Search

JP-2026514650-A - ヘテロ二量体抗体、治療的応用における使用、及びそれに関連する組成物

JP2026514650AJP 2026514650 AJP2026514650 AJP 2026514650AJP-2026514650-A

Abstract

本明細書には、変異体重鎖抗体配列が開示される。特定の実施形態において、本開示は、第１の重鎖及び第２の重鎖を有するヘテロ二量体抗体を考慮し、第１及び第２の重鎖、又はその断片は異なる変異を含む。特定の実施形態において、本開示は、本明細書に開示される抗体及び組換え重鎖をコードする核酸及びベクター、並びにこれらを含む細胞に関する。

Inventors

  • サンドバーグ， エリック
  • デュー， ジョナサン
  • エイザム， タラ

Assignees

  • エモリー ユニバーシティー

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240419
Priority Date
20230421

Claims (17)

  1. 変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有する重鎖を有する組換え抗体。
  2. 変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを有する第２の重鎖を有する、請求項１に記載の組換え抗体。
  3. 変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを有する第２の重鎖を有する、請求項１に記載の組換え抗体。
  4. 変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを有する重鎖を有する組換え抗体。
  5. 変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有する第２の重鎖を有する、請求項４に記載の組換え抗体。
  6. 変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを有する重鎖を有する組換え抗体。
  7. 変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有する第２の重鎖を有する、請求項６に記載の組換え抗体。
  8. 変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有する第１の重鎖と、第２の重鎖とを含むヘテロ二量体抗体。
  9. 前記第２の重鎖が、変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを含む、請求項８に記載のヘテロ二量体抗体。
  10. 前記第２の重鎖が、変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを含む、請求項８に記載のヘテロ二量体抗体。
  11. 異種プロモーターと作動可能に組み合わせて、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組換え重鎖をコードする核酸。
  12. 請求項１１に記載の核酸を含むベクター。
  13. 請求項１１に記載の核酸又は請求項１２に記載のベクターを含む細胞。
  14. 請求項８～１０のいずれか一項に記載の組換え抗体重鎖を含む、ヘテロ二量体抗体。
  15. 二重特異性抗体である、請求項１４に記載のヘテロ二量体抗体。
  16. Ｔ細胞特異的抗原に特異的に結合する、請求項１５に記載の二重特異性抗体。
  17. 腫瘍関連抗原に特異的に結合する、請求項１５に記載の二重特異性抗体。

Description

（関連出願への相互参照） 本出願は、２０２３年４月２１日に出願された米国仮出願第６３／４６１，０７８号及び２０２３年８月２５日に出願された米国仮出願第６３／５７８，７８９号の利益を主張するものである。これら各出願の全内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。 （連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する記載） 本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって与えられたＡＩ１４９２９７の下で政府の支援を受けてなされた。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。 （特許庁の電子提出システムを介してＸＭＬファイルとして提出された資料の参照による組み込み） 本出願に関連する配列表は、ＸＭＬ形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むＸＭＬファイルの名前は２３０１０ＰＣＴ．ｘｍｌである。ＸＭＬファイルは３ＫＢであり、２０２４年４月１９日に作成され、ＵＳＰＴＯ特許電子出願システムを介して電子的に提出されている。 治療用抗体は、癌などの広範囲の疾患の治療のための重要な薬剤の一クラスを構成する。免疫系細胞を動員し、刺激するそれらの能力は多くの場合、特に癌の免疫治療におけるそれらの臨床的有効性と関連しており、重鎖定常領域（Ｆｃ領域）に保持される。Ｆｃ領域はインビボで細胞の死滅を指令する抗体媒介性エフェクタ機能を誘導するために、Ｆｃ受容体及び補体と結合する。抗体治療は癌の治療において首尾よく使用されるが、癌の再発がまれではないため、これらの薬剤に対する臨床的耐性及び難治性疾患は主要な問題であり続けている。したがって、改良点を特定する必要がある。 Ｒｉｄｇｗａｙらは、抗体ＣＨ３領域における重鎖ヘテロ二量化のためのＫｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ技術を報告している。Protein Engineering, 1996, 9(7): 617-621. Ｈａらは、免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体プラットフォームを報告している。Front Immunol, 2016, 7:394. Ｍｉｍｕｒａらは、治療用ＩｇＧ抗体のグリコシル化技術を報告している。Protein Cell 2018, 9 (1): 47-62. Ｌｉらは、エンドグリコシダーゼＳ２のグリコシンターゼ変異体がトランスグリコシル化活性を示すことを報告している。J Biol Chem, 2016, 291 (32): 16508-18. Ｍｏｏｒｅらは、二重特異性抗体の効率的な開発のために設計されたヘテロ二量体Ｆｃプラットフォームを報告している。Methods, 2019, 154: 38-50. Ｄｕらは、ＩｇＧアクティブエンドグリコシダーゼの機構及び特異性を報告している。Glycobiology, 2020, 30 (4): 268-279. Ｋｌｏｎｔｚらは、高効率ＩｇＧトランスフコシル化のためのα－フコシダーゼを報告している。Nat Comm, 2020, 11:620. 本明細書で引用される参考文献は、先行技術を自認するものではない。 本開示は、変異体重鎖抗体配列に関する。特定の実施形態において、本開示は第１の重鎖及び第２の重鎖を有するヘテロ二量体抗体を想定し、第１及び第２の重鎖は異なる変異を含む。特定の実施形態において、変異体重鎖抗体配列は治療用途に有用な安定化抗体を構築するのに有用である。 特定の実施形態において、安定化されたヘテロ二量体抗体によって、グリコシル化された置換基の選択的な合成又は切断が可能となり、非対称にグリコシル化された抗体構築物が得られる。 特定の実施形態において、ヘテロ二量体抗体は、本明細書に開示される変異又は変異の組合せを有する第１の重鎖と、第２の重鎖と、を含む。 特定の実施形態において、本開示は、変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有し、任意的に、本明細書に開示される追加の変異のいずれかをさらに含む、組換え抗体重鎖又はこれを含むヘテロ二量体抗体に関する。 特定の実施形態において、本開示は、変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを有し、任意的に、本明細書に開示される追加の変異のいずれかをさらに含む、組換え抗体重鎖又はこれを含むヘテロ二量体抗体に関する。 特定の実施形態において、本開示は、変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを有し、任意的に、本明細書に開示される追加の変異のいずれかをさらに含む、組換え抗体重鎖又はこれを含むヘテロ二量体抗体に関する。 特定の実施形態において、本開示は変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを有する第１の重鎖と、第２の重鎖と、を含む、変異を有する組換え抗体重鎖又はこれを含むヘテロ二量体抗体に関する。特定の実施形態において、第２の重鎖が変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを含む。特定の実施形態において、第２の重鎖が変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを含む。特定の実施形態において、第１の重鎖が本明細書に開示される変異のいずれかを含む。特定の実施形態において、第２の重鎖が本明細書に開示される変異のいずれかを含む。 特定の実施形態において、本開示は、異種プロモーターと作動可能に組み合わせられた、本明細書に開示される組換え重鎖をコードする核酸に関する。 特定の実施形態において、本開示は、異種プロモーターと作動可能に組み合わせられた、本明細書に開示される組換え重鎖をコードする核酸を含むベクターに関する。 特定の実施形態において、本開示は、本明細書に開示される核酸又は本明細書に開示されるベクターを含む細胞（例えば、体細胞）に関する。 特定の実施形態において、本開示は、本明細書に開示されるキメラ組換え抗体重鎖を含む非天然抗体又はヘテロ二量体抗体に関する。 特定の実施形態において、抗体の第１の重鎖が変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを含む。特定の実施形態において、抗体の第２の重鎖が変異Ｌ３６８Ｓ及びＤ３９９Ｙを含む。 特定の実施形態において、ヘテロ二量体抗体の第１の重鎖が変異Ｋ４０９Ｓ及びＴ４１１Ｙを含む。特定の実施形態において、抗体の第２の重鎖が変異Ｄ３９９Ｙ及びＫ４４７Ｓを含む。 図１は、重鎖、軽鎖及びＦｃプラスミドの共発現時に形成される可能性のある構築物の模式図を示す。ＷＴリツキシマブ配列を用いることで相対的に増加し、その後ＭＳによって検出された、Ｆａｂ１Ｆｃヘテロ二量体の形成率を使用して、ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ１及びｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ２における特定の変異の安定性を決定した。 図２Ａは、ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ１変異を有する構築物のデータを示す。ヒストグラムは、一部又は全てのプロトマーＡ変異がＦａｂ及びＦｃを含有する断片上にあり、プロトマーＢ変異がＦｃのみを含有する断片上にある場合（右図）、又は配置が逆の場合（左図）に、インタクトＬＣ／ＭＳによって決定される相対的なヘテロ二量化率を示す。 図２Ｂは、ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ２変異を有する構築物のデータを示す。ヒストグラムは、一部又は全てのプロトマーＡ変異がＦａｂ及びＦｃを含有する断片上にあり、プロトマーＣ変異がＦｃのみを含有する断片上にある場合（右図）、又は配置が逆の場合（左図）に、インタクトＬＣ／ＭＳによって決定される相対的なヘテロ二量化率を示す。 図３Ａは、プロトマーＡ（ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ１及び２）のＦｃが抗ＣＤ２０リツキシマブＦａｂで操作され、ＦｃプロトマーＢ（ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ１）又はプロトマーＣ（ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ２）が抗ＨＥＲ２ナノボディに結合している、二重特異性抗体を使用する架橋アッセイを示す。ＣＦＳＥ染色したＲａｊｉ細胞及びカルセイン－バイオレットＢＴ４７４細胞への結合が評価される。 図３Ｂは、ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ１、２、若しくは非特異的ＩｇＧ１アイソタイプ対照を細胞混合物に添加した場合、又は抗体を細胞混合物に添加しなかった場合の、Ｒａｊｉ及びＢＴ４７４細胞の細胞クラスター形成を示す、フローサイトメトリー密度プロット及びスキャッタープロットのデータを示す。各ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔＩｇＧを、抗体なし及びアイソタイプ対照の両方と比較した。 図３Ｃは、ｃｏｍｂＹＳｅｌｅｃｔ２サイトカイントラップ及びルシフェラーゼ阻害の細胞ベースアッセイを示す。 図３Ｄは、阻害剤が添加されていない場合のルシフェラーゼ応答率に対して正規化されたルシフェラーゼ応答率を、５ｐＭのＩＬ１β存在下で阻害剤濃度を変化させた場合の関数としてプロットしたデータを示している。ＩＣ５０は、非線形最小二乗当てはめを用いて決定した。 本開示のより詳細な説明の前に、本開示は、説明される実施形態に限定されず、したがって、当然変化し得ることを理解されたい。また、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される用語は特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定することを意図するものではないことを理解されたい。 別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料もまた、本開示の実施又は試験において使用され得るが、好ましい方法及び材料がここで記載される。 本明細書において引用したすべての文献及び特許は、各個別の文献又は特許が明示的かつ個別に参照によって組み込まれると示されたかのように、本明細書に参照によって組み込まれ、関連して文献が引用された方法及び／又は材料を開示及び説明するために、本明細書に参照によって組み込まれる。いかなる刊行物の引用も、出願日前の開示を示すためであり、本開示が先行開示によって当該刊行物に先行する権利を与えられないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は、独立して確認される必要があり得る実際の刊行日とは異なり得る。 本開示を読めば当業者には明らかなように、本明細書に記載及び図示された個々の実施形態のそれぞれは、本開示の範囲又は趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離され得るか、又はそれらの特徴と組み合わされ得る別個の構成要素及び特徴を有する。記載された任意の方法は、記載された事象の順序で、又は論理的に可能な任意の他の順序で実行することができる。 本開示の「実施形態」は一例を指すものであり、実施例が必ずしもその例に限定されるものではないことを含意する。本開示の実施形態は、別段の明示がない限り、当技術分野の技術の範囲内にある医学、有機化学、生化学、分子生物学、薬理学などの技術を使用する。このような技術は文献で全て説明されている。 本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は文脈が明らかに異なることを指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。本明細書及び以下の特許請求の範囲においては、反対の意図が明らかでない限り以下の意味を有するものと定義される、複数の用語が参照される。 本開示及び請求項において使用されるとき、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」（並びに「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」といった任意のｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇの形態）、「ｈａｖｉｎｇ」（並びに「ｈａｖｅ」及び「ｈａｓ」といった任意のｈａｖｉｎｇの形態）、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」（並びに「ｉｎｃｌｕｄｅ」及び「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」といったの任意のｉｎｃｌｕｄｉｎｇの形態）又は「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」（並びに「ｃｏｎｔａｉｎｓ」及び「ｃｏｎｔａｉｎ」といった任意のｃｏｎｔａｉｎｉｎｇの形態）の語は、それらが包含的又はオープンエンドであり、追加の、記載されていない要素又は方法のステップを排除しないという、米国特許法においてそれらに与えられた意味を有する。 「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」又は「ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ」などは、本開示によって包含される方法及び組