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JP-2026515012-A - 改変抗体、その抗体断片、および抗体薬物複合体

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Abstract

重鎖ジスルフィド結合のうちの１つ以上が溶媒にアクセスできない領域に移動される、改変抗体、その抗体断片、および抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が提供される。

Inventors

  • チャン シアオ
  • ヤン シアオ
  • チュー チェンチェン
  • カオ チャンショウ
  • ハッサン イサフラス
  • カオ ツイホア

Assignees

  • イノベント バイオロジクス（スーチョウ）カンパニー，リミティド

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240429
Priority Date
20240426

Claims (20)

  1. 抗体またはその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、重鎖定常領域またはそのＣＨ１領域および軽鎖定常領域を含み、かつ、前記重鎖定常領域またはそのＣＨ１領域における重鎖アミノ酸残基の位置において、および前記軽鎖定常領域における軽鎖アミノ酸残基の位置において形成される非天然ジスルフィド結合を含み、（１）前記重鎖アミノ酸残基側鎖の前記相対溶媒露出面積（ＳＡＳＡ）と、（２）前記軽鎖アミノ酸残基側鎖の前記相対ＳＡＳＡとの合計が６５％未満、６０％未満または５５％未満であり、前記抗体またはその抗原結合断片が、前記重鎖定常領域の２２０位の前記アミノ酸残基と前記軽鎖定常領域の２１４位の前記アミノ酸残基との間にジスルフィド結合を有さず、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  2. 請求項１に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記重鎖アミノ酸側鎖の前記相対ＳＡＳＡが３０％超であり、前記軽鎖アミノ酸側鎖の前記相対ＳＡＳＡが１５％未満であるか、または前記軽鎖アミノ酸側鎖の前記相対ＳＡＳＡが３０％超であり、前記重鎖アミノ酸側鎖の前記相対ＳＡＳＡが１５％未満であり、好ましくは、前記重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは４０％超であり、前記軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは１０％未満であり、または前記軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは４０％超であり、前記重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは１０％未満であり、より好ましくは、前記重鎖および軽鎖のアミノ酸側鎖の各々の相対的ＳＡＳＡは、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、または４５％未満であり、 前記重鎖定常領域の位置が、前記ＩｇＧ１重鎖ナンバリングの前記アミノ酸位置に従って決定され、前記軽鎖定常領域の位置が、前記カッパ軽鎖ナンバリングまたはラムダ軽鎖ナンバリングの前記アミノ酸位置に従って決定され、 前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  3. 請求項１または２に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記非天然ジスルフィド結合が、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）還元および／またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）還元に対して耐性であり、例えば、 前記抗体またはその抗原結合断片が、単一抗体分子当たり１０～３０当量のＴＣＥＰにより還元される場合、前記非天然ジスルフィド結合の９０％超または９５％超が無傷のままであり、例えば、 前記抗体またはその抗原結合断片の前記濃度が、前記還元反応中に０．１～５０ｍｇ／ｍｌであり、 任意選択で、 前記非天然ジスルフィド結合が、前記抗体または抗原結合断片のヒンジ領域ジスルフィド結合の９０％超または９５％超を還元することができる還元条件下で安定なままであり、例えば、非天然ジスルフィド結合の９０％または９５％超がインタクトなままである、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  4. 前記抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖定常領域の２２０位の前記システインおよび前記軽鎖定常領域の２１４位の前記システインが、非システインで置換されており、例えば、前記抗体またはその抗原結合断片が、前記重鎖定常領域にＣ２２０Ｓ／Ａ／Ｖ、および前記軽鎖定常領域にＣ２１４Ｓ／Ａ／Ｖを含有する、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  5. 重鎖定常領域またはそのＣＨ１の重鎖アミノ酸残基、および軽鎖定常領域の軽鎖アミノ酸残基が、システイン残基に変異し、非天然ジスルフィド結合を形成する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  6. 請求項５に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記変異重鎖アミノ酸残基が、１２６、１６８、１７０、１７３、１３４、１３３、１３０、および１４１からなる群から選択される１つまたは複数の前記重鎖定常領域の位置に位置し、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものであり、および／または前記変異軽鎖アミノ酸残基が、１２４、１６４、１６２、１１６、２０９、１１７、および１１８からなる群から選択される１つまたは複数の軽鎖定常領域の位置に位置し、前記重鎖定常領域の位置が、前記ＩｇＧ１重鎖ナンバリングの前記アミノ酸位置に従って決定され、軽鎖定常領域の位置は、カッパ軽鎖ナンバリングまたはラムダ軽鎖ナンバリングのアミノ酸位置に従って決定される、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  7. 請求項６に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、以下の変異の組み合わせ： 重鎖において１２６Ｃ、軽鎖において１２４Ｃ、 重鎖における１６８Ｃ、軽鎖において１６４Ｃ、 重鎖において１７０Ｃ、軽鎖における１６４Ｃ、 重鎖において１７０Ｃ、軽鎖において１６２Ｃ、 重鎖における１７３Ｃ、軽鎖において１６２Ｃ、 重鎖において１３４Ｃ、軽鎖における１１６Ｃ、 重鎖において１３３Ｃ、軽鎖において２０９Ｃ、 重鎖において１３３Ｃ、軽鎖において１１７Ｃ、 重鎖において１３０Ｃ、軽鎖において１１８Ｃ、または 重鎖において１４１Ｃ、軽鎖において１１６Ｃのうちの一つまたは複数を含む、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  8. 請求項７に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、２対の重鎖および軽鎖を含み、その一方の対の重鎖および軽鎖のみが、以下の変異の組み合わせ： 前記重鎖においてＦ１２６Ｃ、および前記軽鎖においてＱ１２４Ｃ、 前記重鎖においてＨ１６８Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＶ１７３Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＳ１３４Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＦ２０９Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＩ１１７Ｃ、 前記重鎖においてＰ１３０Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１８Ｃ、ならびに 重鎖においてＡ１４１Ｃ、軽鎖においてＦ１１６Ｃの１つを含み、 任意選択的に、前記重鎖および軽鎖が、前記重鎖にＣ２２０Ｓ、および前記軽鎖にＣ２１４Ｓをさらに含む、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  9. 請求項６に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、２対の重鎖および軽鎖を含み、各対の重鎖および軽鎖が、以下の変異の組み合わせ： 前記重鎖においてＦ１２６Ｃ、および前記軽鎖においてＱ１２４Ｃ、 前記重鎖においてＨ１６８Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＶ１７３Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＳ１３４Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＦ２０９Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＩ１１７Ｃ、 前記重鎖においてＰ１３０Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１８Ｃ、ならびに 前記重鎖においてＡ１４１Ｃ、前記軽鎖においてＦ１１６Ｃの１つまたは複数を含み、 任意選択的に、前記重鎖および軽鎖が、前記重鎖にＣ２２０Ｓ、および前記軽鎖にＣ２１４Ｓをさらに含む、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  10. 請求項９に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、２対の重鎖および軽鎖を含み、 各重鎖は、Ｆ１２６Ｃを含み、各軽鎖は、Ｑ１２４Ｃを含む、 各重鎖は、Ｈ１６８Ｃを含み、各軽鎖は、Ｔ１６４Ｃを含む、 各重鎖は、Ｆ１７０Ｃを含み、各軽鎖は、Ｔ１６４Ｃを含む、 各重鎖は、Ｆ１７０Ｃを含み、各軽鎖は、Ｓ１６２Ｃを含む、 各重鎖は、Ｖ１７３Ｃを含み、各軽鎖は、Ｓ１６２Ｃを含む、 各重鎖は、Ｓ１３４Ｃを含み、各軽鎖は、Ｆ１１６Ｃを含む、 各重鎖は、Ｋ１３３Ｃを含み、各軽鎖は、Ｆ２０９Ｃを含む、 各重鎖は、Ｋ１３３Ｃを含み、各軽鎖は、Ｉ１１７Ｃを含む、 各重鎖は、Ｐ１３０Ｃを含み、各軽鎖は、Ｆ１１８Ｃを含む、または 各重鎖は、Ａ１４１Ｃを含み、各軽鎖は、Ｆ１１６Ｃを含み、 任意で、各重鎖は、Ｃ２２０Ｓをさらに含み、各軽鎖は、Ｃ２１４Ｓをさらに含む、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  11. 請求項１～１０のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、２対の重鎖および軽鎖を含み、前記２つの重鎖が、同一であっても異なっていてもよく、前記２つの軽鎖が、同一であっても異なっていてもよく、例えば、前記重鎖および前記軽鎖が、以下の変異の組み合わせを含有する、ＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  12. 請求項１～１１のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の定常領域、例えばＩｇＧ１の定常領域であり、 前記軽鎖定常領域が、カッパまたはラムダ定常領域であるか、または ＣＨ１は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＣＨ１領域である、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトもしくはヒト化もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片、モノクローナル抗体、Ｆａｂ断片、シングルアーム抗体および／または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）であり、例えば、前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＥＲ２，Ｂ７Ｈ３および／またはＴＲＯＰ２に特異的に結合する、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩。
  14. 請求項１～１３のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）を含み、任意選択的に、前記Ｆｃ領域が、例えば、ＳＩ変異、ＬＡＬＡ変異、Ｎ２９７Ａ変異、ＹＴＥ変異、および／またはＦＬＡＡ変異を有する、ヒトＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域である、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  15. 請求項１～１４のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記ＡＤＣが、リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片に連結されたペイロードを含み、前記ペイロードが、チオールベースのコンジュゲーションを介して前記抗体またはその抗原結合断片に共有結合され、例えばペイロードが、細胞毒性薬剤（例えば、ＤｘｄまたはＭＭＡＥ）、細胞増殖抑制剤、生物学的に活性なタンパク質、合成ポリマー、酵素、核酸（例えば、ＤＮＡ、またはＲＮＡ）およびその断片を含む、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  16. 請求項１～１４のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記ＡＤＣが、リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片に連結されたペイロードを含み、前記リンカーが、開放ジスルフィド結合のチオール－ＳＨを介して前記抗体に連結され、例えば、前記リンカーがマレイミド部分を含有する、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  17. 請求項１～１４のいずれか一項に記載のＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であって、前記ＡＤＣが、リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片に連結されたペイロードを含み、前記リンカー－ペイロードが、ｍｃ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄまたはｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥから選択される、ＡＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
  18. 前記薬物対抗体比（ＤＡＲ）が、３．７４～４であるか、または前記ＤＡＲが、５．７０～６である、請求項１～１７のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  19. 抗体薬物複合体（ＡＤＣ）またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を調製する方法であって、以下の工程： （ａ）請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を、還元剤とインキュベートして、前記抗体またはその抗原結合断片内の天然ジスルフィド結合を還元して、還元されたチオール基を生成することと、 （ｂ）工程（ａ）で生成された還元チオール基と反応するように、反応基を有するリンカー－ペイロードの過剰量を導入することと、を含み、 任意選択的に、（ｃ）有効量のＮ－アセチルシステインを添加して、前記過剰なペイロードをクエンチし、次いで、結果として生じる抗体薬物複合体を回収すること、をさらに含み、 任意選択的に、前記リンカー－ペイロードがマレイミド基を含み、 任意選択的に、前記リンカー－ペイロードが、チオールベースのコンジュゲーションを介して前記抗体またはその抗原結合断片に連結されている、方法。
  20. 前記結果として生じるＡＤＣ産物の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％が、約４の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有するか、または前記結果として生じるＡＤＣ産物の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％が、約６の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有する、請求項１９に記載の方法。

Description

本開示は、重鎖－軽鎖ジスルフィド結合のうちの１つ以上が溶媒にアクセスできない領域に移動される、改変抗体、その抗体断片、および抗体薬物複合体（ＡＤＣ）に関する。 抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、癌の標的治療のための重要なクラスの生物製剤として注目されてきている。これまで、１４個のＡＤＣが米国ＦＤＡによって承認されている。ＡＤＣは、生物学的に活性な細胞毒性薬剤に連結された抗体から構成される複合体分子である。薬物結合（すなわち、標的レベルの平均薬物対抗体比（ＤＡＲ）を達成するためのリジンおよび鎖間システインベースのコンジュゲーション）のための従来の戦略は、コンジュゲーション部位および結合薬物の不均一性に悩まされている。部位特異的コンジュゲーションの開発の進捗により、均質なＡＤＣの調製が可能となった。しかしながら、これらの戦略のほとんどは、抗体配列の再操作、多段階操作、および高価な基質を必要とし、したがって、これらの方法の産業における使用を制限する。 したがって、均質なＡＤＣの調製を促進する改変抗体およびその抗体断片に対するニーズがある。 本開示は、重鎖－軽鎖ジスルフィド結合のうちの１つ以上が溶媒にアクセスできない領域に移動される、改変抗体、その抗体断片、およびＡＤＣに関する。いくつかの実施形態では、改変抗体およびその抗体断片は、均質なＡＤＣの調製を容易にすることができる。 いくつかの実施形態では、重鎖－軽鎖ジスルフィド結合のうちの１つ以上は、溶媒にアクセスできない領域に移動され、その結果、新しいジスルフィド結合は、典型的な還元条件（例えば、過剰なＴＣＥＰ）で還元剤によって開裂されない。いくつかの実施形態では、非天然ジスルフィド結合は、重鎖アミノ酸残基および軽鎖アミノ酸残基の位置で形成される。いくつかの実施形態では、溶媒にアクセスできない領域は、これらのジスルフィド結合が典型的な還元条件によって開裂されない領域である。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ断片の構造における候補アミノ酸対の側鎖の相対溶媒露出面積（ＳＡＳＡ）が計算される。いくつかの実施形態では、ジスルフィド結合は、（１）２つのアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡの合計が６５％超である場合、「溶媒アクセス可能」として分類される。いくつかの実施形態では、ジスルフィド結合は、（１）２つのアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡの合計が６５％未満である場合、「溶媒にアクセスできない」として分類される。いくつかの実施形態では、２つのアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡの合計は、６５％未満である。いくつかの実施形態では、第一のアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、４０％超であり、第二のアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１０％未満である。いくつかの実施形態では、第一のアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、３０％超であり、第二のアミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１５％未満である。いくつかの実施形態では、２つのアミノ酸側鎖の各々の相対的ＳＡＳＡは、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、または４５％未満である。 一態様では、本開示は、ペイロードおよび抗体またはそれの抗体断片（例えば、抗原結合断片）を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、ここで前記抗体またはその抗体断片が、重鎖アミノ酸残基および軽鎖アミノ酸残基の位置で形成される非天然ジスルフィド結合を含み、ここで（１）前記重鎖アミノ酸残基側鎖の前記相対溶媒露出面積（ＳＡＳＡ）と、（２）前記軽鎖アミノ酸残基側鎖の前記相対ＳＡＳＡとの合計が６５％未満、６０％未満、または５５％未満であり、ここで前記抗体またはその抗体断片が、前記重鎖定常領域の２２０位の前記アミノ酸残基と前記軽鎖定常領域の２１４位の前記アミノ酸残基との間にジスルフィド結合を有さず、ここで前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである、ＡＤＣまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。 いくつかの実施形態では、重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、４０％超であり、軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１０％未満であるか、または軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、４０％超であり、重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１０％未満である。 いくつかの実施形態では、重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、３０％超であり、軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１５％未満であるか、または軽鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、３０％超であり、重鎖アミノ酸側鎖の相対ＳＡＳＡは、１５％未満である。 いくつかの実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸側鎖の各々の相対ＳＡＳＡは、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０未満、または４５％未満である。 いくつかの実施形態では、重鎖定常領域の２２０位のアミノ酸残基は、非システイン残基であるか、または軽鎖定常領域の２１４位のアミノ酸残基は、非システイン残基であり、ここでアミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである。 いくつかの実施形態では、非天然ジスルフィド結合は、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）及び／又はジチオスレイトール（ＤＴＴ）などの還元剤による還元に対して耐性がある。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片が、単一抗体分子当たり１０～３０当量のＴＣＥＰにより還元されるとき、非天然ジスルフィド結合の９０％超または９５％超が無傷のままである。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片の濃度は、還元反応中に０．１～５０ｍｇ／ｍｌである。 いくつかの実施形態では、非天然ジスルフィド結合は、抗体または抗体断片のヒンジ領域ジスルフィド結合の９０％超を還元することができる還元条件下で安定なままである。 いくつかの実施形態では、重鎖の少なくとも１つの非システインアミノ酸残基は、システイン残基に変異する。 いくつかの実施形態では、非システインアミノ酸残基は、１２６、１６８、１７０、１７３、１３４、１３３、１３０、および１４１からなる群から選択される位置に位置し、ここでアミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、重鎖定常領域に以下の変異のうちの１つを含む：Ｆ１２６Ｃ、Ｈ１６８Ｃ、Ｆ１７０Ｃ、Ｖ１７３Ｃ、Ｓ１３４Ｃ、Ｋ１３３Ｃ、Ｐ１３０Ｃ、およびＡ１４１Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、２つの重鎖を含み、その各々は、重鎖定常領域に以下の変異のうちの１つ以上を含む：Ｆ１２６Ｃ、Ｈ１６８Ｃ、Ｆ１７０Ｃ、Ｖ１７３Ｃ、Ｓ１３４Ｃ、Ｋ１３３Ｃ、Ｐ１３０Ｃ、およびＡ１４１Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、２つの重鎖を含み、１つの重鎖のみが、重鎖定常領域に以下の変異のうちの１つを含む：Ｆ１２６Ｃ、Ｈ１６８Ｃ、Ｆ１７０Ｃ、Ｖ１７３Ｃ、Ｓ１３４Ｃ、Ｋ１３３Ｃ、Ｐ１３０Ｃ、およびＡ１４１Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片の軽鎖定常領域における少なくとも１つの非システインアミノ酸は、システイン残基に変異する。 いくつかの実施形態では、少なくとも１つの非システインアミノ酸は、１２４、１６４、１６２、１１６、２０９、１１７、及び１１８からなる群から選択される位置に位置する。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、軽鎖定常領域において、以下の変異のうちの一つ以上を含む：Ｑ１２４Ｃ、Ｔ１６４Ｃ、Ｓ１６２Ｃ、Ｆ１１６Ｃ、Ｆ２０９Ｃ、Ｉ１１７Ｃ、およびＦ１１８Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、２つの軽鎖を含み、その各々は、軽鎖定常領域に以下の変異のうちの１つ以上を含む：Ｑ１２４Ｃ、Ｔ１６４Ｃ、Ｓ１６２Ｃ、Ｆ１１６Ｃ、Ｆ２０９Ｃ、Ｉ１１７Ｃ、およびＦ１１８Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、２つの軽鎖を含み、１つの軽鎖のみが、軽鎖定常領域に以下の変異のうちの１つ以上を含む：Ｑ１２４Ｃ、Ｔ１６４Ｃ、Ｓ１６２Ｃ、Ｆ１１６Ｃ、Ｆ２０９Ｃ、Ｉ１１７Ｃ、およびＦ１１８Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、以下の変異のセットのうちの一つ以上を含む： 前記重鎖においてＦ１２６Ｃ、および前記軽鎖においてＱ１２４Ｃ、 前記重鎖においてＨ１６８Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＶ１７３Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＳ１３４Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＦ２０９Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＩ１１７Ｃ、 前記重鎖においてＰ１３０Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１８Ｃ、ならびに 前記重鎖においてＡ１４１Ｃ、および前軽鎖においてＦ１１６Ｃ。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体断片は、重鎖および軽鎖の２つの対を含み、その重鎖および軽鎖の１つの対のみが、以下の変異のセットのうちの１つを含む： 前記重鎖においてＦ１２６Ｃ、および前記軽鎖においてＱ１２４Ｃ、 前記重鎖においてＨ１６８Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＶ１７３Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＳ１３４Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＦ２０９Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＩ１１７Ｃ、 前記重鎖においてＰ１３０Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１８Ｃ、ならびに 前記重鎖においてＡ１４１Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、重鎖および軽鎖の二つの対を含み、その重鎖および軽鎖の各対は、以下の変異のセットのうちの一つ以上を含む： 前記重鎖においてＦ１２６Ｃ、および前記軽鎖においてＱ１２４Ｃ、 前記重鎖においてＨ１６８Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＴ１６４Ｃ、 前記重鎖においてＦ１７０Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＶ１７３Ｃ、および前記軽鎖においてＳ１６２Ｃ、 前記重鎖においてＳ１３４Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＦ２０９Ｃ、 前記重鎖においてＫ１３３Ｃ、および前記軽鎖においてＩ１１７Ｃ、 前記重鎖においてＰ１３０Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１８Ｃ、ならびに 前記重鎖においてＡ１４１Ｃ、および前記軽鎖においてＦ１１６Ｃ。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｆ１２６Ｃを含み、各軽鎖は、Ｑ１２４Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｈ１６８Ｃを含み、各軽鎖は、Ｔ１６４Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｆ１７０Ｃを含み、各軽鎖は、Ｔ１６４Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｆ１７０Ｃを含み、各軽鎖は、Ｓ１６２Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｖ１７３Ｃを含み、各軽鎖は、Ｓ１６２Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、各重鎖は、Ｓ１３４Ｃを含み、各軽鎖は、Ｆ１１６Ｃを含む。 いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗体断片は、２対の重鎖および軽鎖を含み、