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JP-2026514782-A - 切断可能な免疫細胞エンゲージャー

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Abstract

本発明は、抗体－サイトカインコンジュゲートであって、サイトカインは、切断可能なリンカーを通して抗体にコンジュゲートされる、抗体－サイトカインコンジュゲートに関する。本発明によるコンジュゲートは、ｘ個の反応性部分Ｆを含有する機能性抗体Ａｂ（Ｆ） ｘ （ここで、ｘは、１～１０の範囲の整数である）と、１つ又は２つの反応性部分Ｑを含有する免疫細胞エンゲージングポリペプチドとをコンジュゲートすることによって調製され得、抗体は、腫瘍細胞に特異的であり、及び免疫細胞エンゲージングポリペプチドは、免疫細胞に特異的であり、反応は、ＱとＦとの反応により、機能性抗体と免疫細胞エンゲージングポリペプチドとの間に共有結合を形成する。本発明は、本発明によるプロセスによって得ることができる抗体－サイトカインコンジュゲート及びその医療用途にさらに関する。 【選択図】なし

Inventors

  • ファン ゲール， レモン
  • ファン バーケル， サンダー セバスティアーン
  • ファン デルフト， フロリス ルイス

Assignees

  • シンアフィックス ビー．ブイ．

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240417
Priority Date
20230417

Claims (15)

  1. 構造（１）又は構造（２） （式中、 － ＡＢは、抗体であり、 － Ｌは、ＡＢをＤに連結するリンカーであり、 － ｘは、１～１０の範囲の整数であり、 － Ｚ １ 及びＺ ２ は、連結基であり、少なくともＺ １ は、環化付加又は求核反応の生成物を含み、 － ｂは、０又は１であり、 － Ｌ ６ は、－（Ｈ） ｖ －Ｓ－（Ｌ ７ ） ｗ’ －であり、 ○Ｈは、単糖であり、 ○ｖは、１～１０の範囲の整数であり、 ○Ｓは、糖又は糖誘導体であり、 ○ｗ’は、０又は１であり、及び ○Ｌ ７ は、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ ２ －Ｏ） ｚ －（ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －Ｏ） γ －ＣＨ ２ －又はＣＨ ２ －（Ｏ－ＣＨ ２ －ＣＨ ２ ） γ －であり、γは、０～１００の範囲の整数であり、及びｚは、０又は１であり、 － Ｄは、－（Ｄ １ ） α －Ｄ ２ によるポリペプチドであり、 ○Ｄ １ は、切断可能なペプチドリンカーであり、 ○Ｄ ２ は、免疫細胞受容体に特異的な免疫細胞エンゲージャーポリペプチドであり、 ○αは、０又は１であり、 － Ｌは、α＝０である場合、切断可能なリンカーである） を有する抗体－サイトカインコンジュゲート。
  2. ｂ＝１であり、好ましくは、Ｄ ２ とＡＢとの間の原子鎖は、好ましくは、Ｂ、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ及びＰから選択される１０～１００個の原子である、請求項１に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  3. 前記抗体は、腫瘍細胞上の細胞外受容体に特異的であり、好ましくは、前記腫瘍細胞上の前記細胞外受容体は、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、ＡＤＡＭ９、ＡＬＰＰ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＳＣＴ２（ＳＬＣ１Ａ５）、ＡＳＬＧ６５９、ＡＳＰＨＤ１、ａｖ－インテグリン、ａｖｂ３－インテグリン／ＩＴＧＡＶ／ＣＤ５１、Ａｘｌ、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９）、ＢＭＰＲ１Ｂ、ブレビカン、ｃ－ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、ｃ－Ｍｅｔ、Ｃ４．４ａ（ＬＹＰＤ３）、ＣＡ－ＩＸ（ＣＡ９）／ＭＮ、カドヘリン－６、ＣａｎＡｇ、ＣＣＲ７、ＣＤ１１７（ｃ－ＫＩＴ）、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒα）、ＣＤ１３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８／シンデカン－１、ＣＤ１６６（ＡＬＣＡＭ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２０３Ｃ、ＣＤ２０５、Ｌｙ７５、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２２８（Ｐ７９、ＳＥＭＦ）、ＣＤ２５（ＩＬ－２Ｒ－α）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３２４（ＣＤＨ１／Ｅ－カドヘリン）、ＣＤ３３、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６、ＮＴＢ－Ａ）、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８ａ（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ５６（ＮＣＡＭ）、ＣＤ７０、ＣＤ７１（ＴＦ－Ｒ）、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤＨ６、カドヘリン－６、ＣＥＡＣＡＭ５（ＣＤ６６ｅ）、クラウジン、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６（クラウジン－６、Ｓｋｕｌｌｉｎ）、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１／ＣＬＥＣ１２Ａ、クリプト、ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９）、ＣＸＣＲ５、ＤＫＬ－１、ＤＬＬ３（デルタ様３）、ＤＰＥＰ３、Ｅ１６、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＣＤ２０３ｃ（ＡＧＳ－１６）、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＢ２Ｒ、エフリン－Ａ４（ＥＦＮＡ４）、ＥＴＢＲ、ＦＡＰ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、フィブロネクチンＥＤＢ、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ１（ＦＲ－ａ）、Ｇａｌ－３ＢＰ、ＧＤ３、ＧＤＮＦ－Ｒａ１、ＧＥＤＡ、ＧＦＲＡ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＧＰＣ３（グリピカン－３）、ｇｐＮＭＢ、ＧＰＲ１７２Ａ、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ５４、ＧＲＰ２０、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ２０Ｒａ、インテグリンａｖｂ６、ＫＡＡＧ－１、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ルイスＹ（ＣＤ１７４）、ＬＧＲ５、ＬＩＶ－１（ＳＬＣ３９Ａ６、ＺＩＰ６）、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６４、Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６）、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、ＬＹ６Ｋ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＦＩ２（ＴＡＡ）、ＭＩＣＡ／Ｂ、ＭＯＳＰＤ２、ＭＰＦ、ＭＵＣ１（ＣＡ６）、ＭＵＣ１６／ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１ｃ、ＮａＰｉ２ｂ（ＳＬＣ３４Ａ２）、ＮＣＡ、ネクチン－４（ＰＶＲＬ４）、ノッチ３、Ｐ－カドヘリン（ｐＣＡＤ、ＣＤＨ３）、Ｐ２Ｘ５、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ１）、ＰＭＥＬ１７、ＰＲＬＲ（プロラクチン）、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７（ＣＣＫ４）、ＲＥＴ、ＲＮＦ４３、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、Ｓｅｒｎａ ５ｂ、ＳＥＺ６、ＳＬＩＴＲＫ６（ＳＬＣ４４Ａ４）、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴｎ、ＴＡＧ７２、ＴＥＮＢ２、ＴＦ（ＣＤ１４２、トロンボプラスチン）、ＴＩＭ－１、ＴＭ４ＳＦ、ＴＭＥＦＦ、ＴＭＥＭ１１８、ＴＭＥＭ４６、ＴＮＦ－α、ＴＲＯＰ－２（ＴＡＣＳＴＤ２）、ＴＷＥＡＫＲ、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、テネイシンからなる群から選択されるか、又は前記抗体は、ウイルス感染から生じる細胞外タンパク質及び／又は腫瘍関連糖鎖抗原（ＴＡＣＡ）に特異的であり、及び／又は前記免疫細胞エンゲージングポリペプチドは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２６、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６、ＩＬ３７、ＩＬ－３８、ＩＦＮ－α（ＩＦＮ－α１／１３、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－α４、ＩＦＮ－α５、ＩＦＮ－α６、ＩＦＮ－α７、ＩＦＮ－α８、ＩＦＮ－α１０、ＩＦＮ－α１４、ＩＦＮ－α１６、ＩＦＮ－α１７及びＩＦＮ－α２１を含む）、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－Ｙ、ＩＦＮ－Ａ、ＴＦＮ－α、ＴＮＦ－β、ＴＧＦ－β１、Ｍ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ及びＣＸＬ１０からなる群から選択され、より好ましくは、前記免疫細胞エンゲージングポリペプチドは、ＩＬ－２又はＩＬ－１５、より好ましくはＩＬ－１５である、請求項１又は２に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  4. 各Ｚ １ は、構造（Ｚ２）～（Ｚ２０ｃ）： （式中、Ｌへの連結は、波線の結合によって表され、Ｂ （－） は、アニオンであり、Ｂ （＋） は、カチオンであり、（Ｚ１０）、（Ｚ１３）、（Ｚ１４）及び（Ｚ１５）の窒素原子は、Ｌへの連結を有し得るか、又は水素原子を含有するか若しくは置換されており、 Ｒ ３６ は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択されるハロゲンであり、Ｙ ４ は、ヘテロ原子であり、Ｒ ３５ は、水素、Ｃ １ ～Ｃ ２４ アルキル基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ シクロアルキル基、Ｃ ２ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリール基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ ３ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、前記Ｃ １ ～Ｃ ２４ アルキル基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ シクロアルキル基、Ｃ ２ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリール基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ ３ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリールアルキル基は、Ｏ、Ｓｉ、Ｓ及びＮＲ １４ から選択される１つ以上のヘテロ原子によって任意選択で置換され、且つ任意選択で介在され、Ｒ １４ は、水素及びＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基からなる群から独立して選択され、 環Ｚは、トリアゾール、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン、［２．２．２］－ビシクロオクタジエン、［２．２．２］－ビシクロオクテン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、ピラゾリン又はピペラジンから選択される） から個別に選択され、 好ましくは、Ｚ １ は、構造（Ｚ２１）～（Ｚ３８ａ）から選択され、より好ましくは、Ｚ １ は、（Ｚ２９）： であり、 さらにより好ましくは、Ｚ １ は、シクロアルキンとアジドとの間のクリック反応によって得ることができ、及びＺ ２ は、シクロアルキンとニトロンとの間のクリック反応によって得ることができる、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  5. リンカーＬは、構造 －（Ｌ １ ）－（Ｌ ２ ） ｏ －（Ｌ ３ ） ｐ －（Ｌ ４ ） ｑ － （式中、 － Ｌ １ は、Ｚ １ に連結され、及びＬ ４ は、存在する場合、Ｚ ２ に連結され、 － Ｌ １ 、Ｌ ２ 、Ｌ ３ 及びＬ ４ は、それぞれ個別に、Ｚ １ をＺ ２ に一緒に連結するリンカーであり、 － ｏ、ｐ及びｑは、それぞれ個別に、０又は１であり、好ましくはｏ＝ｐ＝ｑ＝０であり、 好ましくは、 ａ）リンカーＬ １ は、 －（Ｋ ３ ） ｋ －（Ｋ １ ） ｄ －（Ｋ ２ ） ｅ －（Ｋ １ ） ｆ －（Ｋ ２ ） ｅ’ －（Ｃ（Ｏ）） ｇ －、又は ［－（Ｋ ３ ） ｋ －（Ｋ １ ） ｄ －（Ｋ ２ ） ｅ －（Ｋ １ ） ｆ －］ ２ ＢＭ－（Ｃ（Ｏ）） ｇ －（Ｋ １ ） ｄ’ －（Ｋ ２ ） ｅ’ －（Ｋ １ ） ｆ’ －（Ｃ（Ｏ）） ｇ’ － （式中、 － ｄ及びｄ’は、個別に、０又は１であり、 － ｅ及びｅ’は、個別に、１～１０の範囲の整数であり、 － ｆ及びｆ’は、個別に、０又は１であり、 － ｇ及びｇ’は、個別に、０～１０の範囲の整数であり、 － ｋ＝０又は１であるが、ｋ＝１の場合、ｄ＝０であることを条件とし、 － Ｋ １ は、構造（２３） によるスルファミド基であり、 ａ＝０又は１であり、及びＲ １３ は、水素、Ｃ １ ～Ｃ ２４ アルキル基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ シクロアルキル基、Ｃ ２ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリール基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ ３ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、前記Ｃ １ ～Ｃ ２４ アルキル基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ シクロアルキル基、Ｃ ２ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリール基、Ｃ ３ ～Ｃ ２４ アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ ３ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アリールアルキル基は、Ｏ、Ｓ及びＮＲ １４ から選択される１つ以上のヘテロ原子によって任意選択で置換され、且つ任意選択で介在され、Ｒ １４ は、水素及びＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基からなる群から独立して選択され、 － Ｋ ３ は、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ－、－（Ｏ）（ＣＨ２） ｍ Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｍ Ｃ（Ｏ）ＮＨ－又は－（４－Ｐｈ）ＣＨ ２ ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｍ Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、ｍは、０～１０の範囲の整数であり、 － Ｋ ２ は、－ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －Ｏ－若しくは－Ｏ－ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －部分であるか、又は（Ｋ ２ ） ｅ は、－（ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －Ｏ） ｅ１ －ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －若しくは－（ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －Ｏ） ｅ１ －ＣＨ ２ －部分であり、ｅ１は、ｅと同じように定義され、 － ＢＭは、好ましくは、炭素原子、窒素原子、リン原子、（ヘテロ）芳香族環、（ヘテロ）環又は多環式部分から選択される分岐部分であり、より好ましくは、ＢＭは、窒素原子である） によって表され、及び／又は ｂ）リンカーＬ ２ は、ペプチドスペーサーであり、好ましくは、Ｌ ２ は、プロテアーゼの認識配列を有し、好ましくは、Ｌ ２ は、任意選択で非天然アミノ酸を含む１～５つのアミノ酸を含み、より好ましくはジペプチド、トリペプチド又はテトラペプチドスペーサーであり、及び／又は ｃ）リンカーＬ ３ は、切断機構に関連するスペーサーであり、好ましくは、Ｌ ３ は、構造（Ｌ３ａ）によるパラ－アミノベンジオキシカルボニル誘導体又はグルクロン酸官能化ｐ－ヒドロキシベンジルオキシカルボニル（Ｌ３ｂ）： （式中、括弧は、任意選択のカルボニル基を示し、Ｒ ２１ は、Ｈ、Ｒ ２６ 又はＣ（Ｏ）Ｒ ２６ であり、Ｒ ２６ は、Ｃ １ ～Ｃ ２４ （ヘテロ）アルキル基、Ｃ ３ ～Ｃ １０ （ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ ２ ～Ｃ １０ （ヘテロ）アリール基、Ｃ ３ ～Ｃ １０ アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ ３ ～Ｃ １０ （ヘテロ）アリールアルキル基であり、これらは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ ２８ から選択される１つ以上のヘテロ原子によって任意選択で置換され、且つ任意選択で介在され、Ｒ ２８ は、水素及びＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基からなる群から独立して選択され、好ましくは、Ｒ ２１ は、Ｈ又はＣ（Ｏ）Ｒ ２６ であり、Ｒ ２６ ＝４－Ｎ－メチル－ピペラジン又はモルホリンであり、最も好ましくは、Ｒ ２１ は、Ｈである） から選択され、及び／又は ｄ）リンカーＬ ４ は、連結スペーサーであり、好ましくは、Ｌ ４ は、－ＮＲ ２２ －（Ｃ ｚ －アルキレン）－ＮＲ ２２ －（ＳＯ ２ －ＮＨ－） ｊ （Ｃ（Ｏ）） ｈ －によるジアミンであり、Ｒ ２２ は、Ｈ又はＣ １ ～Ｃ ４ アルキルであり、ｚは、１～１０の範囲の整数であり、ｊは、０又は１であり、ｈは、０又は１であるか、又は リンカーＬ ４ は、構造－ＮＲ ２２ －（ＣＨ ２ －ＣＨ ２ －Ｏ） ｅ６ －（ＣＨ ２ ） ｅ７ －Ｃ（Ｏ）－（式中、ｅ６は、１～１０の範囲の整数であり、ｅ７は、１～３の範囲の整数であり、及びＲ ２２ は、Ｈ又はＣ １ ～Ｃ ４ アルキルである）によるエチレングリコールスペーサー、又は 構造－ＮＲ ２２ －（Ｃ ｚ －アルキレン）－Ｃ（Ｏ）－（式中、ｘは、１～２０の範囲の整数であり、及びＲ ２２ は、Ｈ又はＣ １ ～Ｃ ４ アルキルである）によるアミノアルカン酸スペーサーである） のリンカーである、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  6. α＝１であり、及びＤは、Ｄ １ のＮ末端を介してＺ ２ に連結される、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  7. Ｄ １ は、腫瘍微小環境で過剰発現されるプロテアーゼ、好ましくはセリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼ及びアスパラギンペプチドリアーゼ、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＧ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カリクレイン、ｈＫｌ、ｈＫｌＯ、ｈＫＴ５、プラスミン、コラゲナーゼ、ＩＶ型コラゲナーゼ、ストロメリシン、第Ｘａ因子、キモトリプシン様プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、エラスターゼ様プロテアーゼ、サブチリシン様プロテアーゼ、アクチニダイン、ブロメライン、カルパイン、カスパーゼ、カスパーゼ－３、ｍｉｒｌ－ＣＰ、パパイン、ＨＩＶ－ｌプロテアーゼ、ＨＳＶプロテアーゼ、ＣＭＶプロテアーゼ、キモシン、レニン、ペプシン、マトリプターゼ、膜型セリンプロテアーゼ１（ＭＴ－ＳＰ１）、レグマイン、プラスメプシン、ネペンテシン、メタロエキソペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１Ｏ、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、エンテロキナーゼ、前立腺特異的標的（ＰＳＡ、ｈＫ３）、インターロイキン－１ｂ変換酵素、トロンビン、ＦＡＰ（ＦＡＰ－α）、ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（ＴＴＳＰ）、好中球エラスターゼ、プロテイナーゼ３、好中球セリンプロテアーゼ４、肥満細胞キマーゼ、肥満細胞トリプターゼ、ジペプチジルペプチダーゼ及びジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６）の１つによって切断される切断可能部位を含有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  8. Ｌは、以下の構造： （式中、ｘは、０～１００の範囲であり、好ましくは、ｘは、０～５０の範囲であり、より好ましくは、ｘは、１～３０の範囲であり、最も好ましくは、ｘは、１～１８である） のいずれか１つによるものである、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  9. Ｌ－Ｚ ２ は、以下： （式中、 ○Ｌ １ に連結される波線の結合は、Ｚ １ への連結を表し、及び環Ｚは、請求項４に定義されるとおりであり、好ましくは、Ｄの定義において、αは、０であり、及び ○Ｌ １ 及びＬ ２ は、請求項５に定義されるとおりである） のとおりである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  10. 医療処置で使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  11. 癌又は自己免疫疾患の治療で使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲート。
  12. 請求項１～９のいずれか一項に記載のコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  13. 請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体－サイトカインコンジュゲートを調製するプロセスであって、 － ＡＢ（Ｆ １ ） ｘ をＱ １ －Ｌ－Ｑ ２ 又は（Ｑ １ ） ２ －Ｌ－Ｑ ２ と反応させる工程と、 － 得られた化合物をＦ ２ －Ｄと反応させる工程と を含むか、又は － Ｄ－Ｆ ２ をＱ １ －Ｌ－Ｑ ２ 又は（Ｑ １ ） ２ －Ｌ－Ｑ ２ と反応させる工程と、 － 得られた化合物をＡＢ（Ｆ １ ） ｘ と反応させる工程と を含み、ＡＢ（Ｆ １ ） ｘ は、ｘ個の反応性部分Ｆ １ を含有する機能性抗体であり、及びｘは、１～１０の範囲の整数であり、Ｑ １ 及びＦ １ は、互いに対して相互に反応性であり、且つＱ ２ 及びＦ ２ は、互いに対して相互に反応性であり、Ｑ １ とＦ １ との間及びＱ ２ とＦ ２ との間の反応は、反応物間の共有結合を形成する、プロセス。
  14. Ｆ １ は、アジドであり、Ｑ １ は、シクロアルキンを含み、Ｑ ２ は、トランス－シクロオクテンを含み、及びＦ ２ は、ニトロン又はテトラジンを含む、請求項１３に記載のプロセス。
  15. － Ｆ ２ がニトロンであるＦ ２ －Ｄを得るために、Ｄの末端セリン又はトレオニンがニトロンに変換される工程、又は － ＤをＦ ２ －Ｄに変換するためのリガーゼ媒介ライゲーション工程であって、好ましくは、前記リガーゼは、チューブリンチロシンリガーゼ、トランスグルタミナーゼ、リポ酸リガーゼ、ファルネシルトランスフェラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ホルミル－グリシン生成酵素（ＦＧＥ）、トリプシリガーゼ／サブチリガーゼから選択され、より好ましくは、前記リガーゼは、ソルターゼである、リガーゼ媒介ライゲーション工程 によって進行され、好ましくは、Ｄは、微生物組換え発現によって産生され、且つ次いでＤ－Ｆ ２ に変換され、より好ましくは、前記微生物は、原核生物、最も好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項１３又は１４に記載のプロセス。

Description

発明の詳細な説明 ［発明の分野］ [0001] 本発明は、抗体及び他のポリペプチドから生成される免疫細胞エンゲージャーに関する。より具体的には、本発明は、結合前の抗体の遺伝子操作を必要とすることなく、目的の免疫細胞結合ポリペプチドを、切断可能なリンカーを介して抗体に結合させるのに好適なコンジュゲート、組成物及び方法に関する。化合物、組成物として得られる抗体－免疫細胞エンゲージャーコンジュゲート及び方法は、例えば、癌患者のための免疫療法で有用であり得る。 ［発明の背景］ [0002] 治療における理想的な薬であると考えられる抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、医薬品が結合された抗体から構成される。抗体（リガンドとしても知られている）は、小タンパク質フォーマット（ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディなど）であり得るが、一般に、所与の抗原に対するその高い選択性及び親和性、その長い循環半減期並びにほぼ乃至全く存在しない免疫原性に基づいて選択されているモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。したがって、慎重に選択された生物学的受容体のためのタンパク質リガンドとしてのｍＡｂは、医薬品の選択的送達のための理想的な標的化プラットフォームを提供する。例えば、特異的な癌関連抗原に選択的に結合することが知られているモノクローナル抗体は、結合、内在化、細胞内プロセシング及び最終的に活性カタボライトの放出を介して、化学的にコンジュゲートされた細胞傷害性薬物を腫瘍に送達するために使用され得る。細胞傷害性薬物は、小分子毒素、タンパク質毒素又はオリゴヌクレオチドのような他のフォーマットであり得る。結果として、抗体によって標的化されていない正常細胞を避けながら、腫瘍細胞を選択的に根絶することができる。同様に、抗体への抗菌薬（抗生物質）の化学的コンジュゲーションは、細菌感染症の治療に適用され得るが、抗炎症薬のコンジュゲートは、自己免疫疾患の治療について研究中であり、例えば、抗体へのオリゴヌクレオチドの結合は、神経筋疾患の治療のための可能性のある有望な手法である。したがって、最良の特定の細胞位置への活性医薬品の標的化送達の概念は、同じ薬物の全身送達に対して多くの有益な態様を有する、広範囲の疾患の治療のための強力な手法である。 [0003] 特定のタンパク質薬剤の標的化送達のためにモノクローナル抗体を用いる代替的な戦略は、後者のタンパク質を、軽鎖又は重鎖（又は両方）のＮ末端又はＣ末端であり得る抗体の末端の１つ（又は複数）に遺伝子融合することによるものである。この場合、目的の生物学的に活性なタンパク質、例えばシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素Ａ（ＰＥ３８）又は抗ＣＤ３一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のようなタンパク質毒素は、場合により、必ずしもペプチドスペーサーを介する必要はないが、抗体への融合物として遺伝的にコードされるため、抗体は、融合タンパク質として発現される。ペプチドスペーサーは、プロテアーゼ感受性切断部位を含有しても又はしなくてもよい。 [0004] モノクローナル抗体は、タンパク質配列自体でも遺伝子改変されて、その構造が改変され、それにより特異的特性が導入（又は除去）され得る。例えば、Ｆｃガンマ受容体への結合を消滅させるために、抗体Ｆｃ断片において変異が作製され得、ＦｃＲｎ受容体への結合若しくは特定の癌標的への結合が調節され得るか、又は抗体は、ｐＩを低下させ、且つ循環からのクリアランス速度を制御するように操作され得る。 [0005] 治療処置における新たな戦略としては、参照により組み込まれるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ ２０１５、２０、８３８－８４７に概説されるように、複数の抗原又はエピトープに同時に結合可能である抗体、即ち二重特異性抗体（２つの異なる抗原又はエピトープに同時に向けられる）又は三重特異性抗体（３つの異なるエピトープの抗原に向けられる）などの使用に関連する。「二標的」機能を有する二重特異性抗体は、例えば、癌、増殖又は炎症プロセスに関連する複数の表面受容体又はリガンドに干渉し得る。二重特異性抗体は、細胞上でのタンパク質複合体形成を支持するか又は細胞間の接触を引き起こすかのいずれかのために、非常に近接して標的を配置することもできる。「強制連結」機能の例は、凝固カスケードにおけるタンパク質複合体形成を支持する二重特異性抗体又は腫瘍標的化免疫細胞リクルータ及び／若しくはアクチベータである。産生方法及び構造に応じて、二重特異性抗体は、抗原結合部位の数、幾何学的形状、血清中の半減期及びエフェクター機能が異なる。 [0006] 多重特異性抗体のための広範な異なるフォーマットが長年にわたって開発されており、参照により組み込まれるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ ２０１５、２０、８３８－８４７及びＹｕ ａｎｄ Ｗａｎｇ、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１９，１４５，９４１－９５６によって要約されるように、ＩｇＧ様（Ｆｃ断片を有する）フォーマット及び非ＩｇＧ様（Ｆｃ断片を欠く）フォーマットに大別され得る。ほとんどの二重特異性抗体は、２つのハイブリドーマ株の体細胞融合（クアドローマ）、遺伝子（タンパク質／細胞）操作又はクロスリンカーとの化学的コンジュゲーションによる３つの方法の１つによって生成され、総計で６０を超える異なる技術的プラットフォームとなる。 [0007] 完全ＩｇＧ分子構造に基づくＩｇＧ様フォーマットとしては、二重可変ドメイン（ＤＶＤ－Ｉｇ）、Ｄｕｏｂｏｄｙ技術、ノブインホール（ＫＩＨ）技術、一般的な軽鎖技術及びクロスｍＡｂ技術が挙げられるが、これらに限定されず、切断ＩｇＧバージョンとしては、ＡＤＡＰＴＩＲ、ＸｍＡｂ及びＢＥＡＴ技術が挙げられる。非ＩｇＧ様手法としては、ＢｉＴＥ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ及びＩｍｍＴＡＣ技術が挙げられるが、これらに限定されない。二重特異性抗体は、異なる抗原結合部分（例えば、ｓｃＦｖ又はＦａｂ）を他のタンパク質ドメインに融合させることによっても生成され得、これによりさらなる機能性を含めることが可能になる。例えば、参照により組み込まれるＭｕｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００７，２８２，１２６５０－１２６６０によって実証されるように、２つのｓｃＦｖ断片は、アルブミンに融合され、抗体断片に血清アルブミンの長い循環時間を与える。別の例は、参照により組み込まれるＲｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００６，１０３，６８４１－６８４６によって報告されるように、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼＡ及びプロテインＡキナーゼ固定タンパク質のヘテロ二量体化に基づく「ドックアンドロック」手法である。Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２３，３０９－３２３によって示されるように、これらのドメインは、Ｆａｂ断片及び全体的な抗体に結合され、多価二重特異性抗体を形成することができる。ドックアンドロック戦略は、プロテインＡキナーゼ固定タンパク質にドッキングするための、標的化抗体とペプチド断片との間の融合タンパク質の生成を必要とする。治療用Ａｂ断片（ｓｃＦｖ、ダイアボディ）は、アルブミン又はアルブミンに結合するタンパク質と融合され得、血液中の薬物の半減期を最大で５～６倍まで増加させる。そのような分子の構築によって予測不可能な結果がもたらされ、それにより、異なるＡｂ断片融合物又は他のタンパク質へのＡｂの結合の結果として生成された二重特異性抗体は、新たな治療用分子の研究及び開発にその適用が制限されている。 [0008] 非ＩｇＧ型二重特異性抗体を生成するための化学的コンジュゲーションは、参照により組み込まれるＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８５，２２９，８１－８３によって初めて使用され、ウサギＩｇＧのペプシノリシスによって得られた２つのＦａｂ２断片を還元し、次いで酸化し、二重特異性Ｆａｂ２が生じた。同様に、システイン残基と相互作用するホモ及びヘテロ二官能性試薬は、参照により組み込まれるＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．１９８７，１３９，２３６７－２３７５によって報告されている。ＣＤ３及びＣＤ２０（リツキシマブ）に対するＡｂの化学的コンジュゲーションは、参照により組み込まれるＧａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００５，３３，４５２－４５９によって示されるように、二重特異性抗体コーティングされた表面を有するＴ細胞を得るために使用された。二重特異性ＣＤ２０×ＣＤ３の生成は、Ｔｒａｕｔ試薬を用いてＯＫＴ３（抗ＣＤ３）を処理し、続いてマレイミド官能化リツキシマブ（スルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）を用いたリツキシマブの前処理によって得られる）と混合することによって確実になる。両方の抗体のランダムな化学的コンジュゲーション、続くランダムなヘテロ二量体化により、二重特異性抗体は、不均質性が高い混合物（多量体も含有）として必然的に得られる。これまでに報告された、部位特異的でもある唯一の化学的方法は、参照により組み込まれるＤｏｐｐａｌａｐｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００７，１７，５０１－５０６によって報告されるように、ＣｏｖＸ－Ｂｏｄｙ技術であり、アルドラーゼ触媒抗体部位を標的化抗体に設置し、続いてアゼチジノンモチーフで化学修飾されたペプチド断片を用いて処理し、それにより自発的ライゲーションをもたらすことに基づく。二重特異性抗体は、参照により組み込まれるＤｏｐｐａｌａｐｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１０，１０７，２２６１１－２２６１６によって報告されるように、分岐リンカー、次いでＡｂを用いてＶＥＧＦ又はアンギオポエチン２を阻害した２つの短いペプチドを付加することによって産生された。 [0009] 今日の化学的Ａｂ又はＡｂ断片コンジュゲーションに基づく二重特異性抗体生成のフォーマットは、特に（低純度の）生成物の収率が低いこと及び商品コストの高さによって使用に至っていない。さらに、組換えＤＮＡ技術の進歩により、融合タンパク質の効率的な生成が可能になり、それにより肯定的な臨床結果が得られた。いずれにしても、非遺伝的化学修飾手法は、化学量論の部位特異性の適切な制御を確実にし得る場合、臨床までの時間を大幅に加速させ得る。 [0010] 臨床開発中又は現在進行中の二重特異性抗体の例は、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ×ＣＤ３）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９×ＣＤ３）、ＧＢＲ１３０２（Ｈｅｒ２×ＣＤ３）、ＭＥＤＩ－５６５（ＣＥＡ×ＣＤ３）、ＢＡＹ２０１０１１２（ＰＳＭＡ×ＣＤ３）、ＲＧ７２２１（アンギオポエチン×ＶＥＧＦ）、ＲＧ６０１３（ＦＩＸ×ＦＸ）、ＲＧ７５９７（Ｈｅｒ１×Ｈｅｒ３）、ＭＣＬＡ１２８（Ｈｅｒ２×Ｈｅｒ３）、ＭＭ１１１（Ｈｅｒ２×Ｈｅｒ３）、ＭＭ１４１（ＩＧＦ１Ｒ×Ｈｅｒ３）、ＡＢＴ１２２（ＴＮＦａｌｐｈａ×ＩＬ１７）、ＡＢＴ９８１（ＩＬ１ａ×Ｉｌ１ｂ）、ＡＬＸ０７６１（ＩＬ１７Ａ×ＩＬ１７Ｆ）、ＳＡＲ１５６５９７（ＩＬ４×ＩＬ１３）、ＡＦＭ１３（ＣＤ３０×ＣＤ１６）及びＬＹ３１６４５３０（Ｈｅｒ１×ｃＭＥＴ）である。 [0011] 癌治療の分野における一般的な戦略は、上方制御された腫瘍関連抗原（ＴＡＡ又は単純に標的）及び例えばＴ細胞又はＮＫ細胞といった癌破壊免疫細胞に存在する受容体に結合する二重特異性抗体を利用する。そのような二重特異性抗体は、それぞれＴ細胞又はＮＫ細胞リダイレクティング抗体として知られている。免疫細胞リダ