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JP-2026514992-A - ＨＬＡ－Ａ２＊０２に結合したプレプロインスリンペプチドＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡに特異的な高い親和性および特異性を有するＴＣＲ

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Abstract

本発明は、ペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体として提示されるＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ（配列番号１）ペプチド（ヒトプレプロインスリン（ＰＰＩ）タンパク質由来）に結合する、ペプチド－主要組織適合複合体（ｐＭＨＣ）結合ドメインを含む結合分子に関する。前記結合分子は、フレームワーク配列内に埋め込まれたＣＤＲ配列を含むことができる。ＣＤＲおよびフレームワーク配列は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）可変ドメインに対応していてもよく、天然のＴＣＲ可変ドメインと比較して非自然変異をさらに含むことができる。本発明の結合分子は、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ（配列番号１）－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に対して高い親和性および高い特異性を有する。結合分子はさらに、免疫抑制因子および／または半減期延長ドメインを含むことができる。かかる結合分子は、糖尿病などの自己免疫疾患の治療のための可溶性の免疫治療試薬の開発において特に有用である。

Inventors

  • マホン，タラ
  • オーバートン，デイビッド
  • フィゲイレード，リタ
  • タワル，ラジーヴクマール
  • ワイズマン，ケイティ

Assignees

  • イミュノコア・リミテッド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240426
Priority Date
20230428

Claims (20)

  1. ＡＬＷＧＰＤＡＡＡ（配列番号１）ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に結合する性質を有するペプチド－主要組織適合複合体（ｐＭＨＣ）結合ドメインを含む結合分子であって、ｐＭＨＣ結合ドメインが、（ｉ）少なくともＴＣＲアルファ鎖可変ドメインを含むアルファ鎖、および（ｉｉ）少なくともＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含むベータ鎖を含み、ここで、 （ａ）ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインが、以下の配列： ＣＤＲ１ － ＤＫＨＳＱＧ（配列番号２３）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＣＤＲ２ － ＩＹＳＱＧＤ（配列番号２７）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＣＤＲ３ － ＡＶＲＧＮＥＫＬＴ（配列番号７）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列 を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、かつ／または （ｂ）ＴＣＲベータ鎖可変ドメインが、以下の配列： ＣＤＲ１ － ＬＱＨＳＹ（配列番号３５）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＣＤＲ２ － ＳＶＧＶＧＦ（配列番号２９）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＣＤＲ３ － ＡＳＡＹＭＴＧＥＬＦ（配列番号３０）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列 を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、結合分子。
  2. ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインＣＤＲにおける変異（複数可）が、配列番号２６に従いナンバリングされたＫ２８Ｒ（ＣＤＲ１）、Ｈ２９Ｇ（ＣＤＲ１）、Ｇ３２Ｓ（ＣＤＲ１）、およびＱ５３Ｎ（ＣＤＲ２）から選択され、かつ／またはベータ鎖ＣＤＲにおける変異（複数可）が、配列番号７４に従いナンバリングされたＬ２７Ｍ（ＣＤＲ１）、Ｑ２８Ｎ（ＣＤＲ１）、Ｓ３０Ｎ（ＣＤＲ１）、Ｖ５２Ａ（ＣＤＲ２）、Ｆ５４Ｉ（ＣＤＲ２）およびＡ１０４Ｓ（ＣＤＲ３）から選択される、請求項１に記載の結合分子。
  3. 以下のＴＣＲアルファ鎖可変ドメインＣＤＲおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインＣＤＲの組合せ： （ａ）それぞれＤＲＧＳＱＳ（配列番号５）、ＩＹＳＮＧＤ（配列番号６）およびＡＶＲＧＮＥＫＬＴ（配列番号７）であるアルファ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにそれぞれＭＮＨＮＹ（配列番号１５）、ＳＶＧＡＧＩ（配列番号１６）およびＡＳＳＹＭＴＧＥＬＦ（配列番号１７）であるベータ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列； （ｂ）それぞれＤＫＨＳＱＧ（配列番号２３）、ＩＹＳＮＧＤ（配列番号６）、およびＡＶＲＧＮＥＫＬＴ（配列番号７）であるアルファ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにそれぞれＭＮＨＳＹ（配列番号２８）、ＳＶＧＶＧＦ（配列番号２９）、およびＡＳＡＹＭＴＧＥＬＦ（配列番号３０）であるベータ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列； （ｃ）それぞれＤＫＨＳＱＧ（配列番号２３）、ＩＹＳＮＧＤ（配列番号６）、およびＡＶＲＧＮＥＫＬＴ（配列番号７）であるアルファ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにそれぞれＭＱＨＳＹ（配列番号３２）、ＳＶＧＶＧＦ（配列番号２９）、およびＡＳＡＹＭＴＧＥＬＦ（配列番号３０）であるベータ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、または （ｄ）それぞれＤＫＨＳＱＧ（配列番号２３）、ＩＹＳＱＧＤ（配列番号２７）、およびＡＶＲＧＮＥＫＬＴ（配列番号７）のアルファ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにそれぞれＬＱＨＳＹ（配列番号３５）、ＳＶＧＶＧＦ（配列番号２９）、およびＡＳＡＹＭＴＧＥＬＦ（配列番号３０）のベータ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列 の１つを含む、請求項１または請求項２に記載の結合分子。
  4. ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインが、以下の配列： ＦＲ１ － ＡＫＥＶＥＱＮＳＧＰＬＳＶＰＥＧＡＩＡＳＬＱＣＴＹＳ（配列番号２５）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ２ － ＦＦＷＹＲＱＹＳＧＫＳＰＥＬＩＭＳ（配列番号９）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ３ － ＫＥＤＧＲＦＴＡＱＬＮＫＡＳＱＹＶＳＬＬＩＲＤＳＱＰＳＤＳＡＴＹＬＣ（配列番号１０）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ４ － ＦＧＴＧＴＲＬＴＩＩＰ（配列番号１１）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列 を含むフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含み、 かつ／または、ＴＣＲベータ鎖可変ドメインが、以下の配列： ＦＲ１ － ＮＡＧＶＴＱＴＰＫＦＲＩＬＫＩＧＱＳＭＴＬＱＣＡＱＤ（配列番号１８）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ２ － ＭＹＷＹＲＱＤＰＧＭＧＬＫＰＩＹＹ（配列番号１９）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ３ － ＴＤＫＧＥＶＰＱＧＹＱＶＳＲＳＴＴＥＤＦＰＬＲＬＥＳＡＡＰＳＱＴＳＶＹＦＣ（配列番号７５）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列、 ＦＲ４ － ＦＧＥＧＳＲＬＴＶＬ（配列番号２１）であって、任意で１つ、２つ、または３つの変異を有する配列 を含むフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  5. ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインフレームワーク領域における変異（複数可）が、配列番号２６に従いナンバリングされたＡ１ＱおよびＱ２２Ｎから選択され、かつ／またはＴＣＲベータ鎖可変ドメインフレームワーク領域における変異（複数可）が、配列番号７４に従いナンバリングされたＱ６２Ｎ、Ｑ６２Ｅ、Ｑ６２Ｄ、およびＱ６５Ｎから選択される、請求項４に記載の結合分子。
  6. （ａ）ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインが、配列番号３、２２、２４および２６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列、または配列番号３、２２、２４および２６のいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ （ｂ）ＴＣＲベータ鎖可変ドメインが、配列番号１３、６８、３１、３４、７４、７６および７８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列、または配列番号１３、６８、３１、３４、７４、７６および７８のいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、 前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  7. 以下のＴＣＲアルファ鎖およびベータ鎖可変ドメインの組合せ： （ａ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号６８に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン； （ｂ）配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン； （ｃ）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン； （ｄ）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン； （ｅ）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン；または （ｆ）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲアルファ鎖可変ドメイン、および配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むＴＣＲベータ鎖可変ドメイン の１つを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  8. ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインが配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲベータ鎖可変ドメインが配列番号７４のアミノ酸配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  9. アルファ鎖はＴＣＲアルファ鎖定常ドメインを含み、かつ／またはベータ鎖がＴＣＲベータ鎖定常ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  10. 非天然のジスルフィド結合がＴＣＲアルファ鎖定常ドメインの残基をＴＣＲベータ鎖定常ドメインの残基に連結する、請求項９に記載の結合分子。
  11. ＴＣＲアルファ鎖定常ドメインが、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列、または配列番号３７と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ／または ＴＣＲベータ鎖定常ドメインが、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列、または配列番号３９と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、 請求項９または請求項１０に記載の結合分子。
  12. ２つ以上のポリペプチド鎖を含み、アルファ鎖およびベータ鎖が別々のポリペプチド鎖に含まれる、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  13. （ａ）アルファ鎖が、配列番号２、７０、３６、および４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列、または配列番号２、７０、３６、および４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ （ｂ）ベータ鎖が、配列番号１２、６９、３８、４１、８０、８１および８２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列、または配列番号１２、６９、３８、４１、８０、８１および８２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、 前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  14. （ａ）アルファ鎖が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号６９のアミノ酸配列を含む； （ｂ）アルファ鎖が配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号３８のアミノ酸配列を含む； （ｃ）アルファ鎖が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号４１のアミノ酸配列を含む； （ｄ）アルファ鎖が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号８０のアミノ酸配列を含む； （ｅ）アルファ鎖が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号８１のアミノ酸配列を含む；または （ｆ）アルファ鎖が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ベータ鎖が配列番号８２のアミノ酸配列を含む、 前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  15. ｐＭＨＣ結合ドメインがＶα－Ｌ－Ｖβ、Ｖβ－Ｌ－Ｖα、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖβ、またはＶα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβの種類の単一ポリペプチド鎖形式であり、ここで、ＶαおよびＶβがそれぞれＴＣＲαおよびβ可変領域であり、ＣαおよびＣβがそれぞれＴＣＲαおよびβ定常領域であり、Ｌがリンカー配列である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の結合分子。
  16. 免疫抑制因子をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  17. 免疫抑制因子が免疫チェックポイントアゴニストであり、任意でＰＤ－１アゴニストである、請求項１６に記載の結合分子。
  18. 免疫抑制因子が抗原に結合可能な抗原結合部分を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の結合分子。
  19. 抗原がＰＤ－１であり、抗原結合部分がＰＤ－１アゴニストである、請求項１８に記載の結合分子。
  20. 抗原結合部分が抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１８または請求項１９に記載の結合分子。

Description

本発明は、ＴＣＲ可変ドメインを含むペプチド－主要組織適合複合体（ｐＭＨＣ）結合ドメインを含む結合分子に関する。結合分子はさらに、免疫抑制因子および／または半減期延長ドメインを含むことができる。本発明はまた、糖尿病などの自己免疫疾患の治療または診断における結合分子の使用に関する。 自己免疫疾患はしばしば慢性的で衰弱をもたらし、臨床的ニーズのある領域を構成する。全身性免疫抑制に関連する潜在的な重大な有害事象を考慮すると、全身性免疫抑制よりもむしろ臓器特異的免疫抑制が治療にとって有益な経路となり得る。 自己免疫において、ＰＤ－１経路の障害が疾患発症に重要な役割を果たすという証拠も蓄積している。ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２遺伝子の多型はいくつかの自己免疫疾患と関連している。１型糖尿病およびクローン病患者のサンプルでは、ＰＤ－Ｌ１発現が異常に低いことが観察されている。したがって、自己反応性リンパ球上のＰＤ－１を活性化することは、自己免疫疾患を治療する機構として作用し得る。しかし、臨床試験の段階に達したＰＤ－１アゴニストは少なく、患者における有効性はまだ実証されていない。 １型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）は、代謝機能障害、特に糖代謝の調節異常を特徴とし、特徴的な長期の血管合併症および神経学的合併症を伴う自己免疫疾患である。Ｔ１ＤＭは絶対的インスリン欠乏を特徴とし、患者は生存のために外因性インスリンに依存する。高血糖症状を伴うＴ１ＤＭの急性臨床発症前には、長い無症状の前臨床期があり、この間にインスリン産生ベータ細胞が徐々に破壊される。ベータ細胞（β細胞）の自己免疫性破壊はリンパ球浸潤と関連している。 ＣＤ８＋Ｔ細胞がＴ１ＤＭに至る病態に関与していることは、多くの証拠によって裏付けられている。罹患した個人の膵島組織を組織学的に分析すると、ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤が認められる。Ｔ１ＤＭの動物モデルでは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いて疾患プロセスを罹患動物から健康な動物へ移すことが可能である。 抗ＣＤ３遮断抗体に基づく全身作用性免疫療法は、最近、Ｔ１ＤＭステージ２疾患の治療についてＦＤＡの承認を受けている。しかし、この薬剤は非標的性であるため安全性の懸念が高く、治療初期段階におけるリンパ球減少症が主な副作用である。発症後早期段階における１型糖尿病の抗原特異的（または組織特異的）免疫療法は、全身性の免疫不活性化を回避しながら、疾患進行を阻止し、残存膵島細胞機能を維持する可能性を有する。安全な免疫療法は、膵島同種移植片の保護および１型糖尿病への強い遺伝的素因が認められる場合の予防としても考慮できる。膵島ベータ細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現する制御性ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって病原性Ｔ細胞から自然に保護されており、養子移入されたＴ細胞を介する保護には膵島細胞抗原の認識が必要であることが確立されている。 いくつかの糖尿病特異的なヒト自己反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞が、患者から単離されている（Skowera et al. 2008 J Clin Invest. 118:3390-402およびLieberman et al. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 2003 Jul 8;100(14):8384-8）。これらのＴ細胞は、主にプレプロインスリン（ＰＰＩ）などのβ細胞抗原のペプチドエピトープを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ１５－２４（配列番号１）ペプチドは、ヒトＰＰＩのシグナル配列に由来するそのようなペプチドの１つである（Skowera et al. 2008 J Clin Invest. 118:3390-402および国際公開第２００９００４３１５号）。このペプチドはＨＬＡ－Ａ＊０２分子にロードされ、インスリン産生β細胞の表面に提示される。したがって、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体は、ＴＣＲによって認識可能なヒトベータ細胞特異的マーカーを提供する。このＰＰＩペプチドの高発現は、疾患段階に関係なくベータ細胞表面で検出可能であり、このことは、ＰＰＩを標的とした治療薬が既存の免疫療法と比較して、より早期の疾患段階で有効であり得ることを意味する。 国際公開第２０１５０９２３６２号は、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に結合するＴＣＲおよび融合分子を開示している。国際公開第２０１９２１９７０９号は、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に結合するＴＣＲ、ならびにＰＤ１アゴニスト（天然リガンドＰＤＬ１または抗ＰＤ１ｓｃＦｖ）と融合したかかるＴＣＲを開示している。Curnock et al, 2021, JCI Insight. 2021;6(20):e15246は、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に特異的な可溶性ＴＣＲ、およびＰＤ１アゴニストを含むエフェクター末端で構成される二重特異性分子を開示している。 ヒトドナーから単離したＴＣＲは安全性の観点から一般的に好ましいとされるが、自己反応性ＴＣＲについては必ずしもそうとは限らず、これは、自己抗原を認識するＴＣＲは胸腺選択過程で本来除去されている可能性が高いためである。さらに、患者由来の自己反応性ＴＣＲは、がん抗原または病原体抗原に特異的なＴＣＲに比べて一般的に親和性が低く（Dolton G. et al., Frontiers Imm. 2018）、これはＨＬＡへ正しくドッキングができないことに起因する可能性がある。 自己免疫疾患、例えばＴ１ＤＭの診断および治療に最適化された、強力、特異的かつ効果的な組織標的化免疫抑制組成物であって、全身性免疫抑制に伴うリスクを回避する免疫抑制組成物を提供する必要性が依然として存在する。自己免疫疾患の治療に有効な治療薬には、有利なリスクプロファイル（例えば、高レベルの標的および組織特異性）を有し、投与頻度を減らすことができるものが含まれる。 特に他の望ましい特性とのバランスが取れている場合に高親和性を有するように操作されたＴＣＲの作製は容易ではなく、通常高い脱落率を伴う。第１に、当業者は適切な開始配列、または足場配列を特定する必要がある。典型的には、そのような配列は天然源、例えばドナー血液から抽出した抗原応答性Ｔ細胞、または自然レパートリーから得られたアルファ鎖およびベータ鎖を含むＴＣＲライブラリから得られる。ＰＰＩなどの自己抗原に特異的なＴ細胞は自然レパートリーにおいて稀であるため、反応性Ｔ細胞を発見するには多くのドナー、例えば２０以上をスクリーニングする必要があることがしばしばである。このスクリーニングプロセスは数週間から数カ月を要する場合があり、反応性Ｔ細胞が見つかったとしても、免疫療法への使用には適さない場合がある。例えば、反応が弱すぎる、および／または標的抗原に特異的ではない場合がある。あるいは、クローン性Ｔ細胞集団を生成できない、あるいは特定のＴ細胞株を増殖または維持して正しいＴＣＲ鎖配列を同定するのに十分な材料を産生することもできない場合もある。同様に、天然ライブラリから抗原特異的ＴＣＲを同定することができない場合もある。開始配列または足場配列として適したＴＣＲ配列は、以下の特性：標的ペプチド－ＨＬＡ複合体に対する良好な親和性、例えば２００μＭ以上；高レベルの標的特異性、例えば代替ペプチド－ＨＬＡ複合体への結合が比較的弱いか、または全くない（これは自己免疫疾患の治療において特に重要である）；ファージディスプレイなどのディスプレイライブラリでの使用に適していること；関連する発現系から高収率で再折り畳みおよび／または精製が可能であること；および融合タンパク質を含む精製形態で安定性を維持することのいずれか１つまたは複数を有すべきである。ＴＣＲ認識の縮退性を考慮すると、特定の足場ＴＣＲ配列が治療用途に向けた操作に適した特異性プロファイルを有するかどうかを判断することは、熟練した研究者であっても極めて困難である（Wooldridge, et al., J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2):1168-77）。 次の課題は、特異性および収率などの望ましい特性を維持しつつ、標的抗原に対してより高い親和性を有するようにＴＣＲを操作することであり、これは天然に存在するＴＣＲは、抗体に比べて標的抗原への親和性が弱い（低マイクロモル濃度範囲）ためである。この弱い親和性は、免疫療法用の治療用ＴＣＲが通常、標的抗原への親和性を高めさせ、それにより強力な応答を生じさせるための操作が必要であることを意味する。かかる親和性向上は、可溶性ＴＣＲベースの試薬にとって不可欠である。かかる場合、数時間の結合半減期の、ナノモル濃度からピコモル濃度範囲の抗原結合親和性が望ましい。低エピトープ数における高親和性抗原認識によって生成される効果の向上は、Liddy et al.（Liddy, et al., Nat Med. 2012 Jun;18(6):980-7）の図１ｅおよび１ｆに示されている。親和性成熟プロセスでは、通常、当業者が、抗原認識の強度を高めるために、開始ＴＣＲ配列に対して、置換、挿入および／または欠失を含むがこれらに限定されない特定の変異を操作する必要がある。親和性成熟技術は当技術分野で公知であり、例えばディスプレイライブラリの使用が挙げられる（Li et al., Nat Biotechnol. 2005 Mar;23(3):349-54; Holler et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 May 9;97(10):5387-92）。しかしながら、特定の標的に対する特定のＴＣＲの親和性を著しく高めるためには、当業者は多数の代替物候補の中から変異を操作せざるを得ない場合がある。親和性を著しく高める特定の変異は予測不可能であり、高い脱落率が生じる。多くの場合、特定のＴＣＲ開始配列では親和性の著しい向上を達成できない可能性がある。 親和性成熟プロセスでは、ＴＣＲの抗原特異性を維持する必要性も考慮しなければならない。標的抗原に対するＴＣＲの親和性を高めることは、ＴＣＲの抗原認識に固有の縮退性の結果として、他の意図しない標的との交差反応性が明らかになる実質的なリスクがもたらされる（Wooldridge, et al., J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2):1168-77; Wilson, et al., Mol Immunol 2004,40(14-15):1047-55; Zhao et al., J Immunol 2007,179(9):5845-54）。自然なレベルの親和性では、交差反応性抗原の認識は反応を生じるには低すぎる場合がある。交差反応性抗原が正常な健康細胞に提示されている場合、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でオフターゲット結合が起こる可能性が高く、これによって臨床的毒性を示す可能性がある。したがって、抗原結合強度を高めることに加え、当業者はＴＣＲが標的抗原に対する高い特異性を保持し、前臨床試験で良好な安全性プロファイルを示すことが可能である変異および／または変異の組合せを操作しなければならない。繰り返しになるが、適切な変異および／または変異の組合せは予測不可能である。この段階での脱落率はさらに高く、多くの場合、特定のＴＣＲ開始配列からは全く達成できないこともあり得る。 結合分子 第１の態様において、本発明は、ＡＬＷＧＰＤＡＡＡ（配列番号１）ＨＬＡ－Ａ＊０２複合体に結合する性質を有する、ペプチド－主要組織適合複合体（ｐＭＨＣ）結合ドメインを含む結合分子を提供し、ここで、ｐＭＨＣ結合ドメインは、（ｉ）少なくともＴＣＲアルファ鎖可変ドメインを含むアルファ鎖、および（ｉｉ）少なくともＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含むベータ鎖を含み、ここで、 （ａ）ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインは、以下の配列： Ｃ