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JP-2026077815-A - ヒトＩＬ－４受容体に対する高親和性ヒト抗体

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Abstract

【課題】 ヒトインターロイキン－４受容体アルファ（ｈＩＬ－４Ｒα）に高い親和性（Ｋ D ）で結合し、ｈＩＬ－４及びｈＩＬ－１３活性を遮断することができる、単離された ヒト抗体又はその抗体フラグメントの提供。 【解決手段】 配列番号２７４に示されるアミノ酸配列を含むヒトインターロイキン－４受容体（ｈＩＬ－４Ｒ）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。 【選択図】 なし

Inventors

  • ジョウエル・エイチ・マーティン
  • タミー・ティー・ファン
  • ジャネット・エル・フェアハースト
  • ニコラス・ジェイ・パパドプロス

Assignees

  • リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20260218
Priority Date
20081029

Claims (16)

  1. 重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むヒトインターロイキン－４受容体（ｈＩＬ－４Ｒ）（配列番号２７４）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって： （ａ） 約１００ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ－４Ｒに対する親和性（Ｋ D ）を特徴 とする、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ； （ｂ） 約３００ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ－４Ｒに対する親和性（Ｋ D ）を特徴 とする、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ；又は （ｃ） 約５０ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ－４Ｒに対する親和性（Ｋ D ）を特徴と する、配列番号２１０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号２１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。
  2. 重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトインターロイキン－４受容体（ｈＩＬ－４Ｒ）（配列番号２７４）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって： （ａ） 配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３； （ｂ） 配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３；又は （ｃ） 配列番号２００に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３； を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。
  3. 重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、３（ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトＩＬ－４Ｒに特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合フラグメントであって、 ＨＣＤＲ１は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 －Ｘ 4 －Ｘ 5 －Ｘ 6 －Ｘ 7 －Ｘ 8 （配列番号２６５）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ 1 ＝Ｇｌｙ；Ｘ 2 ＝Ｐｈｅ；Ｘ 3 ＝Ｔｈｒ；Ｘ 4 ＝Ｐｈｅ；Ｘ 5 ＝Ａ ｓｐ又はＡｒｇ；Ｘ 6 ＝Ａｓｐ又はＳｅｒ；Ｘ 7 ＝Ｔｙｒ；そしてＸ 8 ＝Ａｌａ又はＧｌｙ であり； ＨＣＤＲ２は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 －Ｘ 4 －Ｘ 5 －Ｘ 6 －Ｘ 7 －Ｘ 8 （配列番号２６６）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ 1 ＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ 2 ＝Ｓｅｒ、Ｘ 3 ＝Ｇｌｙ、Ｔｙｒ又 はＡｒｇ、Ｘ 4 ＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＴｈｒ、Ｘ 5 ＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ 6 ＝Ｇｌｙ、Ｓ ｅｒ又はＶａｌ、Ｘ 7 ＝Ｓｅｒ又はＡｓｎ、そしてＸ 8 ＝Ｔｈｒ、Ｌｙｓ又はＩｌｅであり； ＨＣＤＲ３は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 －Ｘ 4 －Ｘ 5 －Ｘ 6- Ｘ 7 －Ｘ 8 －Ｘ 9 －Ｘ 10 －Ｘ 11 －Ｘ 12 －Ｘ 13 －Ｘ 14 －Ｘ 15 －Ｘ 16 －Ｘ 17 －Ｘ 18 （配列番号２６７）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ 1 ＝Ａｌａ、Ｘ 2 ＝Ｌｙｓ、Ｘ 3 ＝Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＴｒｐ、Ｘ 4 ＝Ｇｌｙ又はＡｒｇ、Ｘ 5 ＝Ｌｅｕ、Ｔｈｒ又はＡｒｇ、Ｘ 6 ＝Ｇｌｙ、Ａｒｇ又はＳｅｒ、Ｘ 7 ＝Ｉｌｅ又はＧ ｌｙ、Ｘ 8 ＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＴｙｒ、Ｘ 9 ＝Ｉｌｅ、Ａｓｐ又はＰｈｅ、Ｘ 10 ＝Ａｒｇ、Ｔｙｒ又はＡｓｐ、Ｘ 11 ＝Ｐｒｏ、Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ 12 ＝Ａｒｇであるか又は存在せず、Ｘ 13 ＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ 14 ＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ 15 ＝Ｇｌｙであるか又は存在せず、Ｘ 16 ＝Ｌｅｕであるか又は存在せず、Ｘ 17 ＝Ａｓｐであるか又は存在せず、そしてＸ 18 ＝Ｖａｌであるか又は存在せず； ＬＣＤＲ１は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 －Ｘ 4 －Ｘ 5 －Ｘ 6- Ｘ 7 －Ｘ 8 －Ｘ 9 －Ｘ 10 －Ｘ 11 （配列 番号２６８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ 1 ＝Ｇｌｎ、Ｘ 2 ＝Ａｓｐ、Ｓｅｒ又はＶａ ｌ、Ｘ 3 ＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ 4 ＝Ｓｅｒ、Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ 5 ＝Ａｓｎ、Ｔｙｒ又 はＩｌｅ、Ｘ 6 ＝Ｔｒｐ、Ｓｅｒ又はＴｙｒ；Ｘ 7 ＝Ｉｌｅであるか又は存在せず；Ｘ 8 ＝ Ｇｌｙであるか又は存在せず；Ｘ 9 ＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；Ｘ 10 ＝Ａｓｎである か又は存在せず；そしてＸ 11 ＝Ｔｙｒであるか又は存在せず； ＬＣＤＲ２は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 （配列番号２６９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ 1 ＝Ｌｅｕ、Ａｌａ又はＶａｌ、Ｘ 2 ＝Ａｌａ又はＧｌｙ、そしてＸ 3 ＝Ｓｅｒであり；そして ＬＣＤＲ３は、式Ｘ 1 －Ｘ 2 －Ｘ 3 －Ｘ 4 －Ｘ 5 －Ｘ 6- Ｘ 7 －Ｘ 8 －Ｘ 9 （配列番号２７０）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ 1 ＝Ｇｌｎ又はＭｅｔ、Ｘ 2 ＝Ｇｌｎ、Ｘ 3 ＝Ａｌａ又はＴ ｙｒ、Ｘ 4 ＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ 5 ＝Ｇｌｎ又はＳｅｒ、Ｘ 6 ＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＨｉ ｓ、Ｘ 7 ＝Ｐｒｏ、Ｘ 8 ＝Ｔｙｒ、Ｉｌｅ又はＴｒｐ、そしてＸ 9 ＝Ｔｈｒである、 抗体又は抗体の抗原結合フラグメント。
  4. 重鎖及び軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が、以下： （ａ） 配列番号１４８、１５０、１５２、１５６、１５８、１６０； （ｂ） 配列番号４、６、８、１２、１４、１６；及び （ｃ） 配列番号 １９６、１９８、２００、２０４、２０６、２０８ からなる群より選択される、請求項３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  5. 請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列をコードする核酸配列。
  6. 請求項５に記載の核酸配列を含むベクター。
  7. 請求項６に記載のベクターを含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントの製造のための宿主ベクターシステム。
  8. ヒトインターロイキン－４受容体アルファ（ｈＩＬ－４Ｒ）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法であって、 抗体又はフラグメントが発現する条件下で請求項７に記載の宿主ベクターシステムの細胞を増殖させること、及び発現した抗ｈＩＬ－４抗体を回収することを含む、上記方法。
  9. 宿主細胞が原核細胞又は真核細胞である、請求項８に記載の方法。
  10. 宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉ細胞又はＣＨＯ細胞である、請求項９に記載の方法。
  11. 疾患又は障害の処置のための医薬の製造における、請求項１、２、３又は４に定義される抗体又は抗原結合フラグメントの使用であって、ここで疾患又は障害がヒトインターロイキン－４（ｈＩＬ－４）活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減又は抑制される、使用。
  12. 疾患又は障害が、関節炎、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、喘息、炎症性障害、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼからなる群より選択される、請求項１１に定義される使用。
  13. 疾患又は障害が喘息又はアトピー性皮膚炎である、請求項１１に定義される使用。
  14. ヒトインターロイキン－４（ｈＩＬ－４）活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減又は抑制される、疾患又は障害を処置する方法であって、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを、それを必要とする患者に投与することを含む、上記方法。
  15. 疾患又は障害が、関節炎、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、喘息、炎症性障害、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼからなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
  16. 疾患又は障害が喘息又はアトピー性皮膚炎である、請求項１４に記載の方法。

Description

インターロイキン－４（ＩＬ－４、Ｂ細胞刺激因子又はＢＳＦ－１としても知られる）は、表面免疫グロブリンに特異的な低濃度の抗体に応答してＢ細胞の増殖を刺激するその能力でもともと特徴付けられていた。ＩＬ－４は、Ｔ細胞、肥満細胞、顆粒球、巨核球及び赤血球の増殖刺激を含む広範囲の生物学的活性を有することが示されている。ＩＬ－４は、休止Ｂ細胞におけるクラスＩＩ主要組織適合複合体分子の発現を誘導し、そして刺激されたＢ細胞によるＩｇＥ及びＩｇＧ１アイソタイプの分泌を増強する。 ＩＬ－４の生物学的活性は、ＩＬ－４の特異的細胞表面受容体により媒介される。ヒトＩＬ－４受容体アルファ（ｈＩＬ－４Ｒ）（配列番号２７４）は、例えば特許文献１、特許文献２及び特許文献３に記載される。ｈＩＬ－４Ｒに対する抗体は特許文献４及び特許文献５に記載される。 ヒト治療剤として有用な抗体の製造方法には、キメラ抗体及びヒト化抗体を生成することが含まれる（例えば特許文献６を参照のこと）。例えば、ヒト抗体を産生することができる非ヒトトランスジェニックマウスを生成する方法を記載する、特許文献７及び特許文献８を参照のこと。 ｈＩＬ－４Ｒに対する抗体を使用する方法は、特許文献９；特許文献１０；及び特許文献１１に記載される。 米国特許第５，５９９，９０５号米国特許第５，７６７，０６５号米国特許第５，８４０，８６９号米国特許第５，７１７，０７２号米国特許第７，１８６，８０９号米国特許第６，９４９，２４５号ＷＯ９４／０２６０２米国特許第６，５９６，５４１号米国特許第５，７１４，１４６号米国特許第５，９８５，２８０号米国特許第６，７１６，５８７号 以下の実施例は、本発明の方法及び組成物の作り方及び使い方の完全な開示及び記載を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明者らが自らの発明と考えるものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値（例えば量、温度など）に関して正確さを保証するための努力がなされているが、いくらかの割合を実験誤差及び偏差が占めるはずである。別段示されていなければ、部は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、そして圧力は大気圧又は大気圧付近である。 実施例１．ヒトＩＬ－４受容体に対するヒト抗体の作成 ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥTMマウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．；ＵＳ６，５９６，５４１）をヒトＩＬ－４Ｒ（ｈＩＬ－４Ｒ、配列番号２７４）、又はｈＩＬ－４Ｒ及びサル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＩＬ－４Ｒ（ｍｆＩＬ－４Ｒ、配列番号２７５）タンパク質若しくはＤＮＡの組み合わせで免疫した。最適な免疫応答を得るために、続いて動物を３～４週ごとにブーストし、そして抗抗原応答の進行を評価するために各ブーストの１０日後に採血した。 マウスが最大の免疫応答に達した場合、抗体発現Ｂ細胞を採取し、そしてマウス骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを形成した。あるいは、米国特許出願公開２００７／０２８０９４５Ａ１（参照によりその全体が本明細書に具体的に加入される）において記載されるように、抗原特異的抗体を、骨髄腫細胞への融合なしに直接Ｂ細胞から単離した。安定な組み換え抗体発現ＣＨＯ細胞株を単離された適切な組換え体から樹立した。機能的に望ましいモノクローナル抗体を、ハイブリドーマ又はトランスフェクトした細胞の馴化培地を特異性、抗原結合親和性及びｈＩＬ－４のｈＩＬ－４Ｒへの結合を遮断する効力（以下に記載される）についてスクリーニングすることにより選択した。 いくつかの抗ｈＩＬ－４Ｒ抗体を前述の方法により得、これらにはＨ４Ｈ０８３Ｐ、Ｈ４Ｈ０９４Ｐ及びＨ４Ｈ０９５Ｐ、Ｈ４Ｈ０９８Ｐ及びＨ４Ｈ０９９Ｐと命名した典型的な抗体が含まれていた。これらの典型的な抗ｈＩＬ－４Ｒ抗体、及びそれらの生物学的特性を以下の実施例においてより詳細に記載する。 実施例２．抗原結合親和性決定 ２５℃又は３７℃のいずれかで、ｈＩＬ－４Ｒに関して選択された抗体の結合親和性（ＫD）を、実時間バイオセンサー表面プラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡＣＯＲＥTM２００ ０）を使用して決定した。手短には、抗体を、ＢＩＡＣＯＲＥTMチップへの直接カップリングにより作出したヤギ抗ｈＦｃポリクローナル抗体表面上に捕捉して、捕捉抗体表面を形成した。種々の濃度（５０ｎＭから１２．５ｎＭの範囲）のモノマーｈＩＬ－４Ｒ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はダイマーｈＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃを、２５℃又は３７℃のいずれかで捕捉抗体表面上に１０μｌ／分で２．５分間注入した。抗体に対する抗原の結合及び結合複合体の解離を実時間でモニタリングした。平行解離定数（ＫD）及び解離速度定 数を、ＢＩＡ評価ソフトウェアを使用して動態解析を行うことにより確認した。ＢＩＡ評価ソフトウェアを、抗原／抗体複合体解離の半減期（Ｔ1/2）を計算するためにも使用し た。結果を表１に示す。ＮＢ：抗体－抗原結合が実験条件下で観察されなかった。コントロール：完全ヒト抗ＩＬ－４Ｒ抗体（米国特許第７，１８６、８０９号；配列番号：１０及び１２）。 カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＩＬ－４Ｒ（ｍｆＩＬ－４Ｒ）に関して選択された抗体の２５℃又は３７℃のいずれかでの結合親和性（ＫD）もま た、種々の濃度（１００ｎＭから２５ｎＭの範囲）のモノマーｍｆＩＬ－４Ｒ－ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓ（ｍｆＩＬ－４Ｒ－ｍｍｈ）又はダイマーｍｆＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃを用いて前記の実時間バイオセンサー表面プラズモン共鳴アッセイを使用して決定した。抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐのみがモノマー及びダイマー両方のｍｆＩＬ－４Ｒに２５℃にてそれぞれ５５２ｎＭ及び９．０８ｎＭのＫDで結合することができた。さらに、抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐ はまた、ダイマーｍｆＩＬ－４Ｒに３７℃にて２４．３ｎＭのＫDで結合した。Ｈ４Ｈ０ ８３ＰはダイマーｍｆＩＬ－４Ｒに対して非常に弱い結合を有していた。 抗体－抗原結合親和性をＥＬＩＳＡベースの溶液競合アッセイを使用することでも評価した。手短には、９６ウェルＭＡＸＩＳＯＲＰTMプレートを最初に５μｇ／ｍｌアビジンで終夜コーティングし、続いてＢＳＡブロッキングを１時間行った。次いでアビジンでコーティングしたプレートを２５０ｎｇ／ｍｌビオチン－ｈＩＬ４とともに２時間インキュベートした。このプレートを使用して、抗体滴定サンプル溶液中の遊離ｈＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃ（ダイマーｈＩＬ－４Ｒ）又は遊離ｈＩＬ－４Ｒ－ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓ（ｈＩＬ４Ｒ－ｍｍｈ、モノマーｈＩＬ４Ｒ）のいずれかを測定した。抗体滴定サンプルを作製するために、一定量２５ｐＭのｈＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃ又は２００ｐＭのｈＩＬ－４Ｒ－ｍｍｈのいずれかを０～約１０ｎＭの範囲の段階希釈で種々の量の抗体と予め混合し、続いて１時間室温でインキュベーションして抗体－抗原結合を平衡に到達させた。次いで平衡化サンプル溶液を、遊離ｈＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃ又は遊離ｈＩＬ－４Ｒ－ｍｍｈのいずれかの測定のためにｈＩＬ－４でコーティングしたプレートに移した。１時間の結合の後、プレートを洗浄し、そして結合したｈＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃを、ＨＲＰ結合マウス抗ｍＦｃポリクローナル抗体又はＨＲＰ結合ヤギ抗ｍｙｃポリクローナル抗体のいずれかを使用して検出した。ＩＣ50値を決定した（表２）。 ＥＬＩＳＡベースの溶液競合アッセイを使用して抗体のサルＩＬ－４Ｒに対する交差反応性も決定した。抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐは、ｍｆＩＬ－４Ｒ－ｍＦｃについて３００ｐＭのＩＣ50、そしてｍｆＩＬ－４Ｒ－ｍｍｈについて２０ｎＭのＩＣ50を示した。 実施例３．インビトロでのｈＩＬ－４及びｈＩＬ－１３の生物学的作用の中和 精製した抗ｈＩＬ－４Ｒ抗体のｈＩＬ－４Ｒ仲介細胞機能を中和する能力をインビトロで決定するためにヒトＳＴＡＴ６及びＳＴＡＴ６ルシフェラーゼレポーターを含有するよう操作したＨＫ２９３細胞株を使用するバイオアッセイを開発した。ｈＩＬ－４Ｒ誘導ルシフェラーゼ活性の阻害を以下のように決定した：細胞を９６ウェルプレートに培地中１×１０4細胞／ウェルで播種し、そして終夜３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートした。段階希釈で０～２０ｎＭの範囲の抗体タンパク質を、１０ｐＭのｈＩＬ－４又は４０ｐＭのｈＩＬ－１３のいずれかとともに細胞に加えた。次いで細胞を３７℃、５％ＣＯ2で６時 間インキュベートした。細胞応答の程度をルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で測定した。結果を表３に示す。ＮＢ：ルシフェラーゼ活性が上記の実験条件下で遮断されなかった。さらに、Ｈ４Ｈ０９８ＰはｍｆＩＬ－４Ｒ仲介細胞機能を３６０ｆＭ ｍｆＩＬ－４の存在下で１５０ｎＭのＩＣ50で遮断することができた。