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JP-2026514595-A - 複数のサプレッサートランスファーＲＮＡを含む医薬組成物

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Abstract

少なくとも５種類の異なるサプレッサートランスファーＲＮＡ、ここで、ａ）サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１種類はＵＧＡ終止コドンと塩基対を形成することができ、サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１種類はＵＡＡ終止コドンと塩基対を形成することができ、サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１種類はＵＡＧ終止コドンと塩基対を形成することができ；ｂ）サプレッサートランスファーＲＮＡは、組成物中に全て同量で存在するわけではない、と薬学上許容される担体とを含む医薬組成物に関する。 【選択図】図２

Inventors

  • イグナトヴァ、ゾヤ
  • バーティ、ニキール
  • ダビト、マルコス

Assignees

  • ウニヴェルズィテート ハンブルク

Dates

Publication Date
20260512
Application Date
20240429
Priority Date
20230502

Claims (20)

  1. 少なくとも５種類の異なるサプレッサートランスファーＲＮＡ、ここで、 ａ）前記サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１つはＵＧＡ終止コドンと塩基対を形成することができ、前記サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１つはＵＡＡ終止コドンと塩基対を形成することができ、前記サプレッサートランスファーＲＮＡのうち少なくとも１つはＵＡＧ終止コドンと塩基対を形成することができ； ｂ）前記サプレッサートランスファーＲＮＡは、組成物中に全て同量で存在するわけではない； と薬学上許容される担体とを含む ことを特徴とする医薬組成物。
  2. 前記少なくとも５種類のサプレッサートランスファーＲＮＡが、ｔＲＮＡ－Ａｒｇ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｃｙｓ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｇｌｙ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｔｙｒ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｌｙｓ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、ｔＲＮＡ－Ｔｒｐ－ＵＲ 1 Ｒ 2 、およびｔＲＮＡ－Ｌｅｕ－ＵＲ 1 Ｒ 2 からなるサプレッサートランスファーＲＮＡ群から選択され、ここで、Ｒ 1 およびＲ 2 は互いに独立にＡまたはＧであり、ただし、Ｒ 1 とＲ 2 は両方ともＧであることはなく、好ましくは、ｔＲＮＡ－Ａｒｇ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｃｙｓ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｙ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｔｙｒ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｔｙｒ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｌｙｓ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｌｙｓ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｔｒｐ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｔｒｐ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｌｅｕ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｌｅｕ－ＵＡＡ、および、ｔＲＮＡ－Ｌｅｕ－ＵＡＧからなるサプレッサートランスファーＲＮＡ群から選択される 請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 組成物が、同じ終止コドンと塩基対を形成する、３種類以下のサプレッサートランスファーＲＮＡを含み、ただし、前記組成物が、同じ終止コドンと塩基対を形成する、２種類以上のサプレッサートランスファーＲＮＡを含む場合は、同じ終止コドンと塩基対を形成するサプレッサートランスファーＲＮＡは、それらの同族アミノ酸が異なり、好ましくは、非同族ｔＲＮＡのみに由来するｔＲＮＡ本体、またはその一部を有する 請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. 組成物が５種類または６種類のサプレッサートランスファーＲＮＡ、好ましくは、５種類または６種類以下のサプレッサートランスファーＲＮＡを含み、組成物は以下のサプレッサーｔＲＮＡ： ａ）ｔＲＮＡ－Ａｒｇ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＡ、およびｔＲＮＡ－Ｃｙｓ－ＵＧＡ；または ｂ）ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｙ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｔｙｒ－ＵＡＧ、およびｔＲＮＡ－Ｌｙｓ－ＵＡＡ；または ｃ）ｔＲＮＡ－Ｔｒｐ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｔｒｐ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＧ、ｔＲＮＡ－Ｌｙｓ－ＵＡＧ、およびｔＲＮＡ－Ｔｙｒ－ＵＡＡ を含む 請求項１ないし３のいずれかに記載の医薬組成物。
  5. 組成物内の各サプレッサートランスファーＲＮＡの割合が、所与の対象遺伝子におけるＰＴＣ変異の頻度に合わせて、最も高頻度のＰＴＣを抑制するように構成された第１のサプレッサートランスファーＲＮＡは組成物中に最大の割合で存在し、より低頻度のＰＴＣを抑制するように構成された第２、第３、第４およびそれ以降のサプレッサートランスファーＲＮＡは、対象遺伝子における標的ＰＴＣの頻度に応じて、対応する低い割合で組成物中に存在するように調整される 請求項１ないし４のいずれかに記載の医薬組成物。
  6. 前記対象遺伝子における、少なくとも０，５％頻度のＰＴＣを標的とする、組成物中に存在するサプレッサートランスファーＲＮＡの割合が、組成物中に存在するサプレッサートランスファーＲＮＡ全体の少なくとも９５重量％である 請求項５に記載の医薬組成物。
  7. ａ）それぞれ異なるサプレッサートランスファーＲＮＡをコードする少なくとも５種類の核酸、および、ｂ）前記５種類の核酸のうち少なくとも１種類が構築物中の他の核酸に依存せずに発現可能なように前記核酸に機能的に連結されたＤＮＡ調節エレメントを含む ことを特徴とする合成ＤＮＡ構築物。
  8. ｉ．請求項７に記載の合成ＤＮＡ構築物、またはｉｉ．ａ）少なくとも５種類の異なる合成ＤＮＡ構築物、ここで、前記合成ＤＮＡ構築物のそれぞれは、異なるサプレッサートランスファーＲＮＡをコードする核酸と、医薬組成物中の前記５種類の核酸のうち少なくとも１種類が組成物中の他の核酸の発現レベルとは異なる発現レベルで発現可能であるか、または前記少なくとも５種類の異なる合成ＤＮＡ構築物のうち少なくとも１種類が他の合成ＤＮＡ構築物よりも高いコピー数で医薬組成物中に存在するように前記核酸に機能的に連結されたＤＮＡ調節エレメントとを含む、および、ｂ）薬学上許容される担体を含む ことを特徴とする医薬組成物。
  9. 前記少なくとも５種類の核酸のそれぞれが異なるトランスファーＲＮＡをコードし、前記核酸のうち少なくとも１種類、２種類、３種類、４種類、５種類または全てがそれぞれ５’リーダー配列に機能的に連結され、前記５’リーダー配列は、 ａ）配列モチーフＴＧＡＣＣＴＡＡＧＴＧＴＡＡＡＧＴ、Ｉ H （配列番号２８）、ＴＧＡＧＡＴＴＴＣＣＴＴＣＡＧＧＴＴ、ＩＩ H （配列番号２９）、ＴＡＴＡＴＡＧＴＴＣＴＧＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＣＴＣＴＴＴＣＣＣ、ＩＩＩ H （配列番号３０）、ＡＣＣＡＴＡＡＡＣＧＴＧＡＡＡＴＧ、Ｉ L （配列番号３１）、ＴＣＴＴＴＧＧＡＴＴＴＧＧＧＡＡＴＣ、ＩＩ L （配列番号３２）、およびＴＴＡＴＡＡＧＴＴＣＴＧＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＣＴＣＴＴＴＣＣＣ、ＩＩＩ L （配列番号３３）からなる群から選択される配列モチーフ；ならびに／または、 ｂ）配列モチーフＶＮＡＮＡＮＴＶＨＡＮＡＮＮＴＴＮＮＮＡＴＲＡＮＡＴＴＣＮＧＤＧＶＧＮＡＡＮＡＴＡＢＴＮＣＴＶＧＮＤ、５０ｎｔ H （配列番号３４）およびＧＣＮＧＧＤＧＧＣＧＮＧＴＴＣＢＢＣＴＧＴＮＶＮＡＧＣＮＴＮＣＧＤＮＧＮＣＧＴＴＴＮＮＣＮＴＣＧＧＴ、５０ｎｔ L （配列番号３５）からなる群から選択される配列モチーフ；ならびに／または、 ｃ）配列モチーフＧＡＡＡＴＧＣＣＴＴ、１０ｎｔ H1 （配列番号３６）、ＧＴＧＧＧＡＡＣＴＡ １０ｎｔ H2 （配列番号３７）、およびＧＴＧＴＴＧＣＴＴＧ １０ｎｔ H3 （配列番号３８）からなる群から選択される配列モチーフ を含み；サプレッサートランスファーＲＮＡをコードする前記核酸のうち少なくとも１種類は、サプレッサートランスファーＲＮＡをコードする他の核酸とは異なる５’リーダー配列を有する 請求項７に記載の合成ＤＮＡ構築物または請求項８に記載の医薬組成物。
  10. ａａ）上記のａ）に関して、 ｉ．前記５’リーダー配列は、配列モチーフＩ L を含む場合には、配列モチーフＩ H を含まず、またその逆であり、前記５’リーダー配列が配列モチーフＩ H もしくはＩ L の一方を含む場合には、配列モチーフＩ H もしくはＩ L は、５’－３’方向に、好ましくは－６６～－５０位を有し； ｉｉ．前記５’リーダー配列は、配列モチーフＩＩ L を含む場合には、配列モチーフＩＩ H を含まず、またその逆であり、前記５’リーダー配列が配列モチーフＩＩ H もしくはＩＩ L の一方を含む場合には、配列モチーフＩＩ H もしくはＩＩ L は、５’－３’方向に、好ましくは－４９～－３２位を有し、 ｉｉｉ．前記５’リーダー配列は、配列モチーフＩＩＩ L を含む場合には、配列モチーフＩＩＩ H を含まず、またその逆であり、前記５’リーダー配列が配列モチーフＩＩＩ H もしくはＩＩＩ L の一方を含む場合、配列モチーフＩＩＩ H もしくはＩＩＩ L は、５’－３’方向に、好ましくは－３１～－１位を有し；または、 ｂｂ）上記のｂ）に関して、前記５’リーダー配列は、配列モチーフ５０ｎｔ L を含む場合には、配列モチーフ５０ｎｔ H を含まず、またその逆であり、前記５’リーダー配列が配列モチーフ５０ｎｔ H もしくは５０ｎｔ L の一方を含む場合には、配列モチーフ５０ｎｔ H もしくは５０ｎｔ L は、５’－３’方向に、好ましくは－５０～－１位を有する 請求項９に記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  11. 前記５’リーダー配列が、 ａａ）上記のａ）に関して、配列モチーフＩ L 、ＩＩ L 、ＩＩＩ L 、Ｉ H 、ＩＩ H またはＩＩＩ H から選択される少なくとも２つの配列モチーフ、ここで、前記少なくとも２つの配列モチーフは、５’－３’方向に、Ｉ H －ＩＩ H 、ＩＩ H －ＩＩＩ H 、Ｉ H －ＩＩＩ H 、Ｉ L －ＩＩ L 、ＩＩ L －ＩＩＩ L 、Ｉ L －ＩＩＩ L 、Ｉ H －ＩＩ L 、Ｉ H －ＩＩＩ L 、ＩＩ H －ＩＩＩ L 、Ｉ L －ＩＩ H 、ＩＩ L －ＩＩＩ H 、もしくはＩ L －ＩＩＩ H の順に配置される；または、 ｃｃ）上記のｃ）に関して、配列モチーフ１０ｎｔ H1 、１０ｎｔ H2 、および１０ｎｔ H3 のうち少なくとも２つの配列モチーフ、前記少なくとも２つの配列モチーフは、 ｉ．ＧＡＡＡＴＧＣＣＴＴ，１０ｎｔ H1 （配列番号９）およびＧＴＧＴＴＧＣＴＴＧ，１０ｎｔ H3 （配列番号１１）、ここで、前記配列モチーフは、５’－３’方向に、以下の順：１０ｎｔ H3 －１０ｎｔ H1 に配置される、または、 ｉｉ．ＧＡＡＡＴＧＣＣＴＴ，１０ｎｔ H1 （配列番号９）およびＧＴＧＧＧＡＡＣＴＡ，１０ｎｔ H2 （配列番号１０）、ここで、前記配列モチーフは、５’－３’方向に、以下の順：１０ｎｔ H1 －１０ｎｔ H2 に配置される、または、 ｉｉｉ．ＧＴＧＧＧＡＡＣＴＡ，１０ｎｔ H2 （配列番号１０）、およびＧＴＧＴＴＧＣＴＴＧ，１０ｎｔ H3 （配列番号１１）、ここで、前記配列モチーフは、５’－３’方向に、以下の順：１０ｎｔ H3 －１０ｎｔ H2 に配置される を含む 請求項９または１０に記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  12. 前記５’リーダー配列が、 ａａ）上記のａ）に関して、配列モチーフＩ L 、ＩＩ L 、ＩＩＩ L 、Ｉ H 、ＩＩ H もしくはＩＩＩ H から選択される３つの配列モチーフ、好ましくは、５’－３’方向に、以下の順：Ｉ L －ＩＩ L －ＩＩＩ L 、Ｉ H －ＩＩ H －ＩＩＩ H 、Ｉ H －ＩＩ L －ＩＩＩ L 、Ｉ L －ＩＩ H －ＩＩＩ L 、Ｉ L －ＩＩ L －ＩＩＩ H 、Ｉ H －ＩＩ H －ＩＩＩ L 、Ｉ H －ＩＩ L －ＩＩＩ H 、もしくはＩ L －ＩＩ H －ＩＩＩ H ；または、 ｃｃ）上記のｃ）に関して、３つの配列モチーフ１０ｎｔ H1 、１０ｎｔ H2 、および１０ｎｔ H3 の全て、好ましくは、５’－３’方向に、以下の順：１０ｎｔ H3 －１０ｎｔ H1 －１０ｎｔ H2 を含む 請求項９ないし１１のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  13. 前記５’リーダー配列が、特徴ａ）の配列モチーフＩ H 、ＩＩ H 、ＩＩＩ H 、Ｉ L 、ＩＩ L 、およびＩＩＩ L から選択される配列モチーフのうち１つと５’－３’方向においてそのすぐ後に特徴ｂ）の配列モチーフ５０ｎｔ L および５０ｎｔ H から選択される配列モチーフのうち１つを含む 請求項９ないし１１のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  14. 前記５’リーダー配列が配列番号７８～８９の配列のうち１つ、好ましくは配列番号９０～１６１の配列のうち１つを含むまたは有する 請求項１３に記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  15. 前記５’リーダー配列が配列モチーフＩ H 、ＩＩ H 、ＩＩＩ H 、のうち１つと５’－３’方向においてそのすぐ後に配列モチーフ５０ｎｔ H ；または配列モチーフＩ L 、ＩＩ L 、ＩＩＩ L のうち１つと５’－３’方向においてそのすぐ後に配列モチーフ５０ｎｔ L を含む 請求項１３に記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  16. 前記５’リーダー配列が上記の特徴ａ）の配列モチーフＩ H 、ＩＩ H 、ＩＩＩ H 、Ｉ L 、ＩＩ L 、およびＩＩＩ L から選択される配列モチーフのうち１つと、５’－３’方向においてそのすぐ後に８～１２、好ましくは９～１１、より好ましくは１０ヌクレオチドのスペーサー配列の１０～３０リピートを含むまたはから構成されるスペーサー領域と、５’－３’方向においてそのすぐ後に上記の特徴ｂ）の配列モチーフ５０ｎｔ L および５０ｎｔ H から選択される配列モチーフのうち１つを含む 請求項９ないし１１のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  17. 前記核酸が天然トランスファーＲＮＡをコードし、前記５’リーダー配列が前記天然トランスファーＲＮＡに由来しない 請求項９ないし１６のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  18. 前記５’リーダー配列が、 ａａ）上記のａ）に関して、配列番号３９～６４のうち１つの配列、 ｂｂ）上記のｂ）に関して、配列番号６６～７７のうち１つの配列、 を有するまたは含む 請求項９ないし１７のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  19. 配列Ｈ 54 Ｔ 55 Ｃ 56 Ｇ 57 Ａ 58 Ｎ 59 Ｔ 60 、好ましくは、Ｔ 54 Ｔ 55 Ｃ 56 Ｇ 57 Ａ 58 Ｎ 59 Ｔ 60 （指数はトランスファーＲＮＡのヌクレオチドの位置を表し、位置のナンバリングはトランスファーＲＮＡナンバリング規則に従う）を含むＢボックスを含む天然または合成トランスファーＲＮＡのコード配列をさらに含む 請求項９ないし１８のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物または医薬組成物。
  20. 薬剤として使用するための、請求項１ないし６のいずれかに記載の医薬組成物、請求項７、９ないし１９のいずれかに記載の合成ＤＮＡ構築物、または、請求項８ないし１９のいずれかに記載の医薬組成物。

Description

本発明は、複数のサプレッサートランスファーＲＮＡを含む医薬組成物および複数のサプレッサートランスファーＲＮＡをコードする核酸を含む合成ＤＮＡ構築物に関する。さらに、本発明は、例えば、複数のトランスファーＲＮＡを細胞、例えば、ヒト細胞に送達するために使用することができるサプレッサーｔＲＮＡをコードする１以上の合成ＤＮＡ構築物を含む医薬組成物に関する。 トランスファーリボ核酸（ｔＲＮＡ）は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のヌクレオチド配列をタンパク質のアミノ酸配列に翻訳するために必要な成分として、生細胞のタンパク質合成装置に不可欠な部分である。天然ｔＲＮＡは、アミノ酸と共有結合できるアミノ酸結合ステムと、「アンチコドン」と呼ばれる塩基トリプレットを含むアンチコドンループを含み、ｍＲＮＡ上の「コドン」と呼ばれる対応する塩基トリプレットと非共有結合的に結合できる。タンパク質は、特にリボソームといくつかの補助酵素を含む多成分系の助けを借りて、ｍＲＮＡ上のコドン配列を鋳型として用いてｔＲＮＡが運ぶアミノ酸を組み立てることによって合成される。 トランスファーＲＮＡは、最近、治療目的で薬物として、例えば、ナンセンス変異、すなわち遺伝コードで指定された２０種のアミノ酸のうちの１つをコードするセンスコドンが、遺伝子配列中の鎖終結コドン（「未成熟終結コドン(premature termination codon)」、ＰＴＣ）に変化する変異に関連した病態を治療するための遺伝子治療の一部として使用することに関心が高まっている（非特許文献１；非特許文献２;非特許文献３）。例えば、Ｌｕｅｃｋら、２０１６（非特許文献４；非特許文献５）には、コドンを編集したｔＲＮＡが全長野生型タンパク質を回復させるためにＣＦＴＲ遺伝子のインフレーム終止コドンを天然アミノ酸に変換することを可能にすることが記載されている。 ｍＲＮＡに比べ、ｔＲＮＡ分子は安定性が著しく高く、平均１０倍短いため、標的組織への導入の問題が軽減される。これにより、未成熟終止コドンを有するｍＲＮＡからの末端切断型タンパク質の形成を防ぎ、代わりに適正なアミノ酸を導入するために、遺伝子治療にｔＲＮＡを使用する試みに至った（例えば、非特許文献６；特許文献１；特許文献２参照）。特許文献３および特許文献４には、例えばフレームシフト変異に関連する遺伝病のサプレッサーｔＲＮＡとして使用可能な延長アンチコドンループを有する合成ｔＲＮＡが記載されている。特許文献５には、疾患の原因となる未成熟終止コドンを認識し、リードスルーする操作されたｔＲＮＡ分子および操作されたサプレッサーｔＲＮＡ分子をコードするベクターが開示されている。遺伝子治療、例えば、未成熟終結コドン（ＰＴＣ）の存在に関連する疾患の遺伝子治療に関するｔＲＮＡの使用も、特に特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献５、および特許文献９に記載されている。 例えば、タンパク質の欠損または機能不全のタンパク質をもたらす、タンパク質をコードする遺伝子におけるナンセンス変異（ＰＴＣ）によって引き起こされる、または関連する嚢胞性線維症のような疾患の症状はしばしば非常に類似しているが、このような疾患の遺伝的シグネチャーは極めて多様であり得る。各患者は、同じ疾患表現型を示すにもかかわらず、１以上の異なるＰＴＣを伴って、疾患の根底にあるユニークな遺伝子変異パターンを有する可能性がある。しかしながら、同じもしくは類似の疾患表現型を有するが、ＰＴＣ変異もしくはＰＴＣ変異パターンが異なる、または類似の根底にある遺伝子変異を有するが、別の疾患に関連する別の遺伝子におけるものである、少なくとも数名の患者またはより大きな患者集団の治療のための単一の薬剤を有することが望ましい。特許文献１０では、第１、第２、および／または第３のサプレッサーｔＲＮＡを含む単一の発現ベクターまたは医薬組成物の使用が提案されている。 米国特許出願公開第２００３／０２２４４７９（Ａ１）号明細書米国特許第６９６４８５９号明細書国際公開第２０１７／１２１８６３（Ａ１）号パンフレット国際公開第２０２０／２０８１６９（Ａ１）号パンフレット国際公開第２０２１／１１３２１８（Ａ１）号パンフレット国際公開第２０２０／０６９１９４（Ａ１）号パンフレット国際公開第２０２１／２１１７６２（Ａ２）号パンフレット国際公開第２０２１／０８７４０１（Ａ１）号パンフレット米国特許出願公開第２０２０／２９１４０１（Ａ１）号明細書国際公開第２０２２／２３５８６１（Ａ１）号パンフレット Ai-Ming Yu, Young Hee Choi and Mei-Juan Tu, RNA Drugs and RNA Targets for Small Molecules: Principles, Progress, and Challenges, Pharmacological Reviews, 2020, 72 (4) 862-898; DOI: 10.1124/pr.120.019554Porter, JJ, Heil, CS, Lueck, JD, Therapeutic promise of engineered nonsense suppressor tRNAs, WIREs RNA. 2021; 12:e1641, DOI: 10.1002/wrna.1641Albers S, Beckert B, Matthies MC, Mandava CS, Schuster R, Seuring C, Riedner M, Sanyal S, Torda AE, Wilson DN, Ignatova Z., Repurposing tRNAs for nonsense suppression. Nat Commun. 2021 Jun 22;12(1):3850. doi: 10.1038/s41467-021-24076-x. PMID: 34158503)Lueck et al. 2016 (Lueck, J.D., Infield, DT, Mackey, AL, Pope, RM, McCray, PB, Ahern, CA. Engineered tRNA suppression of a CFTR nonsense mutation, bioRxiv 088690; doi: 10.1101/088690Lueck JD, Yoon JS, Perales-Puchalt A, Mackey AL, Infield DT, Behlke MA, Pope MR, Weiner DB, Skach WR, McCray PB Jr, Ahern CA. Engineered transfer RNAs for suppression of premature termination codons. Nat Commun. 2019 Feb 18;10(1):822. doi: 10.1038/s41467-019-08329-4Koukuntla, R., 2009, Suppressor tRNA mediated gene therapy, Graduate Theses and Dissertations, 10920, Iowa State University, http://lib.dr.iastate.edu/etd/10920Mitra S., Das P., Samadder A., Das S., Betai R., Chakrabarti J., 2015, Eukaryotic tRNAs fingerprint invertebrates vis-a-vis vertebrates, Journal of Biomolecular Structure and Dynamics, doi: 10.1080/07391102.2014.990925Fujikura, K. Premature termination codons in modern human genomes. Sci Rep 6, 22468 (2016). https://doi.org/10.1038/srep22468Bulcha, J.T., Wang, Y., Ma, H. et al. Viral vector platforms within the gene therapy landscape. Sig Transduct Target Ther 6, 53, 2021, doi: 10.1038/s41392-021-00487-6Kotterman, M.A., Chalberg, T.W., Schaffer, D.V., 2015, Viral Vectors for Gene Therapy: Translational and Clinical Outlook, Annu. Rev. Biomed. Eng. 2015. 17:63-89, 10.1146/annurev-bioeng-071813-104938Albers, S., et al. Repurposing tRNAs for nonsense suppression, Nature Comm 12, 3850 (2021)Sprinzl M, Horn C, Brown M, Ioudovitch A, Steinberg S. Compilation of tRNA sequences and sequences of tRNA genes. Nucleic Acids Res. 1998;26(1):148-53 一般化された「コンセンサス」ｔＲＮＡ構造と、ｔＲＮＡナンバリング規則に従ったそのナンバリングの模式図。本発明による合成ＤＮＡ構築物の実施形態の模式図。種々のｔＲＮＡカクテル濃度で処理した細胞の細胞生存率。種々のｔＲＮＡカクテル濃度で処理した細胞の細胞生存アッセイ。細胞を１×１０4細胞／ウェルで各ウェルに播種し、異なる濃度のｔＲＮＡを加えた（ｎｇ／１０4細胞）。ｔＲＮＡ－Ａｒｇ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＧ；ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＡおよびｔＲＮＡ－Ｃｙｓ－ＵＧＡを等モル濃度で混合した。細胞生存率は、非処理細胞の生存率を１００％としてその割合で示した。種々のｔＲＮＡカクテル濃度で処理した細胞のリードスルー効率。種々のｔＲＮＡカクテル濃度で処理した細胞のリードスルー効率。細胞を１×１０4細胞／ウェルで播種し、各ウェルに種々の濃度のｔＲＮＡを加えた（ｎｇ／１０4細胞）。ｔＲＮＡ－Ａｒｇ－ＵＧＡ、ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＧ；ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ－ＵＡＡ、ｔＲＮＡ－Ｇｌｎ－ＵＡＡおよびｔＲＮＡ－Ｃｙｓ－ＵＧＡを等モル濃度で混合した。リードスルー活性は、細胞の野生型ルシフェラーゼ（ＷＴ－Ｌｕｃ）活性を１００％としてその割合で示した。ｓｕｐ－ｔＲＮＡで処理した細胞のリードスルー効率。各カクテル内で濃度が異なるサプレッサーｔＲＮＡ実施形態を含む種々のｔＲＮＡカクテルで処理した細胞のリードスルー効率（プロットの下の数字）。細胞を１×１０4細胞／ウェルで播種し、各ウェルに種々の濃度のｔＲＮＡを加えた（ｎｇ／１０4細胞）。リードスルー活性は、細胞の野生型ルシフェラーゼ（ＷＴ－Ｌｕｃ）活性を１００％としてその割合で示した。ｓｕｐ－ｔＲＮＡで処理した細胞のリードスルー効率。ミスマッチｔＲＮＡおよびサプレッサーｔＲＮＡを本実施形態の最低濃度で含むｔＲＮＡ組合せで処理した細胞のリードスルー効率（図４Ａ）。細胞を１×１０4細胞／ウェルで播種し、各ウェルに種々の野地のｔＲＮＡを加えた（ｎｇ／１０4細胞）。リードスルー活性は、細胞の野生型ルシフェラーゼ（ＷＴ－Ｌｕｃ）活性を１００％としてその割合で示した。０は、ｔＲＮＡを含まない陰性対照反応を表