Search

JP-2026514707-A - 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療及び／または予防するために生体内でニューロンを修飾する方法

JP2026514707AJP 2026514707 AJP2026514707 AJP 2026514707AJP-2026514707-A

Abstract

本明細書では、その必要がある対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療及び／または予防する組成物及び方法が提供され、この方法は、薬剤を投与することを含み、この薬剤は、Ｋｃｎｎ１タンパク質の発現または活性における変化を介してニューロンを修飾し、その結果、ニューロンの発火を改変し、かつ／またはＡＬＳを引き起こすタンパク質のクリアランスまたはその毒性からの保護を増加させる。 【選択図】なし

Inventors

  • ホーウィッチ アーサー エル．
  • フェントン ウェイン エー．
  • ネイジー マリア

Assignees

  • イエール ユニバーシティ

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240410
Priority Date
20230410

Claims (20)

  1. 遺伝子導入構築物を含む組成物であって、前記遺伝子導入構築物は、 （ａ）ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその機能的変異体と、 （ｂ）前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその機能的変異体に作動可能に連結されたエンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターであって、前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターは、前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡの発現を制御することができる、前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターと、 （ｃ）前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその機能的変異体に作動可能に連結された前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）５’と、 （ｄ）前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその機能的変異体の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）３’と を含む、前記組成物。
  2. 前記遺伝子導入構築物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ＡＡＶは、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、もしくはＡＡＶ８、カプシド血清型、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）、または、それらの自己相補的な変異体を含む、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、もしくはＡＡＶ８の機能的変異体から選択される、請求項２に記載の組成物。
  4. 前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号１のポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する機能的変異体もしくは断片を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号２のポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する機能的変異体もしくは断片を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号２のポリヌクレオチド配列のコドン最適化形態を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー／プロモーター、ニワトリβ－アクチンプロモーターに融合したＣＭＶエンハンサー（ＣＡＧ）、ニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢＡ）、サル空胞形成ウイルス４０（ＳＶ４０）エンハンサー／プロモーター、ポリユビキチンＣ遺伝子プロモーター（ＵＢＣ）、伸長因子１αサブユニット（ＥＦ－１α）プロモーター、またはホスホグリセリン酸キナーゼプロモーター（ＰＧＫ）から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターは、配列番号８のポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する機能的変異体を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターは、ヒトでの使用に適している、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 前記エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたは前記プロモーターは、組織特異的、誘導的、または組織特異的と誘導的との両方である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 前記組織特異的エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターは、ニューロン特異的エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターである、請求項１０に記載の組成物。
  12. 前記ニューロン特異的エンハンサー－プロモーターまたは前記プロモーターは、ニューロン特異的エノラーゼ（ＥＮＯ２）、血小板由来成長因子α鎖（ＰＤＧＦＡ）、血小板由来成長因子β鎖（ＰＤＧＦＢ）、シナプシン（ＳＹＮ１）、メチルＣｐＧ結合タンパク質２（ＭＥＣＰ２）、Ｃａ２ ＋ ／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣＡＭＫ２Ｇ）、代謝型グルタミン酸受容体２（ＧＲＭ２）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＥＦＬ）もしくは重鎖（ＮＥＦＨ）、プロエンケファリン（ＰＥＮＫ）、または興奮性アミノ酸トランスポーター２（ＳＬＣ１Ａ２）から選択される、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記ＩＴＲのうちの１つ以上は、前記ＡＡＶカプシドと同じ血清型のＩＴＲを含むか、前記ＡＡＶカプシドと同じ血清型に由来するＩＴＲを含むか、前記ＡＡＶカプシドとは異なる血清型のＩＴＲを含むか、または前記ＡＡＶカプシドとは異なる血清型に由来するＩＴＲを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 前記ＩＴＲのうちの１つ以上は、配列番号５、配列番号６、もしくは配列番号７のポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する機能的変異体もしくは断片を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
  15. 前記遺伝子導入構築物は、イントロン、転写終結シグナル、ポリアデニル化（ポリＡ）部位、ｍｉＲＮＡ、または転写後調節要素（ＰＲＥ）のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
  16. 前記遺伝子構築物は、５’から３’へ、ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー／プロモーター、イントロン、ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡ、転写終結配列、ポリＡ部位、及びＩＴＲを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
  17. 前記組成物は、髄腔内または脳室内送達に適している、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。
  18. 請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物、及び薬学的に許容される賦形剤、キャリアまたは希釈剤を含む、医薬組成物。
  19. 請求項１８に記載の医薬組成物の有効量を含む、ＡＬＳ治療薬。
  20. その必要がある対象におけるＡＬＳを治療または予防するための方法であって、請求項１８に記載の医薬組成物または請求項１９に記載のＡＬＳ治療薬の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。

Description

関連出願への相互参照 本出願は、２０２３年４月１０日に出願された米国仮出願第６３／４９５，１６３号の優先権を主張し、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。 電子的に提出された配列表の参照 ここに電子的に提出されたＸＭＬ形式のコンピュータ読み取り可能な配列リスト（「ＸＭＬ文書」）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ読み取り可能な形式のコピー（ファイル名：２６８１＿１４７ＰＣ０１＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ．ｘｍｌ、作成日：２０２４年４月９日、サイズ：１４，９３４バイト）が、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８３１－１．８３５に従って提出される。 分野 本開示は、ＡＬＳを治療及び／または予防するための薬剤の投与に関するものであり、この薬剤は、ＳＫ１チャネルのサブユニットであるＫｃｎｎ１のニューロンレベルを増加させ、運動ニューロンの発火率及び／またはタンパク質恒常性に影響を及ぼすことによって運動ニューロンの生存を延長する。 背景 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、ルー・ゲーリック病とも呼ばれ、横紋筋を支配する上位及び下位運動ニューロンの機能不全及び死を特徴とする運動ニューロン疾患である。ＡＬＳの典型的な症状は、虚弱、けいれん、または硬直を含む手足の運動障害を含む。ＡＬＳ対象のごく一部は、嚥下及び発話に影響を及ぼす球神経障害を呈し、また、ＡＬＳ対象の一部は思考及び行動に障害を呈し、中には前頭側頭型認知症を呈する人もいる。最終的に、罹患した人は歩くことも、手を使うことも、話すことも、飲み込むことも、呼吸することもできなくなる。注目すべきことに、ＡＬＳ対象の眼球運動は比較的温存されている。 ＡＬＳは通常４０歳～７０歳で発症するが、遺伝性の場合にはそれより若干早い時期に発症することもあり、しかし、大多数の症例の発症年齢は、６０歳～８０歳である。生涯のうちに約２，０００人に１人がＡＬＳを発症し、男性では女性よりもＡＬＳを発症する可能性が約２倍高くなる。対象は、典型的には、脱力及び不器用を含む四肢症状を呈する。診断時点ですでに約３０～４０％の運動ニューロンが失われており、この進行は、運動ニューロンの喪失が、６か月ごとに残りの運動ニューロンの５０％が失われる割合で進行し得ることを示唆している。上位運動ニューロン及び下位運動ニューロンの両方に損傷と喪失が見られる。発症から死亡までの平均生存期間は２～４年である。（ＡＬＳの発症、診断（例えば、エル・エスコリアル基準）、進行、管理に関する追加の臨床的説明については、Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｌａｔｅｒａｌ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｍｉｔｓｕｍｏｔｏ，Ｐｒｚｅｄｂｏｒｓｋｉ，及びＧｏｒｄｏｎ ｅｄｓ，Ｔａｙｌｏｒ及びＦｒａｎｃｉｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００６（非特許文献１）を参照のこと）。 症例の約１０％は、家族性ＡＬＳに関連する２０超の遺伝子の１つに関係しており、そのうちの４つが家族性症例の大部分を占めている（Ｃ９ｏｒｆ７２ヘキサヌクレオチド反復伸長（４０％）、ＳＯＤ１（２０％）、ＦＵＳ（１～５％）、及びＴＡＲＤＢＰ（１～５％）のさまざまな変異）。プロフィリン、オプティニューリン、ＶＡＰ－Ｂ、ユビキリン－２、ＶＣＰなどの他の遺伝子の変異も発生するが、それほど一般的ではない。残りの９０％の症例は孤発性であり、環境要因及び／または複数の遺伝子変化が関与している可能性がある（Ｔａｙｌｏｒ，Ｂｒｏｗｎ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ（２０１６） Ｎａｔｕｒｅ ５３９，１９７－２０６（非特許文献２）を参照のこと）。家族性及び孤発性のどちらの型も、一般的な運動系の崩壊を伴い、一部の遺伝性型では発症が早いにもかかわらず、臨床的に容易に区別することはできない。ＡＬＳに関する１つの見方は、ＡＬＳが数十の誘因を含み、そのすべてが運動器系の進行性の同様の機能不全を引き起こすというものである。特に、ほとんどの場合、運動ニューロンは細胞体内に異常な封入体／凝集体を蓄積するが、患者のほぼ１００％にユビキチン化された封入体が含まれる（ＡＬＳ ｔｅｘｔ ２００６，ｃｈａｐｔｅｒ３（非特許文献１）を参照のこと）。家族性ＡＬＳでは、ＳＯＤ１、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＦＵＳ、ＴＤＰ４３などのタンパク質の変異によって変化したバージョンが、このような封入体中に見つかる。 マウスモデルは、ＡＬＳの病理学的メカニズムを調査し、治療方法を特定するためのアプローチを提供する。現在までに、ＡＬＳは、ヒトＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）のさまざまな変異体についてトランスジェニックであるマウスにおいて最もうまくモデル化されており、進行性の運動ニューロンの喪失と麻痺の研究が可能になっている。特に、これらのマウス株は完全な浸透性と比較的均一な麻痺時間を示し、後者は導入遺伝子のコピー数に反比例している。 現在、ＡＬＳを完治させる治療法はなく、症状の改善と寿命の延長を目的としたさまざまな治療が行われている。リルゾールはＡＬＳ治療薬としてＦＤＡに承認された最初の薬であり、寿命を数か月延長し得る。リルゾールは１つ以上のイオンチャネルまたは神経伝達物質受容体に作用し得、その治療メカニズムは不明のままである。デキストロメトルファンとキニジンとの組み合わせであるヌエデクスタは、球麻痺ＡＬＳ患者の発話機能及び嚥下機能を改善する効果があることが証明されている（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１７ Ｏｃｔ；１４（４）：９５２－９６０（非特許文献３））。フェニル酪酸ナトリウムとタウルウルソジオールとの組み合わせは、それぞれＥＲとミトコンドリアの代謝を改善することを目的として、Ａｍｙｌｙｘ ００３５として販売されており、ＦＤＡの承認を得たが、後期段階の試験ではプラセボと異なる結果をもたらすことはできなかった。ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼ阻害剤は、多小胞体とオートファゴソームを見かけ上のエキソサイトーシスに誘導することで凝集しやすいタンパク質を除去することが提案されており（Ｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ２０２３ Ｖｏｌ １８６（４），７８６－８０２，Ｅ２８（非特許文献４））、初期段階の試験に入っている。 髄腔内アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）療法は、ＡＬＳの特定の単一遺伝子関連型（ＳＯＤ１、Ｃ９ｏｒｆ７２）、及びＡＬＳのＦＵＳ型に対しても開始されている（Ｂｏｒｏｓ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０２２ Ｊｕｌ；１９（４）：１１４５－１１５８（非特許文献５）を参照のこと）。ＳＯＤ１型の場合、Ｔｏｆｅｒｓｅｎとして知られるＡＳＯは忍容性があったが、第３相試験で有効性に関する主要な結果は得られず、しかし、好ましい臨床的傾向とバイオマーカー傾向が見られた。発症前のＳＯＤ１変異キャリアを対象とした第３相ランダム化プラセボ対照試験が進行中である。Ｃ９ＯＲＦ７２ ＡＳＯの第１相試験は忍容性が良好であったが、臨床エンドポイントはいずれも達成されず、臨床的悪化の傾向が見られた。Ｃ９ＯＲＦ７２ ＡＬＳの２回目の第１相試験では、脳脊髄液中のポリＧＰの減少が達成されたが、臨床結果に変化は見られなかった。ＦＵＳの場合、人工呼吸器に依存している（疾患が進行した２６歳の患者）に対するＡＳＯの髄腔内投与量の増加の初期試験では、死後、正常及び変異ＦＵＳタンパク質の両方が低下し、脊髄及び運動皮質の不溶性ＦＵＳ凝集体の減少が示された。ＦＵＳ変異を有する追加の患者（発症前及び発症中の両方）は、拡大アクセスプログラムＩＮＤに基づいて同じＡＳＯで治療されている。同じＡＳＯの患者６４名を対象とした第３相試験も進行中である。ＡＴＸＮ２を標的とするＡＳＯは、ＡＴＸＮ２の中等度ポリＱ拡大を伴うＡＬＳ患者を対象とした第１相試験でも試験されている（Ｂｏｒｏｓ ｅｔ ａｌ，２０２２（非特許文献５））。（ＡＴＸＮ２は、ＴＤＰ４３の臨床的異常の悪化と、ＡＴＸＮ２の中間ポリＱの拡大がＡＬＳのリスク増加につながることに関連している）。 承認されたフリーラジカル除去剤であるエダラボンも、いくらかの改善をもたらし得る。試験中の薬剤は、プリドピジン（σ１受容体作用薬）、ＫＣＮＱ活性化剤のエゾガビン（レチガビン）、抗炎症剤のＲＭＳ６０、及び抗炎症効果のある環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ阻害剤のイブジラストを含んでいる。 呼吸不全のための人工呼吸器は生存期間を延長させるが、疾患の進行には影響を与えない。 したがって、生存率を向上させ、かつ／またはＡＬＳを予防するための改良された組成物及び方法が当該技術分野で必要とされている。 Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｌａｔｅｒａｌ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｍｉｔｓｕｍｏｔｏ，Ｐｒｚｅｄｂｏｒｓｋｉ，及びＧｏｒｄｏｎ ｅｄｓ，Ｔａｙｌｏｒ及びＦｒａｎｃｉｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００６Ｔａｙｌｏｒ，Ｂｒｏｗｎ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ（２０１６） Ｎａｔｕｒｅ ５３９，１９７－２０６Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１７ Ｏｃｔ；１４（４）：９５２－９６０Ｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ２０２３ Ｖｏｌ １８６（４），７８６－８０２，Ｅ２８Ｂｏｒｏｓ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０２２ Ｊｕｌ；１９（４）：１１４５－１１５８ 概要 本開示は、ＡＬＳを治療及び／または予防するための組成物及び方法を提供する。本明細書に記載の態様では、遺伝子導入構築物を含む組成物が提供され、この構築物は、（ａ）ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその変異体と、（ｂ）ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその変異体に作動可能に連結されたエンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターであって、エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターは、ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡの発現を制御することができる、エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターと、（ｃ）ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその変異体に作動可能に連結されたエンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）５’と、（ｄ）ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡまたはその変異体の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）３’とを含む。 ある特定の態様では、遺伝子導入構築物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。いくつかの態様では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、もしくはＡＡＶ９、カプシド血清型、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）、または、それらの自己相補的なバージョンを含む、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、もしくはＡＡＶ９の機能的変異体から選択される。 ある特定の態様では、ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号１のアミノ酸配列を持つポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する変異体もしくは断片を含む。ある特定の態様では、ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号２のポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約９７％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有する変異体もしくは断片を含む。いくつかの態様では、ヒトＫＣＮＮ１ ｃＤＮＡは、配列番号２のポリヌクレオチド配列のコドン最適化形態を含む。 ある特定の態様では、エンハンサー－プロモーターの組み合わせまたはプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー／プロモーター、ニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＡＧ）に融合したＣＭＶエン