JP-2026514815-A - ウイルス及びウイルス様粒子の精製

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Abstract

本明細書では、糖タンパク質、標的化部分、またはこれらの組み合わせと融合されたアフィニティー結合ポリペプチドを含む、偽型ウイルスコンストラクトが提供される。また、本明細書では、本明細書で提供されるウイルスコンストラクトの精製方法及び使用方法も提供される。【選択図】図１

Inventors

フィリップ・アール・ジョンソン
ブルース・シー・シュネップ
ロニー・エム・ラッセル

Assignees

インテリウス・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド

Dates

Publication Date: 20260513
Application Date: 20240418
Priority Date: 20230419

Claims (20)

組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドを含むエンベロープであって、前記第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記糖タンパク質、前記標的化部分、またはこれらの任意の組み合わせに融合される、前記エンベロープと、目的の異種分子をコードする核酸分子と、を含む、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記ウイルス糖タンパク質は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、エボラウイルス（ＥｂＶ）、ニパウイルス（ＮｉＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、コイ春ウイルス血症ウイルス（ＳＶＣＶ）またはこれらの組み合わせからなる群のウイルスに由来する、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記ウイルス糖タンパク質は、ＨＩＶ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＳＩＶ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＥｂＶ糖タンパク質、ＮｉＶ－Ｇ、ＮｉＶ－Ｆ、ＭｅＶ－Ｈ、ＭｅＶ－Ｆ、ＶＳＶ－Ｇ、ＳＶＣＶ－Ｇ、これらの任意の変異体、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記ウイルス様粒子は、レトロウイルス様粒子またはレトロウイルスベクターである、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記レトロウイルス様粒子は、レンチウイルスベースのウイルス粒子またはウイルスベクターである、請求項４に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、ポリヒスチジンタグ、ポリアルギニンタグ、ＦＬＡＧタグ、ストレプトアビジンタグ、カルモジュリン結合ペプチド、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択されるアフィニティータグである、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記ストレプトアビジンタグは、ストレプトアビジン結合ペプチド、ストレプトアビジン結合タグ、ｓｔｒｅｐ－ｔａｇＩＩ、ｔｗｉｎ－ｓｔｒｅｐｔａｇ、式Ｉのタグ、式ＩＩのタグ、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択される、請求項６に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、ｓｔｒｅｐ－ｔａｇＩＩポリペプチド配列である、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記糖タンパク質に融合される、請求項１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記糖タンパク質のＮ末端、Ｃ末端、または内部に位置する、請求項９に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、少なくとも第２のアフィニティー結合ポリペプチドを含む、請求項９に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第２のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記糖タンパク質のＮ末端、Ｃ末端、または内部に位置する、請求項１１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、少なくとも第３、少なくとも第４、または少なくとも第５のアフィニティー結合ポリペプチドを含む、請求項１１に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第３、前記少なくとも第４、または前記少なくとも第５のアフィニティー結合ポリペプチドの各々は、独立して、前記糖タンパク質のＮ末端、Ｃ末端、または内部に位置する、請求項１３に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記糖タンパク質はエボラ糖タンパク質である、請求項９に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記エボラ糖タンパク質のＮ末端に融合される、請求項１５に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、前記エボラ糖タンパク質のＭＬＤドメインと置き換わるかまたはＭＬＤドメイン内にある、請求項１５に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記第１のアフィニティー結合ポリペプチドに融合された前記エボラ糖タンパク質は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、または配列番号１９１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記糖タンパク質はＶＳＶ－Ｇ糖タンパク質である、請求項９に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。
前記ＶＳＶ－Ｇ糖タンパク質は、配列番号３７に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３７と比較して１８２位に変異を含む、請求項１９に記載の偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクター。

Description

関連出願本出願は、２０２３年４月１９日に出願された米国仮出願第６３／４９７，１００号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に援用される。電子的に提出された配列表の参照本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出されている配列表を含有し、その配列表の全体が参照により本明細書に援用される。２０２４年４月１６日に作成された当該ＸＭＬの写しは、名称が「ＩＮＨ－０１５ＷＯ＿ＳＬ．ｘｍｌ」であり、サイズが２４３，６３２バイトである。本明細書で提供される実施形態は、ウイルスベクターの精製に関する。レンチウイルスは、非分裂細胞に形質導入し、標的細胞のゲノムへの安定した組み込みをもたらすことができるため、遺伝子治療で使用される一般的なベクターである。レンチウイルスベクターの宿主範囲は、他のウイルスに由来する糖タンパク質を用いた偽型化によって変えることができる。その場合、そのような偽型レンチウイルスベクターは、エンベロープタンパク質が由来するウイルスと同様の受容体表現型を示す。それ故、当該ウイルスの宿主範囲に応じて、偽型レトロウイルスベクターは、相同のレトロウイルスエンベロープタンパク質が組み込まれているベクター粒子と比較して、広いまたは狭い宿主範囲を有することになる。現行のウイルス精製スキームとしては、高速遠心分離、及びショ糖勾配等の密度勾配精製スキームを挙げることができるが、そのスキームは、十分にスケーラブルではないか、または医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理に関する基準（ＧＭＰ）プロトコルへの適応が容易ではない可能性がある。したがって、現行のウイルス精製スキームの欠点を克服する必要が依然としてある。本明細書で提供される実施形態は、こうした必要性ばかりでなく、その他のものも満たすものである。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチド、ならびに目的の異種分子をコードする核酸分子を含み、当該アフィニティー結合ポリペプチドは、当該糖タンパク質、当該標的化部分、またはこれらの任意の組み合わせに融合される。いくつかの実施形態では、アフィニティー結合ポリペプチドは、糖タンパク質に融合される。いくつかの実施形態では、アフィニティー結合ポリペプチドは、標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、ポリヒスチジンタグ、ポリアルギニンタグ、ＦＬＡＧタグ、ストレプトアビジンタグ、カルモジュリン結合ペプチド、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択されるアフィニティータグである。いくつかの実施形態では、ストレプトアビジンタグは、ストレプトアビジン結合ペプチド、ストレプトアビジン結合タグ、ｓｔｒｅｐ－ｔａｇＩＩ、ｔｗｉｎ－ｓｔｒｅｐｔａｇ、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、糖タンパク質に融合される。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、糖タンパク質のＮ末端、Ｃ末端、または内部に位置する。いくつかの実施形態では、糖タンパク質は、エボラウイルス糖タンパク質、ＮｉＶ－Ｇタンパク質、ＮｉＶ－Ｆタンパク質、ＭｅＶ－Ｈタンパク質、ＭｅＶ－Ｆタンパク質、ＶＳＶ－Ｇタンパク質、ＳＶＣＶ－Ｇタンパク質、またはこれらの任意の変異体からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ｓｃＦｖ、抗原結合ドメイン、ＶＨＨ、ＤＡＲＰｉｎ、アドネクチン、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アプタマー、アルマジロリピートタンパク質ベースの足場、アトリマー、アビマー、フィノマー、ノッチン、クニッツドメインペプチド、モノボディ、ナノフィチン、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ウイルス糖タンパク質に融合される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ウイルス糖タンパク質に融合されない。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＣＤ７に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１０１に対して少なくとも８５％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１０２に対して少なくとも８５％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＣＤ８に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１１９に対して少なくとも８５％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１２０に対して少なくとも８５％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で提供されるとおりである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で提供されるとおりのＣＤ７に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で提供されるとおりのＣＤ８に結合する。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための操作された標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチド、ならびに目的の異種分子をコードする核酸を含み、当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、当該糖タンパク質に融合され、当該糖タンパク質は、配列番号２５、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号７４、配列番号７７、配列番号７９、または配列番号８０に記載されているとおりのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための操作された標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチド、ならびに目的の異種分子をコードする核酸分子を含み、当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、当該糖タンパク質に融合され、当該糖タンパク質に融合された当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３５、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、または配列番号１９１に記載されているとおりのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドを含むエンベロープであって、当該アフィニティー結合ポリペプチドは、当該糖タンパク質、当該標的化部分、またはこれらの任意の組み合わせに融合される当該エンベロープと、目的の異種分子をコードする核酸分子と、を含む、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供され、ここで、当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、当該標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、ウイルス糖タンパク質は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、エボラウイルス（ＥｂＶ）、ニパウイルス（ＮｉＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、コイ春ウイルス血症ウイルス（ＳＶＣＶ）またはこれらの組み合わせからなる群のウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、ウイルス糖タンパク質は、ＨＩＶ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＳＩＶ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＥｂＶ糖タンパク質、ＮｉＶ－Ｇ、ＮｉＶ－Ｆ、ＭｅＶ－Ｈ、ＭｅＶ－Ｆ、ＶＳＶ－Ｇ、ＳＶＣＶ－Ｇ、これらの任意の変異体、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、レトロウイルス様粒子またはレトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス様粒子は、レンチウイルスベースのウイルス粒子またはウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、ポリヒスチジンタグ、ポリアルギニンタグ、ＦＬＡＧタグ、ストレプトアビジンタグ、カルモジュリン結合ペプチド、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択されるアフィニティータグである。いくつかの実施形態では、ストレプトアビジンタグは、ストレプトアビジン結合ペプチド、ストレプトアビジン結合タグ、ｓｔｒｅｐ－ｔａｇＩＩ、ｔｗｉｎ－ｓｔｒｅｐｔａｇ、またはこれらの変異体もしくは組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、ｓｔｒｅｐ－ｔａｇＩＩポリペプチド配列である。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための操作された標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチド、ならびに目的の異種分子をコードする核酸分子を含み、当該標的化部分は、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１１９、または配列番号１２０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、当該標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターが提供される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、組換えウイルス糖タンパク質、標的細胞に結合するための操作された標的化部分、及び少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチド、ならびに目的の異種分子をコードする核酸分子を含み、当該標的化部分はｓｃＦｖであり、当該少なくとも第１のアフィニティー結合ポリペプチドは、当該標的化部分に融合され、配列番号１２１、配列番号１２６、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番