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JP-2026514976-A - １５－リポキシゲナーゼを含む細胞外ベシクル

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Abstract

本発明は、薬学的有効量の細胞外ベシクル（ＥＶ）を投与することを含む炎症性の状態又は疾患を処置する方法を提供し、上記ＥＶは、１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）及び５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１２－ＬＯＸ及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む。炎症性疾患又は状態を処置することへの使用のための細胞外ベシクル（ＥＶ）もまた提供され、上記ＥＶは、１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸の１つ以上を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）及び５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１５－ＬＯＸ、１２－ＬＯＸ、及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む。１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）、５リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１５－ＬＯＸ、１２－ＬＯＸ、及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む単離された細胞外ベシクルも同様である。 【選択図】なし

Inventors

  • デヴィット，アンドリュー
  • ミリック，イヴァナ

Assignees

  • アストン ユニヴァーシティー

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240424
Priority Date
20230425

Claims (20)

  1. 薬学的有効量の細胞外ベシクル（ＥＶ）を投与することを含む炎症性の状態又は疾患を処置する方法であって、前記ＥＶは、１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）及び５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１２－ＬＯＸ及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む、方法。
  2. 炎症性疾患又は状態を処置するための使用のための細胞外ベシクル（ＥＶ）であって、前記ＥＶは、１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）及び５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１２－ＬＯＸ及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む、ＥＶ。
  3. 前記炎症性疾患が慢性炎症性疾患である、請求項１又は２に記載の方法又はＥＶ。
  4. 前記炎症性疾患が慢性創傷、皮膚炎症性疾患、自己免疫疾患、腎炎、老化、肺疾患、肝疾患、及び認知症から選択される、請求項１～３のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  5. 前記炎症性疾患が内部又は外部の創傷、糖尿病性創傷、及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）から選択される、請求項４に記載の方法又はＥＶ。
  6. 前記ＥＶが、５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）も５－ＬＯＸをコードする核酸も含まない、請求項１～５のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  7. 前記ＥＶが、単離された天然に存在するＥＶ又は天然に存在しないＥＶである、請求項１～６のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  8. 前記ＥＶが、アポトーシス細胞由来細胞外ベシクル（ＡＣｄＥＶ）又は生細胞由来ＥＶ、最も典型的には間葉系幹細胞由来ＥＶである、請求項７に記載の方法又はＥＶ。
  9. 加えて、ＭΦマクロファージ、典型的には炎症惹起性のマクロファージを標的化することができる１つ以上のマーカーを含む、請求項１～８のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  10. 前記ＥＶが、好ましくはアネキシンＡ１、カルレクティキュリン、及びホスファチジルセリンから選択される、１つ以上のｅａｔ ｍｅマーカーを含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  11. 前記ＥＶが、好ましくはＩｇＳＦメンバー（最も典型的にはＩＣＡＭ－３）、ＣＤ４４、インテグリンアルファ－１、及びインテグリンベータ－２から選択される、１つ以上の接着分子を含む、請求項１～１０のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  12. 前記ＥＶが、１つ以上のロイコトリエン、最も典型的にはアラキドン酸５－リポキシゲナーゼ活性化蛋白質（ＡＬ５ＡＰ）もロイコトリエンＡ－４ヒドロラーゼ（ＬＫＨＡ４）も含まない、請求項１～１１のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  13. 前記ＥＶが、少なくとも１ｎｍ、又は１０～１０００ｎｍ、より典型的には７０～７００ｎｍのサイズ範囲を有する、請求項１～１２のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  14. 前記ＥＶが、１００～２００ｎｍ、より典型的には９０～１３０ｎｍのモードサイズを有する、請求項１～１３のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  15. 前記ＥＶが、対象へ投与されるか、又は対象へ静脈内、腹腔内、外用、鼻腔内、経口吸入、好ましくはネブライザ若しくは吸入器投与されることができる、請求項１～１４のいずれかに記載の方法又はＥＶ。
  16. 単離された細胞外ベシクル（ＥＶ）であって、前記ＥＶが、１５－リポキシゲナーゼ（１５－ＬＯＸ）及び／又は１５－ＬＯＸをコードする核酸を含み、任意選択的に、加えて、１２－リポキシゲナーゼ（１２－ＬＯＸ）、５リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）の１つ以上、並びに／又は１５－ＬＯＸ、１２－ＬＯＸ、及び５－ＬＯＸの１つ以上をコードする１つ以上の核酸を含む、ＥＶ。
  17. 前記ＥＶが、５－リポキシゲナーゼ（５－ＬＯＸ）も５－ＬＯＸをコードする核酸も含まない、請求項１６に記載のＥＶ。
  18. 前記ＥＶが、単離された天然に存在するＥＶ又は天然に存在しないＥＶである、請求項１６又は１７に記載のＥＶ。
  19. 前記ＥＶがアポトーシス細胞由来細胞外ベシクル（ＡＣｄＥＶ）又は間葉系幹細胞ＥＶである、請求項１８に記載のＥＶ。
  20. 薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項１６～１９に記載のＥＶ。

Description

本発明は、リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）、具体的には１５－ＬＯＸ、並びに任意選択的に１２－ＬＯＸ及び／又は５－ＬＯＸを含むか、或いはかかるＬＯＸをコードする核酸配列を含む細胞外ベシクル（ＥＶ）と、炎症性の状態を処置するためのそれらの使用とに関する。ＥＶは人工であり得るか、或いは例えば天然に存在する細胞、例えば生細胞、又はアポトーシス細胞、又は間葉系幹細胞に由来し得る。 本明細書において使用される略語：ＡＣｄＥＶ－アポトーシス細胞由来細胞外ベシクル、ＣＯＸ－シクロオキシゲナーゼ、ＥＶ－細胞外ベシクル、ＬＭ－炎症の脂質メディエータ、ＬＯＸ－リポキシゲナーゼ、ＭΦ－マクロファージ、ＬＴ－ロイコトリエン、ＬＸ－リポキシン、ＰＤ－プロテクチン、ＰＧ－プロスタグランジン、ＰＳ－ホスファチジルセリン、ＰＵＦＡ－多価不飽和脂肪酸、ＳＰＭ－特殊化した収束促進性脂質メディエータ、ＲＶ－レゾルビン、ＶＤ３－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３。 アポトーシスとしてもまた公知のプログラム細胞死は、感染した、損傷した、又は単に不要の細胞が除去される生理プロセスである。長い間、それは、主にその独特な形態学的特徴ゆえに描写される「不活性な」プロセスと見なされていた１。今日では、アポトーシスは免疫応答の恒常性制御において中心的役割を果たすということが広く認識されている２。従って、アポトーシスを適切に実行し損なうことは、慢性炎症、自己免疫３、及び腫瘍発生４などの有意な結果のリスクとなる。 炎症は、細胞及び分子レベルの両方において複雑な且つ慎重に調整されたプロセスであり、それは、効率的にコントロールされない場合には慢性になり炎症性疾患に至る急性の負荷に対する防御免疫応答である。負傷した組織内における外因的又は内因的なケミカルメディエータの放出は、局所的な血管系の変化を通して炎症性応答を促進して、プロフェッショナル食細胞（すなわち好中球及びマクロファージ）の動員を可能にする。しかしながら、ひとたびそれらが免疫負荷に遭遇し排除すると、組織は炎症の収束期を通してその炎症前の状態に戻らなければならない。炎症が収束するためには、継続的な炎症性細胞動員は止められ、動員された好中球はアポトーシスを経過し、常在性のマクロファージ及び動員されたマクロファージによって貪食され、これらはリンパ系から組織を脱出する。従って、アポトーシスは、マクロファージと相互作用すること及び炎症の収束ステージを促進することによって組織の恒常性を再確立することにおいて中心的役割を有するが、完全な分子機序はまだ明らかにされていない５。 炎症組織への好中球及びマクロファージの移動を調整する分子シグナルは、炎症の脂質メディエータ（ＬＭ）として公知の生物活性な代謝物質を含む。それらはリン脂質異化の産物であり、動員された細胞によって局所的に放出されるが、それらのいくつかは微生物起源であり得る。収束プロセス全体は、細胞受容体及び酵素の協調的な作用の結果として分泌される、炎症の炎症惹起性脂質メディエータ及び収束促進性脂質メディエータの総体的なバランスによって駆動される６。炎症の急性期の間には、食細胞動員がロイコトリエン（ＬＴ）７及びプロスタグランジン（ＰＧ）８の局所的放出によって支持される。それらのレベルの増大は、炎症を駆動することを促進する。従って、両方の代謝物質クラスはそれらの炎症惹起性の特性で知られている。しかしながら、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路から産生されるＰＧＤ２及びＰＧＥ２は、リポキシン（ＬＸ）、レゾルビン（ＲＶ）、及びプロテクチン（ＰＤ）などの小さいが非常に強力な特殊化した収束促進性脂質メディエータ（ＳＰＭ）の合成を担う酵素リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）の転写を誘導する能力を有する収束促進性分子「スイッチ」として作用し得る９。例えば、好中球及びマクロファージにおけるかかる「クラススイッチ」は、ＬＴＢ４産生のためのアラキドン酸（ＡＡ）の使用（５－ＬＯＸを介する）から、１５－ＬＯＸを介するＬＸＡ４の合成への切り替えを伴う１５－ＬＯＸの上方制御を要求するであろう。これは、さらなる好中球取り込みを積極的に促進し、非炎症性の単球動員を刺激し、アポトーシス好中球のマクロファージ取り込みを支持し、リンパ系からのそれらの脱出を促進するであろう。従って、好中球アポトーシス及び自然免疫系とのそのコミュニケーションは、首尾良い結末－収束へと炎症を導くための下地を作るかなめのイベントに相当する１０。 瀕死の細胞と免疫系との間の複雑な細胞間コミュニケーションの性質はまだはっきりしていない。脂質メディエータ以外に、瀕死の細胞は、いわゆる可溶性「ｆｉｎｄ－ｍｅ」シグナル（ＡＴＰ及びＵＴＰ、フラクタルカイン、リソホスファチジルコリン、スフィンゴシン１－リン酸）を放出することによって食細胞動員を駆動し、それらの表面上に「ｅａｔ－ｍｅ」タグを呈して食細胞取り込みを促進する１１。近年、細胞外ベシクルが細胞のコミュニケーションの新規メディエータとして浮上した１２。ホスト「レシピエント」細胞とのそれらの相互作用の性質を考えると、細胞外ベシクルは免疫細胞上の表面受容体のトリガーとなり得るのみならず、それらの無数の構成要素、並びに蛋白質、脂質、低分子、及び遺伝物質というカーゴをもまた送達し、それによって免疫応答を誘導し得る１３。生細胞からの細胞外ベシクルはより詳細に研究されているが、アポトーシス細胞由来細胞外ベシクル（ＡＣｄＥＶ）及びそれらの免疫調節特性は比較的少ない注目しか集めていない１４。今までに、異なる研究グループがＡＣｄＥＶの化学誘引特性を示している１５，１６，１７。ＡＣｄＥＶの表面上のフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）１６，１８及びＩＣＡＭ－３１７は、マクロファージ遊走及び免疫細胞とのＡＣｄＥＶ結合を担う「ｆｉｎｄ－ｍｅ」シグナルとして同定されており、ＡＣｄＥＶ表面上のグリコシル化されたリガンドは「ｅａｔ－ｍｅ」シグナルとして作用した１９。様々な他のＡＣｄＥＶ関連分子が免疫調節特性を有し得るという可能性は高い。 アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。アポトーシスＴ細胞上清からサイズ排除クロマトグラフィーによって単離されたＥＶのサイズ及び濃度のＴＲＰＳ測定。インセット：ＴＳＧ－１０１のウエスタンブロットは、単離されたＥＶの一部がエクソソーム起源であるということを示している。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。チオール反応性色素Ｂｏｄｉｐｙによって染色された集められたＥＶの代表的なフローサイトメトリーヒストグラムは、測定された粒子のおよそ８９％が染色陽性であり、ベシクル起源であったということを示している。染色されないＡｃｄＥＶが負の対照として使用された。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。アネキシンＶ（ＡｎｘＶ）によって染色されたＥＶの代表的なフローサイトメトリーヒストグラムは、ＥＶの６９％が暴露されたＰＳを有するということを示している。ＡｎｘＶによるＰＳ認識を消失させるためのＣａ２＋のＥＤＴＡ枯渇が負の対照として使用された。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。ＡｃｄＥＶ、全Ｖｅｓｉｃｌｅｐｅｄｉａ、及び全てのＴ細胞由来ＥＶの間のプロテオームオーバーラップをビジュアル化するベン図。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。アポトーシスＴ細胞と比較してＡＣｄＥＶ（右側）における蛋白質の有意な濃縮を示す火山プロット。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。Ｔ細胞と比較してＡＣｄＥＶにおいて２倍超高いことが見出された生物学的プロセス（緑色）、細胞構成要素（紫色）、及び蛋白質の分子機能（橙色）の遺伝子オントロジー濃縮（単純化されたグラフ）。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシスの間のＴ細胞に由来するＥＶのキャラクタリゼーション。初代ヒトＴ細胞が、シクロヘキシミドの存在下において抗Ｆａｓによってアポトーシスへ誘導された。ＡｃｄＥＶが単離され、サイズ、濃度、ＰＳ暴露、及び蛋白質組成について分析された。この研究においてＡＣｄＥＶに濃縮された主要な蛋白質クラスを有するＡＣｄＥＶの模式図。示されているデータは同様の実験の代表である。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。二重作用性ＳＰＭ（緑色）及び炎症惹起性ＬＭ（赤色）は、ＬＯＸ及びＣＯＸ経路によってアラキドン（ＡＡ）、エイコサペンタエン（ＥＰＡ）、及びドコサヘキサエン（ＤＨＡ）酸から内因的に産生される。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。ターゲットＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＭＲＭ）分析は、ＥＶが以下をロードされているということを明らかにしている：ＰＵＦＡ（ＡＡ、ＥＰＡ、及びＤＨＡ）、ｎ＝４。全ての結果は平均±ＳＥＭとして表されている。統計：ｔ検定、両側、対なし。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。ターゲットＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＭＲＭ）分析は、ＥＶが以下をロードされているということを明らかにしている：主要なＬＯＸ代謝物質としての、ＬＯＸによって酸化されたＰＵＦＡ、ｎ＝５。全ての結果は平均±ＳＥＭとして表されている。統計：ｔ検定、両側、対なし。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。ターゲットＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＭＲＭ）分析は、ＥＶが以下をロードされているということを明らかにしている：炎症惹起性の代謝物質としての、ＬＯＸによって酸化されたＰＵＦＡ、ｎ＝５。全ての結果は平均±ＳＥＭとして表されている。統計：ｔ検定、両側、対なし。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。ターゲットＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＭＲＭ）分析は、ＥＶが以下をロードされているということを明らかにしている：炎症の小さい収束促進性脂質メディエータ、ＳＩとしての、ＬＯＸによって酸化されたＰＵＦＡ、ｎ＝５。全ての結果は平均±ＳＥＭとして表されている。統計：ｔ検定、両側、対なし。アポトーシス初代ヒトＴ細胞に由来するＥＶの脂質メタボロームプロファイリング。ＡＣｄＥＶは、炎症惹起性の代謝物質と比較して高いレベルのＡＡ由来及び全ＳＰＭの両方を運搬する。全ての結果は平均±ＳＥＭとし