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JP-2026514818-A - 活性化可能な二特異性抗ＣＤ２８および抗ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにそれらの使用

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Abstract

PD-L1に特異的に結合し、疾患組織において活性化可能な特異的CD28結合も示すタンパク質分子が本明細書に提供される。さらに、がんを処置するためのこのようなタンパク質分子の使用が本明細書に提供される。このタンパク質分子は、重鎖を含む第1のポリペプチド鎖と、軽鎖を含む第2のポリペプチド鎖とを含み、前記重鎖が、N末端からC末端の順に、抗PD-L1重鎖可変(VH)ドメイン、第1のCH1ドメイン、第1のリンカー、抗CD28 VHドメイン、および第2のCH1ドメインを含み、前記軽鎖が、N末端からC末端の順に、抗PD-L1軽鎖可変(VL)ドメイン、第1の免疫グロブリン軽鎖定常領域、第2のリンカー、抗CD28 VLドメイン、および第2の免疫グロブリン軽鎖定常領域を含む。

Inventors

  • フィンレー， ウィリアム ジェイムズ ジョナサン

Assignees

  • センテッサ ファーマシューティカルズ （ユーケー） リミテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240419
Priority Date
20230419

Claims (20)

  1. 重鎖を含む第１のポリペプチド鎖と、軽鎖を含む第２のポリペプチド鎖とを含むタンパク質であって、 前記重鎖が、Ｎ末端からＣ末端の順に、抗ＰＤ－Ｌ１重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、第１のＣＨ１ドメイン、第１のリンカー、抗ＣＤ２８ ＶＨドメイン、および第２のＣＨ１ドメインを含み、 前記軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端の順に、抗ＰＤ－Ｌ１軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、第１の免疫グロブリン軽鎖定常領域、第２のリンカー、抗ＣＤ２８ ＶＬドメイン、および第２の免疫グロブリン軽鎖定常領域を含む、タンパク質。
  2. 前記重鎖が、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＨドメイン、前記第１のＣＨ１ドメイン、前記第１のリンカー、前記抗ＣＤ２８ ＶＨドメイン、前記第２のＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む、請求項１に記載のタンパク質。
  3. ヒンジおよびＦｃ領域を含む第３のポリペプチド鎖をさらに含む、請求項１または２に記載のタンパク質。
  4. 前記第３のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のタンパク質。
  5. 前記第１のリンカーが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質。
  6. 前記第２のリンカーが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のタンパク質。
  7. 前記抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＨドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み、 前記抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＬドメインが、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み、 前記抗ＣＤ２８ ＶＨドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み、 前記抗ＣＤ２８ ＶＬドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、 請求項１から６のいずれか一項に記載のタンパク質。
  8. 前記抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＨドメインが、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＬドメインが、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のタンパク質。
  9. 前記抗ＣＤ２８ ＶＨドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のタンパク質。
  10. 前記抗ＣＤ２８ ＶＬドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のタンパク質。
  11. 前記重鎖が、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のタンパク質。
  12. 前記軽鎖が、配列番号２８または配列番号２９のアミノ酸配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のタンパク質。
  13. （ａ）前記重鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む；または （ｂ）前記重鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のタンパク質。
  14. 前記重鎖が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ定常領域を含む、請求項２または３に記載のタンパク質。
  15. 前記重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２定常領域を含む、請求項２または３に記載のタンパク質。
  16. 前記重鎖が、免疫学的に不活性な定常領域を含む、請求項２または３に記載のタンパク質。
  17. 前記重鎖が、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、またはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域を含み、番号付けが、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従う、請求項２または３に記載のタンパク質。
  18. 治療剤に連結された、請求項１から１７のいずれか一項に記載のタンパク質を含む、イムノコンジュゲート。
  19. 前記治療剤が、細胞毒性、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはアポトーシス促進剤である、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  20. 請求項１から１７のいずれか一項に記載のタンパク質、または請求項１８もしくは１９に記載のイムノコンジュゲート、および薬学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤を含む、医薬組成物。

Description

相互参照 本出願は、２０２３年４月１９日に出願された米国仮出願第６３／４９７，０８４号の利益を主張し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。 技術分野 本開示は、活性化可能な二特異性タンパク質およびがんの処置に関する。 背景 免疫腫瘍学療法において、主要な薬物標的のほとんどは疾患組織にのみ発現するものではなく、大部分は非疾患組織においても発現している。加えて、がん処置に用いられる多くの薬物は、非常に強力な細胞死滅作用機序を利用している。その結果として、非疾患組織における薬物による標的の係合は、多くの場合、望ましくない副作用を引き起こす。 ＰＤ－Ｌ１は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである細胞表面受容体であり、主に非疾患組織における骨髄性細胞および制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞上で発現する。しかしながら、ＰＤ－Ｌ１は、一部のがん細胞上で高度に発現することも観察されている。ＰＤ－Ｌ１は膜タンパク質ＰＤ１に結合する。Ｔ細胞上でのＰＤ－Ｌ１とＰＤ１との相互作用は、Ｔ細胞の炎症活性を下方制御し、免疫自己寛容を促進する。したがって、ＰＤ－Ｌ１は免疫チェックポイントとして記載されている。それ故、ＰＤ１との相互作用を遮断するアンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、抗がんＴ細胞応答を自然免疫抑制から解放することにより、がんなどの疾患環境において良好な耐容性を示す免疫療法剤として作用する可能性を実証している。そのため、ＰＤ－Ｌ１は、適応免疫系の抗がん効果を増幅させるために使用される薬物標的である。しかしながら、多くの場合、腫瘍は、抗ＰＤ－Ｌ１剤の効果を無効にするために複数の「回避機序」を使用し得、そのうちの１つは、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）のような共刺激リガンド分子の下方制御である。 ＣＤ２８はＣＤ８０およびＣＤ８６タンパク質の両方に対する受容体である。これはグリコシル化され、細胞表面上に発現するジスルフィド結合した４４ｋＤａのホモ二量体である。ＣＤ２８は主にＴ細胞上に発現するが、これは他の適応免疫細胞および自然免疫細胞上でも同定されている。特にＴＣＲシグナル伝達と併せたＣＤ８０またはＣＤ８６によるＣＤ２８の結合および活性化は、Ｔ細胞の活性化および記憶を増強する強力な免疫促進シグナルを提供する。 歴史的に、抗体はＣＤ２８細胞外ドメインに対して生成され、このドメインは、結合により、Ｔリンパ球において共刺激活性化シグナルを誘導し得、そのシグナルは、炎症活性の増加、増殖、および感染細胞またはがん性細胞に対する細胞溶解活性をもたらす。これらの抗体由来の結合性ドメインを使用して、標的が豊富な疾患組織にＴ細胞共刺激活性を指向し得るＣＤ２８にライゲーションする二特異性剤もまた、生成されている。したがって、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＤ２８にも結合する能力を獲得することによって、より強力かつ広範に作用する治療剤となり得、これにより、抗ＰＤ－Ｌ１抗体耐性疾患環境において、Ｔ細胞の死滅機序を強力に増強する。これは、主要なチェックポイント阻害剤の機能を誘導可能な「合成免疫」と組み合わせ、適応免疫系を相乗的に刺激することが可能となる。しかしながら、この組合せを単一の治療剤構造において（例えば、完全に活性なＰＤ－Ｌ１およびＣＤ２８結合性ドメインを有する標準的な二特異性抗体フォーマットにおいて）機能させる能力は、Ｔ細胞および骨髄細胞、ならびにその他などの多くの細胞型でのＰＤ－Ｌ１およびＣＤ２８の両方の比較的広範な発現プロファイルによって制限される。この広範な発現プロファイルは、ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２８結合剤に対する用量制限毒性だけでなく、複合的な機序を活用するために疾患組織において高度に十分な曝露を達成するこのような薬剤の能力を制限する、深刻な末梢シンク（sink）／生体内分布の問題も引き起こし得る。したがって、疾患組織環境を特異的に標的とする活性を有する操作された形態の二特異性結合タンパク質に対する必要性が存在している。 図１Ａは、インタクト（左）、活性化プロテアーゼ切断（中央）、および不活性化プロテアーゼ切断（右）のコンフォメーションにおける本明細書に開示されるタンパク質分子の例示的な非対称的な１本のアームの構築物の図を示す。インタクトなコンフォメーションでは、抗ＰＤ－Ｌ１ Ｆａｂ結合性ドメインは曝露され、それらのコグネイト標的に結合することができる。抗ＣＤ２８ Ｆａｂドメインは、重鎖および軽鎖の両方におけるリンカーによって結合が阻害され、これらのリンカーは両方ともタンパク質分解により切断可能であり、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）および／またはカテプシンによって順次切断され得る。第１の切断事象により、単一のタンパク質構築物由来の抗ＰＤ－Ｌ１および抗ＣＤ２８ Ｆａｂの両方がそれらのコグネイト標的に結合することを可能にする中間活性状態が生じ、これにより、ＰＤ－Ｌ１＋免疫抑制微小環境においてＣＤ２８＋細胞の活性化を方向付ける可能性がある。第２の切断により、抗ＰＤ－Ｌ１および抗ＣＤ２８のＦａｂが解離され、単一分子がＰＤ－Ｌ１およびＣＤ２８の両方に同時に結合する能力が取り除かれる。図１Ｂは、本明細書に記載されるタンパク質分子の対称的な２本のアームの構築物および対称的な１本のアームの構築物を示す。図１Ｂは２つの図を示す。１つは、２つの重鎖および２つの軽鎖からなるインタクトな対称的なツーアームＬＢ（ＬＰＤ）タンパク質（左）の図を示し、重鎖および軽鎖からなるインタクトな対称的なワンアームＬＢ（ＬＰＤ）タンパク質（右）の図を示す。対称的なツーアームＬＰＤタンパク質は、各々、下部ヒンジリンカー（ＬＨＬ）によって連結された２つのＦａｂから構成される、２つの軽鎖断片からなる。各重鎖は、下部ヒンジリンカー（ＬＨＬ）によって連結された２つのＦａｂ、Ｆｃヒンジ、ならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方を含むＦｃ断片から構成される（左）。対称的なワンアームＬＢタンパク質は、下部ヒンジリンカー（ＬＨＬ）によって連結された２つのＦａｂ、ならびにＮ結合型グリコシル化部位（ＣＨ２）またはＫｎｏｂ突然変異（ＣＨ２）のいずれかを有するＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方を含むＦｃ断片から構成される１つの軽鎖分子からなる。軽鎖は、下部ヒンジリンカー（ＬＨＬ）によって連結された２つのＦａｂ、Ｆｃヒンジ、ならびにＮ結合型グリコシル化部位（ＣＨ２）またはＫｎｏｂ突然変異（ＣＨ３）のいずれかを有するＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方を含むＦｃ断片から構成される１つの重鎖と対を形成する（右）。同上。 図２は、本明細書に提供される活性化可能な二特異性タンパク質分子の活性の機序の図を示す。ＣＤ２８結合性ドメインの解放された活性は本質的に単量体であるため、これは直接的にＣＤ２８活性化を引き起こすことができず、ＰＤ－Ｌ１＋細胞への結合に依存し、近傍の免疫細胞に対してトランスでＣＤ２８結合の多価提示をもたらして、ＣＤ２８シグナル伝達を誘導する。活性化された分子は、これにより、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ１シグナル伝達を同時に遮断して、阻害されないＴＣＲ「シグナル１」を復活させ、ＣＤ２８シグナル伝達を提供して、Ｔ細胞活性を「シグナル２」を介して増幅させる。 図３は、ヒト組換えＣＤ２８への各ＣＤ２８ Ｖドメイン（一価Ｆａｂフォーマットにおける）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合を示す。 図４は、ＥＬＩＳＡにおけるヒト／カニクイザルおよびマウスＣＤ２８タンパク質への精製したＩｇＧ＿００１およびＩｇＧ＿００２またはＴＧＮ１４１２（ＩｇＧ４）のＥＬＩＳＡ結合を示す。使用した陰性対照タンパク質はヒトＩｇＧ１アイソタイプである。ＴＧＮ１４１２、ＩｇＧ＿００１、およびＩｇＧ＿００２は、ヒト／カニクイザルＣＤ２８に同様のレベルで結合し、アイソタイプ対照ではシグナルは検出されなかった。マウスＣＤ２８組換えタンパク質では、いずれのタンパク質に対する結合も検出されなかった。 図５は、還元条件または非還元条件下でＳＤＳ ＰＡＧＥ上に流したＭＭＰ１２消化ＬＰＤタンパク質を示す。２μｇ／レーンの例示的なＬＰＢタンパク質－１、－２、－３、－６、－７、－８、－９、－１０、－１１、－１２を、指定した時間のＭＭＰ１２とのインキュベーション後、それぞれ還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上にロードした。図５Ａは、ＭＭＰ１２と０時間、１時間、２時間、４時間、および８時間インキュベートしたＬＰＤ２８－１およびＬＰＤ２８－２タンパク質の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいてそれぞれ有意な２５ｋＤａ／５０ｋＤａバンドが現れ、これは、軽鎖の切断、および還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における１５０ｋＤａ）のインタクトな重鎖の消失に起因する。下方のバンドの出現および上方のバンドの消失が同時に観察され得、重鎖および軽鎖の両方におけるリンカーが切断されることを実証している。図５Ｂは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および８時間インキュベートしたＬＰＤ２８－３タンパク質の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいてそれぞれ有意な２５ｋＤａ／５０ｋＤａバンドが現れ、これは、軽鎖の切断、および還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における１５０ｋＤａ）のインタクトな重鎖の消失に起因する。下方のバンドの出現および上方のバンドの消失が同時に観察され得、重鎖および軽鎖の両方におけるリンカーが切断されることを実証している。図５Ｃは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および２４時間インキュベートしたＬＰＢ２８－６の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて有意な２５ｋＤａおよび５０ｋＤａバンドが現れ、これは、軽鎖および重鎖の切断、ならびに還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における１５０ｋＤａ）のインタクトな鎖の消失の付随に起因する。図５Ｄは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および２４時間インキュベートしたＬＰＢ２８－７の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて有意な２５ｋＤａおよび５０ｋＤａバンドが現れ、これは、軽鎖および重鎖の切断、ならびに還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における１５０ｋＤａ）のインタクトな鎖の消失の付随に起因する。図５Ｅは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および２４時間インキュベートしたＬＰＢ２８－８およびＬＰＤ２８－９の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて有意な２５ｋＤａおよび５０ｋＤａバンドが現れ、これは、軽鎖および重鎖の切断、ならびに還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における１５０ｋＤａ）のインタクトな鎖の消失の付随に起因する。図５Ｆは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および８時間インキュベートしたＬＰＢ２８－１０の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて有意な２５ｋＤａおよび約５５ｋＤａバンド、ならびに還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて約５０ｋＤおよび約１２０ｋＤａがそれぞれ現れ、これは、軽鎖の切断、ならびに還元条件における７５ｋＤａ（および非還元条件における２５０ｋＤａ）のインタクトな重鎖の消失に起因する。下方のバンドの出現および上方のバンドの消失は同時に観察され得、重鎖および軽鎖の両方におけるリンカーが切断されることを実証している。図５Ｇは、ＭＭＰ１２と０時間、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、および２４時間インキュベートしたＬＰＢ２８－１１の消化プロファイルを示す。注目すべきことに、還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて有意な２５ｋＤａおよび約５５