクロファージおよび末梢において循環する類似のＭ２単球のレベル上昇を呈する。 神経膠腫を有する患者の末梢におけるＣＤ１６３＋細胞の発現を示す図。単球のこのサブセットは腫瘍の存在によって開始され、この亜集団はその血管新生および免疫抑制性の性質に起因して腫瘍の成長および浸潤を支持する。神経膠腫のグレードは、Ｍ２単球マーカを有する細胞の蓄積および活性に関連する。この集団の腫瘍内部でのＭ２様ＣＤ１６３＋マクロファージおよび循環する末梢における類似のＭ２単球の存在はまた、任意の炎症促進性抗腫瘍ワクチンの方策を無効にする。ａ．ＷＨＯグレードＩＩＩ星状細胞腫内でのＣＤ１４＋細胞における増加を反映するフローサイトメトリーが示されている。ｂ．ＷＨＯグレードに従ってＣＤ１６３＋細胞のレベルを比較するグラフ表示。グレードＩＩＩおよびグレードＩＶの腫瘍は、正常対象またはＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫のいずれかと比べると、ＰＭＢＣにおける有意に異なる％単球を示す。細胞型による、インスリン様成長因子１受容体に特異的な標識されたアンチセンス核酸（ＩＦＧ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）の取り込みを示す図。神経膠腫患者における腫瘍および対応血液試料に由来するマクロファージ（ＣＤ１４＋）は、インスリン様成長因子１型受容体に特異的なアンチセンス（ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）を貪欲に取り込む。免疫型による、インスリン様成長因子１受容体に特異的な標識されたアンチセンス核酸（ＩＦＧ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）の取り込みを示す図。神経膠腫患者における腫瘍および対応血液試料に由来するマクロファージ（ＣＤ１４＋）は、インスリン様成長因子１型受容体に特異的なアンチセンス（ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮ）を貪欲に取り込む。インスリン様成長因子１受容体（ＩＦＧ－１Ｒ）の発現を伴う細胞のフローサイトメトリーを示す図。インビトロでＭ２細胞に極性化される正常な末梢単球は、ＩＧＦ－１Ｒを、Ｍ１極性化に誘導されるマクロファージと比べて過剰発現する。さらに、ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮは、用量依存的にＭ２亜集団における細胞死を選択的に誘導する。図３ａは、ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮが、Ｍ２マクロファージの除去を、これらの細胞が優勢な状況下でそれらの腫瘍促進効果が除去され得るとともに治療的なＴｈ１免疫が救済され得るように、選択的に標的化することを詳述する。白丸は分化された刺激されていない細胞を表し、黒丸は分化され、刺激された細胞を表す。インスリン様成長因子１受容体（ＩＦＧ－１Ｒ）の発現を伴う細胞のフローサイトメトリーを示す図。インビトロでＭ２細胞に極性化される正常な末梢単球は、ＩＧＦ－１Ｒを、Ｍ１極性化に誘導されるマクロファージと比べて過剰発現する。さらに、ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮは、用量依存的にＭ２亜集団における細胞死を選択的に誘導する。図３ｂは、マクロファージの極性化による、ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮで治療後での単球サブセット分布における差異を示す。治療経過全体を通じての患者における腫瘍に関連したＣＤ１６３＋細胞の定量化を示す図。５４００倍視野の平均および標準偏差がアペリオ（Ａｐｅｒｉｏ）定量化によって測定された。１回目の手術、１回目の再発、２回目の再発、および剖検の４つの時点と、ｙ軸上にアペリオ（Ａｐｅｒｉｏ）ＣＤ１６３＋細胞が提供される。図４は、本明細書に開示される方法が、標準治療が奏効していない患者においてＣＤ１６３＋細胞を低減するのに有効であることを示す。６つの継続的な多形神経膠芽腫標本におけるＩＧＦ－１Ｒについての免疫組織化学を示す図。すべての腫瘍がＩＧＦ－１Ｒの免疫反応性を示した。ＩＧＦ－１Ｒの免疫反応性は、腫瘍微小環境中での１つ以上のＩＧＦ－１Ｒを発現する細胞の存在を示し、がん治療における標的としてＩＧＦ－１Ｒを識別する。ＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮの２つの異なる配列ロットの質量分析を示す図。ａ－ｃ：ＤＷＡ配列のアヴェシア（Ａｖｅｃｉａ）ロット産物；ｄ－ｆ：ノーベル（ＮＯＢＥＬ）配列のＧｉｒｉｎｄｕｓロット産物；ａ，ｄ：凍結乾燥粉末形態でのＡＳ ＯＤＮの安定性；ｂ，ｅ：滅菌生理食塩水中の製剤；ｃ，ｆ：滅菌生理食塩水中の製剤。ＩＭＶ１１８ロット番号ＧＡＩ－０８－０６０－Ｓ３－Ｂ１の安定性結果は、最小の分解生成物が約３００Ｄａであることを示し、それ故、測定された質量スペクトルが５７０９±３００Ｄａの要件およびロット放出から現在までの貯蔵における許容できる安定性を満たす。アヴェシア（Ａｖｅｃｉａ）配列（ＤＷＡ）は、９年間にわたる安定性を示す。循環ＣＤ６８＋ＣＤ１６３＋細胞が、動物において、ＧＬ２６１の中枢神経系への移植後に１用量のノーベル（ＮＯＢＥＬ）（配列番号１）の全身（腹腔内）投与を受けてから少なくとも１４日目に減少することを示す図。ノーベル（ＮＯＢＥＬ）は、開始メチオニンコドンから下流の６つのヌクレオチドで始まる、１８－ｍｅｒのホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドのＩＧＦ１－Ｒアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＡＳ ＯＤＮ）である。ノーベル（ＮＯＢＥＬ）は、フロースルー技術を用いての閉じた化学的カラム反応器を備えたシンセサイザー内で、十分に確立された方法論を用いることによる固相有機合成によって作製される。固体支持体上の各合成サイクルシークエンスは複数のステップからなり、それらは完全長オリゴヌクレオチドが確立されるまで順次実施される。次に、ノーベル（ＮＯＢＥＬ）は凍結乾燥され、スクリューキャップを有するＨＤＰＥ容器内にパッケージされ、次に－８０℃で貯蔵するため、５ｍＬのマイラー（Ｍｙｌａｒ）パウチ内部で真空ヒートシールされる。使用前、凍結乾燥粉末は１００ｍｇ／ｍＬの溶液が得られるまで生理食塩水に溶解される。得られた溶液は、０．２２μｍの膜フィルターを通して滅菌濾過される。－８０℃での貯蔵前、１ｍＬのアリコートがＵＳＰタイプ１（ＵＳＰ Ｔｙｐｅ １）ガラスバイアル内に満たされ、適切なゴム栓とアルミニウムキャップで密封される。 この実験においては、白血球がビオチン化抗マウスＣＤ１６３（ビオバイト（Ｂｉｏｒｂｙｔ））で染色され、洗浄され、二次ストレプトアビジン－ＡＰＣが添加された。２回の洗浄および固定の後、細胞は、透過処理され、抗マウスＣＤ６８－ＰＥで細胞内染色され、続いて、膜を閉じるため、パームバッファ（ｐｅｒｍ－ｂｕｆｆｅｒ）で２回洗浄され、最終ＰＢＳ洗浄が行われた。試料は、ミリポアグアバ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｇｕａｖａ）フローサイトメータ上を流れ、フロウジョ（ＦｌｏｗＪｏ）を用いて分析された。屠殺時に採取された試料は、ノーベル（ＮＯＢＥＬ）の腹腔内投与後のＷＢＣ集団における相当な変化を示す。ａ．ＰＢＳ腹腔内注射対照；ｂ．ノーベル（ＮＯＢＥＬ）腹腔内注射。腫瘍産生前でのノーベル（ＮＯＢＥＬ）（配列番号１）単独の投与がＧＬ２６１細胞成長の開始を遅延させる上で有効であることを示す図。溶媒の腹腔内投与（ＰＢＳ）を受けたＣ５７およびＴｂｅｔノックアウト動物のそれぞれ６０％および１００％が腫瘍を発生させるのに対し、ノーベル（ＮＯＢＥＬ）の腹腔内投与後ではＣ５７およびＴｂｅｔノックアウトマウスのそれぞれ２０％および５０％が腫瘍を発生させる。有意性はログランク検定を用いて評価された（＊＝ｐ＜０．０５）。シトシン－ホスホロチオエート－グアノシン－ＤＮＡがＢ細胞および形質細胞様樹状細胞（ＤＣ）上に発現されるＴＬＲ９を活性化することを示す図。抗原提示細胞がＡＳ ＯＤＮを取り込み、増加した同時刺激分子を発現し、ＡＳ ＯＤＮ治療の前および後にＰＢＭＣにおいて諸レベルのＣＤ８０／８３／８６を発現することを示す図（ｍＤＣ、骨髄樹状細胞；ｐＤＣ、形質細胞様樹状細胞）。ノーベル（ＮＯＢＥＬ）（配列番号１）が、中央値蛍光強度の低下によって判定される通り、単球由来樹状細胞（ＤＣ）を活性化することを示す図。未熟ＤＣは大量の蛍光タンパク質を貪食し、（より大きいバーによって示される）より高い蛍光強度をもたらす。（活性化された）成熟ＤＣは、エンドサイトーシスを下方制御し、結果として、取り込む蛍光タンパク質が減少し、（より小さいバーによって示される）低い蛍光強度を有する。単球由来樹状細胞のＩＧＦ－１Ｒ ＡＳ ＯＤＮによる治療は、著しい用量依存性の成熟応答を示す。ＣｐＧモチーフ、５’Ｇ＊Ｇモチーフ、およびホスホロチオエート結合のすべてが樹状細胞にさらなる成熟刺激をもたらすことを示す図。ａ：未熟ＤＣは高度にエンドサイトーシスが亢進し、大量の蛍光タンパク質を貪食し（上パネル）、より高い蛍光強度をもたらす。ｂ：単球由来ＤＣが様々なＩＧＦ－１Ｒ／ＡＳ ＯＤＮ（１μｇ／ｍｌ）の存在下で２４時間インキュベートされた。ＬＰＳで治療されたＤＣ（１μｇ／ｍｌ）は、成熟における正の対照として機能した。未熟ＤＣは、大量の蛍光タンパク質を貪食し、（より大きいバーによって示される）より高い蛍光強度をもたらした。（活性化された）成熟ＤＣは、エンドサイトーシスを下方制御し、結果として、取り込む蛍光タンパク質が減少し、（より小さいバーによって示される）低い蛍光強度を有する。ＩＧＦ－１Ｒ／ＡＳ ＯＤＮ中に含まれるＣｐＧモチーフもまた、ＤＣに成熟刺激をもたらす（対照およびＬＮＡ ＤＣを参照）。ホスホロチオエート結合は、ＤＣにさらなる成熟刺激をもたらす（ノーベル（ＮＯＢＥＬ）ＤＣ）。５’Ｇ＊Ｇモチーフは、ＤＣに第３の成熟刺激をもたらす（ＤＷＡ ＰＴ ＤＣを参照）。試験されたオリゴマーは、配列番号１（ノーベル（ＮＯＢＥＬ））、配列番号１１（ＩＤＴ１２２０ホスホロチオエートＡＳ ＯＤＮ（ＩＤＴ１２２０））、配列番号１５（ＤＷＡホスホロチオエートＡＳ ＯＤＮ（ＤＷＡ ＰＴ））、配列番号１６（ＤＷＡ固定化核酸ＡＳ ＯＤＮ（ＬＮＡ））、および配列番号１７（ＤＷＡホスホジエステルＡＳ ＯＤＮ（ＤＷＡ対照））を含んだ。ａ．ＤＷＡ配列が、５’側のヘアピンループ二次構造（影付きの挿入図）を３７℃で維持し、おそらくは標的化されたｍＲＮＡ配列との塩基対合に影響すること、ｂ．ノーベル（ＮＯＢＥＬ）（配列番号１）配列が、１８℃でＭＰを有する２つの交互の二次構造に対するＣｐＧモチーフの５’側のヘアピンループ（影付きの挿入図）を３７℃で有さず、標的化された塩基対合、ひいてはＣｐＧの可能性の増加を許容することを示す図。ＧＬ２６１におけるノーベル（ＮＯＢＥＬ）（配列番号１）適定を示す図。細胞は増殖培地を有する９６ウェルプレート内に２０ｋ／ウェルで蒔かれ、４時間インキュベートされ（３７℃、５％ＣＯ２加湿）；増殖培地は除去され、所望されるＡＳ ＯＤＮ濃度を有する無血清オプティ－メム（Ｏｐｔｉ－