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JP-2026514935-A - 腎臓標的化ＡＡＶカプシドおよびその使用法

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Abstract

被験体において1またはこれより多くの腎臓細胞タイプにアデノ随伴ウイルス(AAV)を含む組成物を送達する方法であって、被験体の腎臓に、ゲノムおよびAAVKP1、AAVKP2、AAVKP3、AAVDJ、AAV2G9、またはAAV2.7m8カプシドタンパク質を含むアデノ随伴ウイルス(AAV)を局所送達する工程を含む方法が、開示される。被験体において腎障害を処置する方法であって、前記被験体の腎臓に、ゲノムおよびAAVKP1、AAVKP2、AAVKP3、AAVDJ、AAV2G9、またはAAV2.7m8カプシドタンパク質を含むアデノ随伴ウイルス(AAV)を局所送達する工程を含み、ゲノムは、被験体において腎障害を処置する治療剤をコードする、方法も開示される。 【選択図】図１Ｂ

Inventors

  • 中井 浩之
  • 古荘 泰佑
  • 堀川 雅弘

Assignees

  • オレゴン ヘルス アンド サイエンス ユニバーシティー

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240424
Priority Date
20230427

Claims (20)

  1. 被験体において１またはこれより多くの腎臓細胞タイプにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含む組成物を送達する方法であって、前記方法は、 前記被験体の腎臓に、ゲノムおよびＡＡＶＫＰ１、ＡＡＶＫＰ２、ＡＡＶＫＰ３、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶ２Ｇ９、またはＡＡＶ２．７ｍ８ カプシドタンパク質を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を局所送達する工程、 それによって、前記被験体において前記１またはこれより多くの腎臓細胞タイプに前記ＡＡＶを含む前記組成物を送達する工程、 を含む方法。
  2. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちの１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記腎臓に局所送達する工程は、直接的な実質注射、腎静脈注射、および／または腎動脈注射を含む、請求項１に記載の方法。
  5. 前記ＡＡＶは、前記被験体のメサンギウム細胞、糸球体内皮細胞、壁側上皮細胞、ポドサイト、近位尿細管細胞、ヘンレのループ細胞、遠位尿細管細胞、集合管細胞、線維芽細胞、周皮細胞、または血管平滑筋細胞のうちの少なくとも１つを形質導入する、請求項１に記載の方法。
  6. 前記ＡＡＶは、ＡＡＶ９の効率より約５倍～約２００倍高い効率で前記被験体の前記１またはこれより多くの腎臓細胞タイプを形質導入する、請求項１に記載の方法。
  7. 前記ゲノムは、治療用タンパク質をコードする核酸分子を含む、請求項１に記載の方法。
  8. 被験体において腎障害を処置する方法であって、前記方法は、 前記被験体の腎臓に、ゲノムおよびＡＡＶＫＰ１、ＡＡＶＫＰ２、ＡＡＶＫＰ３、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶ２Ｇ９、またはＡＡＶ２．７ｍ８ カプシドタンパク質を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を局所送達する工程、 を含み、ここで前記ゲノムは、前記被験体において前記腎障害を処置する治療剤をコードする、方法。
  9. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちの１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
  10. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
  11. 前記腎臓に前記局所送達する工程は、直接的な実質注射、腎静脈注射、および／または腎動脈注射を含む、請求項８に記載の方法。
  12. 前記ＡＡＶは、メサンギウム細胞、糸球体内皮細胞、壁側上皮細胞、ポドサイト、近位尿細管細胞、ヘンレのループ細胞、遠位尿細管細胞、集合管細胞、線維芽細胞、周皮細胞、または血管平滑筋細胞のうちの少なくとも１つを形質導入する、請求項８に記載の方法。
  13. 前記ＡＡＶは、ＡＡＶ９の効率より約５倍～約２００倍高い効率で前記１またはこれより多くの腎臓細胞タイプを形質導入する、請求項８に記載の方法。
  14. 前記腎障害は、糸球体疾患、尿細管間質性疾患、腎血管疾患、遺伝性腎疾患、自己免疫腎疾患、感染性腎疾患、先天性代謝異常症、腎臓がん、急性腎障害、慢性腎疾患、末期腎疾患、繊毛病、多発性嚢胞腎、ネフロン癆、バルデー－ビードル症候群、メッケル－グルーバー症候群、コラーゲン異常症、アルポート症候群、先天性ネフローゼ症候群、ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群、糸球体腎炎、腎結石症、シスチン尿症、デント病、腎尿細管性アシドーシス、ファンコニ症候群、遺伝性間質性腎疾患、糖尿病性腎症、菲薄基底膜症候群、腎性尿崩症、遺伝性高チロシン血症、シスチン症、ファブリー病、ギッテルマン症候群、バーター症候群、ロウ症候群、リドル症候群、またはステロイド抵抗性ネフローゼ症候群である、請求項８に記載の方法。
  15. 被験体において治療用タンパク質を１またはこれより多くの腎臓細胞タイプに送達することにおける使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含む組成物であって、前記方法は、 前記被験体の腎臓に、ゲノムおよびＡＡＶＫＰ１、ＡＡＶＫＰ２、ＡＡＶＫＰ３、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶ２Ｇ９、またはＡＡＶ２．７ｍ８ カプシドタンパク質を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を局所送達する工程を含み、ここで前記ゲノムは、前記治療用タンパク質をコードする核酸分子を含む、組成物。
  16. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちの１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の使用のための組成物。
  17. 前記カプシドタンパク質は、配列番号１～６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の使用のための組成物。
  18. 前記腎臓に局所送達する工程は、直接的な実質注射、腎静脈注射、および／または腎動脈注射を含む、請求項１５に記載の使用のための組成物。
  19. 前記ＡＡＶは、前記被験体のメサンギウム細胞、糸球体内皮細胞、壁側上皮細胞、ポドサイト、近位尿細管細胞、ヘンレのループ細胞、遠位尿細管細胞、集合管細胞、線維芽細胞、周皮細胞、または血管平滑筋細胞のうちの少なくとも１つを形質導入する、請求項１５に記載の使用のための組成物。
  20. 前記ＡＡＶは、ＡＡＶ９の効率より約５倍～約２００倍高い効率で前記被験体の前記１またはこれより多くの腎臓細胞タイプを形質導入する、請求項１５に記載の使用のための組成物。

Description

関連出願の相互参照 本出願は、２０２３年４月２７日出願の米国仮特許出願第６３／４６２，４９２号の利益を主張し、参照により本明細書に組み込まれる。 政府支援についての陳述 本発明は、Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって授与されたＰ５１ＯＤ０１１０９２の下で政府支援を得て行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。 開示の分野 本件は、遺伝子治療の方法の分野に関し、より具体的には、腎臓を標的化するために遺伝子治療において使用されるウイルスベクターおよびこのようなウイルスベクターを送達する方法に関する。 配列表 配列表は、ＸＭＬファイルとして、２０２４年４月２４日作成の「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｘｍｌ」（１２，１８８バイト）という名称のファイルの形態で提出され、参照により本明細書に組み込まれる。 背景 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、種々の器官における高レベルの形質導入を獲得し得るインビボ遺伝子治療の有望なベクターである。今日まで、６種の商業的ＡＡＶベクター遺伝子治療製品が、米国、欧州諸国および日本において規制当局によって承認されている。最初の２つの局所注射用製品、リポタンパク質リパーゼ欠損症を処置するための筋肉内注射用のＧＬＹＢＥＲＡ（登録商標）およびレーバー先天性黒内障２型を処置するための網膜下注射用のＬＵＸＴＵＲＮＡ（登録商標）の安全性および有効性の実証に伴って、脊髄性筋萎縮症の処置のための最初の静脈内注射用製品、ＺＯＬＧＥＮＳＭＡ（登録商標）が、２０１９年にＦＤＡによって承認された。２つのさらなる静脈内注射用製品は、血友病Ａおよび血友病Ｂの処置に関してＦＤＡおよびＥＭＡのいずれかまたは両方によって承認されており、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置のための別の静脈内ＡＡＶベクター製品は、非常に近い将来、ＦＤＡによって承認されることが期待されている。 しかし、肝臓、中枢神経系および骨格筋を標的化するための静脈内アプローチにおける顕著な進歩とは対照的に、高用量ですら、全身性のＡＡＶベクター投与によって他の器官において獲得されるものに類似のレベルで腎臓の形質導入を達成することは未だ困難である。一般的な血清型に基づくＡＡＶベクターの静脈内投与は、腎臓においてメサンギウム細胞および間質細胞の形質導入を達成し得るに過ぎず、現行のＡＡＶベクター媒介性の腎臓の遺伝子送達法は、尿細管上皮細胞およびポドサイトを含む臨床上関連する細胞タイプを、満足のいくレベルで効果的に形質導入できない。従って、腎疾患に関する遺伝子治療のために使用され得るＡＡＶベクターおよび方法のニーズが未だにある。 図面の簡単な説明 図１Ａ～１Ｂ． 腎静脈（ＲＶ）投与後の腎臓形質導入に関してＡＡＶ９より性能が優れているＡＡＶ Ｂａｒｃｏｄｅ－Ｓｅｑで同定された頑健なＡＡＶカプシド。（Ａ）雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、２×１０１３ｖｇ／ｋｇ（静脈内、ＩＶ）または３×１０１１ｖｇ／マウス（ＲＶ）（ＩＶに関してはｎ＝３／群、ＲＶに関してはｎ＝４／群）の用量で合計４７種の異なるＡＡＶカプシドを含むＡＡＶ－ＣＡＧ－Ｂａｒｃｏｄｅ（ＢＣ）ライブラリーを注射した。注射後６週間で腎臓を採取し、各ＡＡＶカプシドの相対的な形質導入効率を、ＡＡＶ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｂａｒｃｏｄｅ－Ｓｅｑによって決定した。（Ｂ）一般的なＡＡＶ血清型カプシドおよびＡＡＶＡｎｃ８０（薄灰色の棒）およびＲＶ注射によってＡＡＶ９より顕著に増強された腎臓形質導入を示すＡＡＶカプシド（濃灰色の棒）の相対的な腎臓形質導入効率。平均±ｓ．ｅ．ｍ。ＡＡＶベクターの全リストに関しては図２Ａ～２Ｂを参照のこと。 同上。 図２Ａ～２Ｂ． 静脈内（ＩＶ）投与または腎静脈（ＲＶ）投与後の腎臓におけるＡＡＶカプシドの相対的な形質導入効率。雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、２×１０１３ｖｇ／ｋｇ（ＩＶ）または３×１０１１ｖｇ／マウス（ＲＶ）の用量でＡＡＶ－ＣＡＧ－ＢＣライブラリーを注射した（ＩＶに関してはｎ＝３／群、ＲＶに関してはｎ＝４／群）。注射後６週間で腎臓を採取し、各ＡＡＶカプシドの相対的な形質導入効率を、ＡＡＶ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｂａｒｃｏｄｅ－Ｓｅｑによって決定した。平均±ｓ．ｅ．ｍ。ベクターゲノムＲＮＡ転写物レベルによって決定されるＡＡＶ９より有意に高い腎臓形質導入を示すＡＡＶカプシドは、図１に含まれ、アスタリスク（＊）によって註釈される。ハッシュ記号（＃）は、不調和に低いベクターＲＮＡ転写物レベルを示すと同時に、ＡＡＶ９より５倍超高いベクターゲノムＤＮＡレベルを示すＡＡＶカプシドを示す。同上。 図３Ａ～３Ｃ． ＡＡＶＫＰ１の腎臓形質導入は、腎静脈（ＲＶ）注射によって顕著に増強された。（Ａ）８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスに、ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏまたはＡＡＶＫＰ１－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏを、３×１０１１ｖｇ／マウスの用量で注射した（ｎ＝４／群）。注射後２週間で腎臓を採取した。（Ｂ）ｑＰＣＲによる腎臓中のベクターゲノムの定量。ベクターゲノムコピー数を、２本鎖ベクターゲノムコピー数／二倍体ゲノム等価物として表した。平均±ｓ．ｅ．ｍ。以下の２つの独立した変数であるＡＡＶカプシドおよび投与経路の相互作用を、２元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙの事後検定によって統計的に確認した。＊＊＊＊、調整されたｐ＜０，０００１； ｎｓ、有意でない。（Ｃ）腎臓における天然のｔｄＴｏｍａｔｏ蛍光シグナルの代表的画像。腎静脈注射を介してＡＡＶＫＰ１で形質導入した腎臓（右下のパネル）は、尾静脈注射を介してＡＡＶＫＰ１で形質導入した腎臓（右上パネル）または尾静脈もしくは腎静脈注射を介してＡＡＶ９で形質導入した腎臓（左側の２つのパネル）と比較して、遙かに大きなｔｄＴｏｍａｔｏシグナルを示した。ｔｄＴｏｍａｔｏシグナルは、ＡＡＶ９の尾静脈もしくは腎静脈注射またはＡＡＶ－ＫＰ１の尾静脈注射後の糸球体に主に制限されたが、ＡＡＶＫＰ１の腎静脈注射は、皮質の中の腎尿細管において有意に増強された形質導入をもたらした。スケールバー、１ｍｍ。 図４Ａ～４Ｂ． 腎静脈（ＲＶ）注射後のＡＡＶＫＰ１を形質導入した近位尿細管細胞（ポドサイトではない）。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスに、３×１０１１ｖｇ／マウスの用量でのＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏまたはＡＡＶＫＰ１－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏを注射した（ｎ＝４／群）。注射後２週間で腎臓を採取した。（Ａ）天然のｔｄＴｏｍａｔｏおよびＬＴＬ（近位尿細管）の代表的画像を示す。下のグラフは、近位腎尿細管におけるｔｄＴｏｍａｔｏ陽性領域の定量的評価を示す。平均±ｓ．ｅ．ｍ。ＡＡＶカプシドと投与経路との間の相互作用を、２元配置ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｔｕｋｅｙの事後検定によって確認した。＊＊＊＊、調整されたｐ＜０，０００１； ｎｓ、有意でない。（Ｂ）ポドサイトにおける形質導入なしを示す、天然のｔｄＴｏｍａｔｏおよびＷＴ１（ポドサイト核）の代表的画像。スケールバー、５０μｍ。ＬＴＬ、ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓレクチン； ＷＴ１、Ｗｉｌｍｓ ｔｕｍｏｒ １。同上。 図５Ａ～５Ｂ． ＡＡＶＫＰ１での腎臓形質導入は、虚血によって増強されなかった。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ 雄性マウスに、３×１０１１ｖｇ／マウスの用量でＡＡＶＫＰ１－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏを注射した。注射後２週間で腎臓を採取した。腎臓における天然のｔｄＴｏｍａｔｏの代表的画像を示す。（Ａ）ＡＡＶＫＰ１を、１５分間の腎虚血後に静脈内投与した。１５分間の虚血を受けた腎臓（１５分）と虚血を受けなかった対側の腎臓（０分）との間で形質導入を比較したところ、差異は示されなかった。（Ｂ）ＡＡＶＫＰ１を、種々の虚血期間（０分、５分、１０分および１５分）で、腎静脈を介して投与した。等しい程度の増強された形質導入が、これらの条件にわたって皮質において観察されたが、これは、虚血が腎臓形質導入に影響を及ぼさないことを示す。スケールバー、１ｍｍ。 図６Ａ～６Ｂ． 腎静脈（ＲＶ）注射は、皮質の間質において２５ｎｍマイクロスフェアの蓄積をもたらす。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスに、尾静脈（Ａ）または腎静脈（Ｂ）を介して蛍光性２５ｎｍマイクロスフェアを注射した。尾静脈注射に関しては、マイクロスフェアを３０分間循環させた。ＲＶ注射に関しては、循環時間はなかった。ＰＢＳ灌流後に腎臓を採取した。腎臓におけるマイクロスフェア（緑）およびＣＤ３１（マゼンタ、内皮細胞）の代表的画像を示す。（Ａ）の中の矢印は、腎間質におけるマイクロスフェア蓄積を指す。スケールバー、５０μｍ。 図７Ａ～７Ｄ． 腎静脈（ＲＶ）注射後のＡＡＶＫＰ１の制限された腎臓外の散在は、オフターゲット肝臓形質導入を防止した。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ 雄性マウスに、３×１０１１ｖｇ／マウス（Ａ、Ｂ）または１×１０１３ｖｇ／ｋｇ（Ｃ、Ｄ）の用量でＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏまたはＡＡＶＫＰ１－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏを注射した（ｎ＝４／群）。（Ａ）肝臓中のベクターゲノムを、注射後２週間でｑＰＣＲによって定量した。ベクターゲノムコピー数を、２本鎖ベクターゲノムコピー数／二倍体ゲノム等価物として表した。ＡＡＶカプシドと投与経路との間の相互作用を、２元配置ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｔｕｋｅｙの事後検定によって確認した。（Ｂ）肝臓の中の天然のｔｄＴｏｍａｔｏおよびＤＡＰＩの代表的画像。腎静脈を介してＡＡＶＫＰ１を注射したマウスの肝臓（右下のパネル）におけるｔｄＴｏｍａｔｏシグナルは、尾静脈を介してＡＡＶＫＰ１を注射したマウス（右上のパネル）または尾静脈もしくは腎静脈注射のいずれかを介してＡＡＶ９を注射したマウス（左側の２つのパネル）において観察された強い肝臓シグナルと比較して、有意に低減された。スケールバー、１００μｍ。（Ｃ）腎臓におけるベクターゲノムを、ＲＶ注射の１０分後にｑＰＣＲによって定量した。統計的評価のために対応のないｔ検定を使用した。（Ｄ）ＲＶ注射後の血中ベクター濃度－時間曲線。その曲線下面積を計算し、統計的有意性を、対応のないｔ検定によって決定した。＊＊＊＊、調整されたｐ＜０，０００１； ＊＊＊、調整されたｐ＜０，００１； ｎｓ、有意でない。平均±ｓ．ｅ．ｍ。同上。 図８Ａ～８Ｅ． 腎動脈（ＲＡ）注射後の非ヒト霊長類におけるＡＡＶＫＰ１を形質導入した近位腎尿細管。１４ヶ月齢の雄性アカゲザルに、８．２×１０１２ｖｇ／動物の用量で、腎動脈を介してＡＡＶＫＰ１－ＣＡＧ－ｔｄＴｏｍａｔｏを注射した。腎臓および肝臓における形質導入効率を、注射後３週間で評価した。（Ａ）経カテーテル腎動脈注射の蛍光顕微鏡画像。注射経路を可視化するために造影剤を注射した。（Ｂ）腎臓における天然のｔｄＴｏｍａｔｏの代表的画像。強くかつ広範囲の形質導入が、皮質において観察された。スケールバー、１ｍｍ。（Ｃ）天然のｔｄＴｏｍａｔｏおよびＬＴＬ（近位腎尿細管）の代表的画像。（Ｄ）天然のｔｄＴｏｍａｔｏおよびＷＴ１（ポドサイト）の代表的画像。ポドサイトの形質導入は観察されなかった。（Ｅ）肝臓における天然のｔｄＴｏｍａｔｏの代表的画像。Ｃ～Ｅのスケールバー、１００μｍ。ＬＴＬ、ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓレクチン； ＷＴ１、Ｗｉｌｍｓ ｔｕｍｏｒ １。 配列 添付の配列表中に列挙された核酸およびアミノ酸配列は、３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ． １．８２２において規定されるように、ヌクレオチド塩基については標準的文字略語およびアミノ酸については一文字コードを使用して示される。各核酸配列の一方の鎖のみが示されるが、その相補鎖は、示される鎖への任意の参照によって含まれると理解される。 配列番号１～６はＡＡＶカプシドタンパク