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JP-2026514918-A - ＫＲＡＳ突然変異を識別する高親和性Ｔ細胞受容体及びその応用

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Abstract

ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体に結合する特性を有する、ＴＣＲを提供する。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ陽性疾患を診断、治療及び予防するための薬物の調製に使用できる、多価ＴＣＲ複合体、ＴＣＲをコードする核酸分子、核酸分子を含むベクター、ＴＣＲを発現する細胞、及び前記物質を含む医薬組成物をさらに提供する。ＴＣＲの調製方法をさらに提供する。

Inventors

  • リャン ユーシュアン
  • ジャン カイ
  • ペン ジェン
  • スン ハンリ
  • ジャン ツイチョン
  • ホァン ジャオ
  • ウェン ジーミン
  • メイ インイー

Assignees

  • エックスライフエスシー リミテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240419
Priority Date
20230419

Claims (20)

  1. ＴＣＲα鎖可変ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、 ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体に結合する活性を有し、 また前記ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列相同性を有し、及び前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列相同性を有することを特徴とする、前記ＴＣＲ。
  2. 前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインにおいてＣＤＲ１βはＭＮＨＥＹであり、及びＣＤＲ２βはＳＶＧＥＧＴであり、及びＣＤＲ３βはＡＳＳＹＬＷＳＹＥＱＹであることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  3. 前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  4. 前記ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列相同性を有し、及び前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列相同性を有することを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  5. 前記ＴＣＲα鎖可変ドメインの三つのＣＤＲ（相補性決定領域）の参照配列は、次のとおりであり、 ＣＤＲ１α：ＴＲＤＴＴＹＹ ＣＤＲ２α：ＲＮＳＦＤＥＱＮ ＣＤＲ３α：ＡＬＳＥＡＧＮＤＭＲ、また少なくとも一つの以下の突然変異を含むことを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  6. 前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインの三つのＣＤＲ（相補性決定領域）の参照配列は、次のとおりであり、 ＣＤＲ１β：ＭＮＨＥＹ ＣＤＲ２β：ＳＶＧＥＧＴ ＣＤＲ３β：ＡＳＳＹＬＷＳＹＥＱＹ、また少なくとも一つの以下の突然変異を含むことを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  7. 前記ＴＣＲは、以下からなる群から選択されるＣＤＲを有することを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  8. 前記ＴＣＲは、可溶性であることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  9. 前記ＴＣＲは、α鎖ＴＲＡＣ定常領域配列及びβ鎖ＴＲＢＣ１又はＴＲＢＣ２定常領域配列を含む、αβヘテロ二量体ＴＣＲであることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  10. 前記ＴＣＲは、（ｉ）ＴＣＲα鎖可変ドメイン及びＴＣＲα鎖定常領域の膜貫通ドメインを除く全部又は一部、並びに（ｉｉ）ＴＣＲβ鎖可変ドメイン及びＴＣＲβ鎖定常領域の膜貫通ドメインを除く全部又は一部を含むことを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  11. 前記ＴＣＲは、α鎖定常領域及びβ鎖定常領域を含み、また前記α鎖定常領域とβ鎖定常領域との間には、人工鎖間ジスルフィド結合を含み、 選択可能に、前記ＴＣＲα鎖定常領域とβ鎖定常領域との間に人工鎖間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基は、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＴｈｒ４８及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＳｅｒ５７、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＴｈｒ４５及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＳｅｒ７７、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＴｙｒ１０及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＳｅｒ１７、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＴｈｒ４５及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＡｓｐ５９、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＳｅｒ１５及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＧｌｕ１５、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＡｒｇ５３及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＳｅｒ５４、 ＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＰｒｏ８９及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＡｌａ１９、 並びにＴＲＡＣ＊０１のエクソン１のＴｙｒ１０及びＴＲＢＣ１＊０１又はＴＲＢＣ２＊０１のエクソン１のＧｌｕ２０から選択される一つ又は複数の部位に置換されることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  12. 前記ＴＣＲは、以下の（I）及び（II）に示されるような条件のうちの一つ又は複数を満たし、 （I）前記ＴＣＲのα鎖可変ドメインアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３～４６のいずれか一つであり、及び （II）前記ＴＣＲのβ鎖可変ドメインアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７～６０のいずれか一つであり、 選択可能に、前記ＴＣＲは、以下からなる群から選択され、 （１）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （４）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （５）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （６）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （７）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （８）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （９）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１０）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１１）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１２）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１３）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１４）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１５）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１６）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１７）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１８）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （１９）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２０）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２１）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２２）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２３）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２４）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２５）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２６）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２７）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２８）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （２９）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３０）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３１）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３２）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３３）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３４）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、 （３５）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７であり、 （３６）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８であり、 （３７）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９であり、 （３８）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０であり、 （３９）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１であり、 （４０）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２であり、 （４１）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３であり、 （４２）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４であり、 （４３）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５であり、 （４４）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６であり、 （４５）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７であり、 （４６）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８であり、 （４７）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９であり、並びに （４８）α鎖可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であり、及びβ可変ドメイン配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０であることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  13. 前記ＴＣＲは、一本鎖ＴＣＲであり、 選択可能に、前記ＴＣＲは、α鎖可変ドメインとβ鎖可変ドメインとからなる一本鎖ＴＣＲであり、前記α鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインは、フレキシブルショートペプチド配列（ｌｉｎｋｅｒ）によって連結されることを特徴とする 請求項１に記載のＴＣＲ。
  14. 前記ＴＣＲは、以下のI）及びII）に示されるような条件のうちの一つ又は複数を満たし、 I）前記ＴＣＲのα鎖のＣ－末端又はＮ－末端にコンジュゲートが結合され、及び II）前記ＴＣＲのβ鎖のＣ－末端又はＮ－末端にコンジュゲートが結合され、 選択可能に、前記コンジュゲートは、検出可能なマーカー又は治療剤であり、さらに選択可能に、前記治療剤は、抗－ＣＤ３抗体であることを特徴とする 請求項１～１３のいずれか１項に記載のＴＣＲ。
  15. 多価ＴＣＲ複合体であって、 前記多価ＴＣＲ複合体は、少なくとも二つのＴＣＲを含み、またそのうちの少なくとも一つのＴＣＲは、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＴＣＲであることを特徴とする、前記多価ＴＣＲ複合体。
  16. 核酸分子であって、 前記核酸分子は、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＴＣＲをコードする核酸配列又はその相補配列を含むことを特徴とする、前記核酸分子。
  17. ベクターであって、 前記ベクターは、請求項１６に記載の核酸分子を含むことを特徴とする、前記ベクター。
  18. 宿主細胞であって、 前記宿主細胞は、請求項１７に記載のベクターを含むか、又は染色体には請求項１６に記載の外因性核酸分子が組み込まれることを特徴とする、前記宿主細胞。
  19. 単離された細胞であって、 前記単離された細胞は、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＴＣＲを発現し、選択可能に、前記単離された細胞は、Ｔ細胞であることを特徴とする、前記単離された細胞。
  20. 単離された細胞であって、 前記単離された細胞は、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＴＣＲを発現し、また前記単離された細胞は、外因性ＣＤ８受容体をさらに発現し、選択可能に、前記ＣＤ８受容体は、ＣＤ８αであり、さらに選択可能に、前記単離された細胞は、Ｔ細胞であることを特徴とする、前記単離された細胞。

Description

発明の詳細な説明 ［技術分野］ 関連出願 本出願は、２０２３年０４月１９日に出願された中国特許出願第２０２３１０４２２０３３４号「ＫＲＡＳ突然変異を識別する高親和性Ｔ細胞受容体及びその応用」の優先権を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。 本出願は、生物医学技術分野に属し、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄを識別する高親和性Ｔ細胞受容体及びその応用に関し、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄタンパク質由来のポリペプチドを識別できるＴ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）にも関し、本出願は、前記ＴＣＲの調製方法及び用途にも関する。 ［背景技術］ わずか２種類の分子が抗原を特異的に識別することができる。ここで、一つは、免疫グロブリン又は抗体であり、もう一つは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、それは、α鎖／β鎖又はγ鎖／δ鎖がヘテロ二量体形態として存在する細胞膜表面糖タンパク質である。免疫系のＴＣＲ総プロファイルの構成は、胸腺においてＶ（Ｄ）Ｊ組換え、次いで陽性及び陰性の選択によって生成される。末梢環境において、ＴＣＲは、Ｔ細胞がマスター組織適合性複合体－ペプチド複合体（ｐＭＨＣ）に対する特異的識別を媒介するため、免疫系の細胞性免疫機能にとって極めて重要である。 ＴＣＲは、マスター組織適合性複合体（ＭＨＣ）上に提示される特異的抗原ペプチドに対する唯一の受容体であり、このような外因性ペプチド又は内因性ペプチドは、細胞に異常が出現する唯一の兆候となる場合がある。免疫系において、抗原特異的ＴＣＲとｐＭＨＣ複合体との結合は、Ｔ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との直接的な物理接触を引き起こし、次いで、Ｔ細胞及びＡＰＣの両方の他の細胞膜表面分子は、相互作用し、これは、一連の後続の細胞シグナル伝達及び他の生理学的反応を引き起こし、それにより異なる抗原特異的Ｔ細胞がその標的細胞に対して免疫効果を発揮できるようになる。 ＴＣＲに対応するＭＨＣ Ｉクラス及びＩＩクラスの分子リガンドも免疫グロブリンスーパーファミリーのタンパク質であるが、抗原の提示には特異的であり、異なる個体によってＭＨＣが異なり、それによりタンパク質抗原における異なるショートペプチドをそれぞれのＡＰＣ細胞表面に提示することができる。ヒトＭＨＣは、通常、ＨＬＡ遺伝子又はＨＬＡ複合体と呼ばれる。 ＫＲＡＳ遺伝子（Ｐ２１遺伝子）は、マウス肉腫ウイルスの癌遺伝子であり、ｒａｓ遺伝子ファミリーのメンバーの一つであり、ＫＲＡＳタンパク質をコードする。ＫＲＡＳ遺伝子が突然変異すると、細胞成長を持続的に刺激し、腫瘍形成につながる可能性がある。ここで、Ｇ１２Ｄは、よく見られる突然変異部位の一つであり、当該突然変異体は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄと呼ばれる。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄは、肺がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん等を含むがこれらに限定されない、様々なヒト癌細胞で発現されることが文献で示される（ＦＩＳＨＥＲ ＧＨ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １５（２４）：３２４９－３２６２、Ｂｒｙｃｈｔａ Ｎ ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ６２（１１）：１４８２－１４９１、Ｏｎｄｒｅｊ Ｆｉａｌａ ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｔｕｍｏｕｒ Ｂｉｏｌ ３７（５）：６８２３－３０、ＡｎａＳ．Ｌｅａｌ ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ８３（１）：ｅ４８等）。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異後のショートペプチドＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫは、ＫＲＡＳアミノ酸の７～１６位に位置し、関連疾患治療の標的となっている。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄは、細胞内で生成された後に小分子ポリペプチドに分解され、且つＭＨＣ（マスター組織適合性複合体）分子と結合して複合体を形成し、細胞表面に提示され、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫは、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ抗原に由来するショートペプチドである。上記疾患の治療には、化学療法及び放射線療法等の方法使用できるが、どちらも自体の正常細胞を損害することがある。 従って、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体は、腫瘍細胞を標的とすることができるＴＣＲマーカーを提供する。ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体に結合できるＴＣＲは、腫瘍の治療に対して非常に高い応用価値を有する。例えば、当該腫瘍細胞マーカーを標的とすることができるＴＣＲは、細胞傷害性薬剤又は免疫刺激剤を標的細胞に送達するか、又はＴ細胞に形質転換して、当該ＴＣＲを発現するＴ細胞が腫瘍細胞を破壊するようにし、養子免疫療法と呼ばれる治療中に患者に投与することができる。前者の目的において、理想的なＴＣＲは、より高い親和性を有し、それにより当該ＴＣＲは、標的とする細胞上に長期間存在することができる。後者の目的において、中程度の親和性を有するＴＣＲが好ましい。従って、当業者は、異なる目的を満たすために腫瘍細胞マーカーを標的とすることができるＴＣＲの開発に尽力している。 ［発明の概要］ ［発明が解決しようとする課題］ 従来技術の欠点を解消するために、本出願の目的は、ＫＲＡＳ突然変異を識別する高親和性Ｔ細胞受容体及びその応用を提供することである。技術的解決策は、次のとおりである。 ［課題を解決するための手段］ 本出願の第１態様は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、前記ＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変ドメインを含み、前記ＴＣＲは、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体に結合する活性を有し、 また前記ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％等であり得る）の配列相同性を有し、及び前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％等であり得る）の配列相同性を有する。 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１： ＡＱＫＶＴＱＡＱＴＥＩＳＶＶＥＫＥＤＶＴＬＤＣＶＹＥＴＲＤＴＴＹＹＬＦＷＹＫＱＰＰＳＧＥＬＶＦＬＩＲＲＮＳＦＤＥＱＮＥＩＳＧＲＹＳＷＮＦＱＫＳＴＳＳＦＮＦＴＩＴＡＳＱＶＶＤＳＡＶＹＦＣＡＬＳＥＡＧＮＤＭＲＦＧＡＧＴＲＬＴＶＫＰ。 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２： ＮＡＧＶＴＱＴＰＫＦＲＶＬＫＴＧＱＳＭＴＬＬＣＡＱＤＭＮＨＥＹＭＹＷＹＲＱＤＰＧＭＧＬＲＬＩＨＹＳＶＧＥＧＴＴＡＫＧＥＶＰＤＧＹＮＶＳＲＬＫＫＱＮＦＬＬＧＬＥＳＡＡＰＳＱＴＳＶＹＦＣＡＳＳＹＬＷＳＹＥＱＹＦＧＰＧＴＲＬＴＶＴ。 一例示において、前記ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列及び前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、同時に野生型ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列及び野生型ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列ではない。 別の例示において、前記ＴＣＲのα鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示される配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含むか、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示される配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１個のアミノ酸残基の突然変異を有する。 別の例示において、前記ＴＣＲのβ鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列相同性を有するアミノ酸配列であるか、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１個のアミノ酸残基の突然変異を有する。 別の例示において、前記ＴＣＲα鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列相同性を有し、及び前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列相同性を有する。 別の例示において、前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインにおいてＣＤＲ１βはＭＮＨＥＹであり、及びＣＤＲ２βはＳＶＧＥＧＴであり、及びＣＤＲ３βはＡＳＳＹＬＷＳＹＥＱＹである。 別の例示において、前記ＴＣＲは、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体に結合する活性をさらに有する。 別の例示において、前記ＴＣＲα鎖可変ドメインの三つのＣＤＲは、 ＣＤＲ１α：ＴＲＤＴＴＹＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、 ＣＤＲ２α：ＲＮＳＦＤＥＱＮ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、及び ＣＤＲ３α：ＡＬＳＥＡＧＮＤＭＲ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７である。 また少なくとも一つの表１における突然変異を含む。 別の例示において、前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である。 別の例示において、前記ＴＣＲβ鎖可変ドメインの三つのＣＤＲは、 ＣＤＲ１β：ＭＮＨＥＹＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６、 ＣＤＲ２β：ＳＶＧＥＧＴ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７、及び ＣＤＲ３β：ＡＳＳＹＬＷＳＹＥＱＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８である。 また少なくとも一つの表２における突然変異を含む。 別の例示において、前記ＴＣＲとＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ－ＨＬＡ Ａ１１０１複合体との親和性は、野生型ＴＣＲの少なくとも２倍、例えば２、２．５、３、３．５、４、４．５又は５等であり得る。 別の例示において、前記ＴＣＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示されるα鎖可変ドメインにおいて突然変異を有し、前記突然変異は、Ｔ３０Ｅ／Ｑ／Ｄ／Ｍ／Ｓ／Ｖ／Ｙ、Ｔ３１Ｎ／Ｄ、Ｙ３２Ｆ、Ｒ５１Ｑ、Ｎ５２Ｔ／Ｖ／Ｑ、Ｆ５４Ｙ／Ｗ、Ｎ９９Ｒ、Ｄ１００Ｉ／Ｍ／Ｔ／Ｎ／Ｑ／Ｌ／Ｓ、Ｍ１０１Ｔ／Ｌ／Ｑ／Ｋ／Ｈ及びＲ１０２Ｎ／Ｈ／Ａ／Ｑ／Ｋ／Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｖのうちの一つ又は複数から選択され、ここで、アミノ酸残基番号は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示される番号を使用する。 別の例示において、前記ＴＣＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示されるβ鎖可変ドメインにおいて突然変異を有し、前記突然変異は、Ｍ２７Ｎ、Ｅ３０Ｄ、Ｇ５１Ｈ、Ｅ５２Ｑ／Ｎ／Ｋ／Ｔ、Ｇ５３Ｅ／Ｈ／Ｄ／Ｎ／Ｑ／Ｋ／Ｒ／Ｔ、Ｔ５４Ｈ／Ｓ／Ｉのうちの一つ又は複数から選択され、ここで、アミノ酸残基番号は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される番号を使用する。 別の例示において、前記ＴＣＲは、表３に記載のＣＤＲから選択されるＣＤＲを有する。 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列は、次に示されたとおりである。 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８：ＴＲＤＴＤＹＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９：ＴＲＤＴＮＹＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０：ＴＲＤＱＮＹＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１：ＴＲＤＥＮＦＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２：ＴＲＤＥＮＹＹ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３：ＡＬＳＥＡＧＲＩＴＮ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４：ＡＬＳＥＡＧＲＭＬＨ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５：ＡＬＩＥＡＧＲＴＱＡ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６：ＡＬＳＥＡＧＲＮＴＱ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７：ＡＬＳＥＡＧＲＱＬＫ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８：ＡＬＳＥＡＧＲＴＴＨ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９：ＡＬＳＥＡＧＲＴＫＱ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０：ＡＬＳＥＡＧＲＮＬＡ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１：ＡＬＳＥＡＧＲＮＫＳ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２：ＡＬＳＥＡＧＲＬＴＨ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３：ＡＬＳＥＡＧＰＬＨＳ ＳＥＱ