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JP-2026515067-A - エクソソームＣＡ１２５を検出する物質の肺疾患を診断または補助診断する製品の製造における使用

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Abstract

本発明は生物検出技術分野に属し、具体的にはエクソソームＣＡ１２５を検出する物質の肺疾患を診断または補助診断する製品の製造における使用に関する。本発明はエクソソーム処理液を提供し、本発明が提供するエクソソーム処理液を用いて測定対象のエクソソームサンプルに対して前処理を行うことで、溶出液中の成分がエクソソームタンパク質検出に与える影響を減少させ、検出時間を効果的に短縮し、エクソソームタンパク質の安定検出を実現し、エクソソームタンパク質の全自動検出の実現に有利である。 【選択図】図１

Inventors

  • 董 鳴
  • 陳 茜
  • 胡 高磊

Assignees

  • 広州国家実験室

Dates

Publication Date
20260513
Application Date
20240423
Priority Date
20230515

Claims (18)

  1. 緩衝物質、イオン強度維持剤、ブロッキング剤、界面活性剤、キレート剤および糖類を含むエクソソーム処理液。
  2. 前記緩衝物質はホウ砂塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、リン酸緩衝塩、酢酸緩衝塩、クエン酸緩衝塩のうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記イオン強度維持剤は塩化物塩を含み、 好ましくは、前記ブロッキング剤はウシ血清アルブミン、カゼイン、コラーゲンペプチドのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記界面活性剤は陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤のうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記キレート剤はエチレンジアミン四酢酸およびエチレンジアミン四酢酸の水溶性塩のうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記糖類はスクロース、トレハロースのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記エクソソーム処理液はさらに防腐剤を含む、ことを特徴とする請求項１に記載のエクソソーム処理液。
  3. 前記防腐剤はアジ化ナトリウム、プロクリン３００、５－ブロモ－５－ニトロ－１，３－ジオキサン、プロクリン９００のうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記緩衝物質の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で２～４％であり、 好ましくは、前記緩衝物質はトリスヒドロキシメチルアミノメタンおよびリン酸緩衝塩を含み、 好ましくは、前記トリスヒドロキシメチルアミノメタンの前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．９～２．１％であり、 好ましくは、前記リン酸緩衝塩の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で１．１～１．９％であり、 好ましくは、前記リン酸緩衝塩はリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウムのうち少なくとも一種であり、さらにリン酸水素二ナトリウムとリン酸二水素ナトリウムの混合物であり、 好ましくは、前記リン酸水素二ナトリウムと前記リン酸二水素ナトリウムの重量比は１：（０．７～１．１）であり、 好ましくは、前記リン酸水素二ナトリウムは十二水和リン酸水素二ナトリウムであり、 好ましくは、前記リン酸二水素ナトリウムは二水和リン酸二水素ナトリウムであり、 好ましくは、前記イオン強度維持剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．６～１．２％であり、 好ましくは、前記イオン強度維持剤は塩化カリウム、塩化ナトリウム、塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムのうち少なくとも一種であり、さらに塩化ナトリウムであり、 好ましくは、前記ブロッキング剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．８～２．２％であり、 好ましくは、前記ブロッキング剤はカゼイン、コラーゲンペプチドのうち少なくとも一種およびＢＳＡを含み、さらにＢＳＡを含み、 好ましくは、前記界面活性剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．０５～０．６％であり、 好ましくは、前記界面活性剤は非イオン界面活性剤を含み、さらにポリオキシエチレンアルコール構造を含む非イオン界面活性剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル系、Ｎ－Ｄ－グルコース－Ｎ－メチルアルカンアミドのうち少なくとも一種を含み、さらにアルコールエトキシレート、ポリオキシエチレン－ポリオキシアルキレンブロック共重合体、Ｔｗｅｅｎ－２０、Ｔｗｅｅｎ－４０、Ｔｗｅｅｎ－８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－３０５、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－４０５、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－７０５、ＭＥＧＡ ８、ＭＥＧＡ １０のうち少なくとも一種を含み、さらにＴｗｅｅｎ－２０を含み、 好ましくは、前記キレート剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．０３～０．２５％であり、 好ましくは、前記キレート剤はエチレンジアミン四酢酸の水溶性塩を含み、さらにエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含み、 好ましくは、前記糖類の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．８～２．２％であり、 好ましくは、前記糖類はトレハロースを含み、 好ましくは、前記防腐剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．０８～０．２２％であり、 好ましくは、前記防腐剤はアジ化ナトリウムまたはプロクリン３００を含む、ことを特徴とする請求項１または２に記載のエクソソーム処理液。
  4. 前記緩衝物質の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で２．２～３．８％であり、 好ましくは、前記トリスヒドロキシメチルアミノメタンの前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で１～２％であり、 好ましくは、前記リン酸緩衝塩の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で１．２～１．８％であり、 好ましくは、前記リン酸水素二ナトリウムと前記リン酸二水素ナトリウムの重量比は１：（０．８～１）であり、 好ましくは、前記イオン強度維持剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．８～１％であり、 好ましくは、前記ブロッキング剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で１～２％であり、 好ましくは、前記界面活性剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．１～０．５％であり、 好ましくは、前記キレート剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．０５～０．２％であり、 好ましくは、前記糖類の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で１～２％であり、 好ましくは、前記防腐剤の前記エクソソーム処理液中の含有量は重量百分率で０．１～０．２％であり、 好ましくは、前記エクソソーム処理液はさらに水を含み、水の使用量は残量であり、 好ましくは、前記エクソソーム処理液のｐＨは６～８であり、さらに７～８である、ことを特徴とする請求項３に記載のエクソソーム処理液。
  5. 請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液を含む試薬または試薬キットであって、 好ましくは、前記試薬または前記試薬キットはｂ１）～ｂ４）のうち少なくとも一種に用いられ、 ｂ１）エクソソーム物質の存在の有無を検出すること、 ｂ２）エクソソーム物質の含有量を検出すること、 ｂ３）疾病を診断または補助診断すること、前記疾病はエクソソーム物質の存在の有無、または含有量により診断または補助診断されるものであり、 ｂ４）疾病の重症度を評価すること、前記疾病の重症度はエクソソーム物質の含有量により評価されるものであり、 好ましくは、前記物質は核酸、タンパク質のうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記物質はタンパク質を含み、 好ましくは、前記エクソソームは、全血、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、尿の一種または複数の組み合わせから由来するものであり、 好ましくは、前記試薬または前記試薬キットはエクソソームに対して前処理を行うことによってｂ１）～ｂ４）のうち少なくとも一種に用いられる、ことを特徴とする試薬または試薬キット。
  6. ｃ１）～ｃ２）のうち少なくとも一種、捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズおよび発光物質で標識された検出抗体を含む検出試薬キットであって、 ｃ１）請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液、 ｃ２）請求項５に記載の試薬、 前記検出試薬キットは、ｄ１）～ｄ４）のうち少なくとも一種に用いられ、 ｄ１）エクソソームタンパク質の存在の有無を検出すること、 ｄ２）エクソソームタンパク質の含有量を検出すること、 ｄ３）疾病を診断または補助診断すること、前記疾病はエクソソームタンパク質の存在の有無、または含有量により診断または補助診断されるものであり、 ｄ４）疾病の重症度を評価すること、前記疾病の重症度はエクソソームタンパク質の含有量により評価されるものであり、 前記捕獲抗体および／または前記検出抗体は前記タンパク質に特異的に結合する、ことを特徴とする検出試薬キット。
  7. 前記発光物質は、アクリジニウムエステル、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記検出試薬キットは、さらに発光基質、タンパク質キャリブレーターのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記タンパク質は、ＣＡ１２５であり、前記試薬キットは、ｅ１）～ｅ５）のうち少なくとも一種に用いられ、 ｅ１）エクソソームＣＡ１２５の存在の有無を検出すること、 ｅ２）エクソソームＣＡ１２５の含有量を検出すること、 ｅ３）肺疾患を診断または補助診断すること、 ｅ４）肺疾患の重症度を評価すること、 ｅ５）肺線維症を診断または補助診断すること、 好ましくは、前記肺疾患は、肺炎または間質性肺疾患を含む、ことを特徴とする請求項６に記載の検出試薬キット。
  8. ｆ１）～ｆ３）のうち少なくとも一種および化学発光測定装置を含むことを特徴とする検出システム。 ｆ１）請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液、 ｆ２）請求項５に記載の試薬または前記試薬キット、 ｆ３）請求項６～７のいずれか一項に記載の検出試薬キット。
  9. 請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液を用いて前記エクソソームに対して前処理を行うステップを含む、ことを特徴とするエクソソームタンパク質の存在または含有量を検出する方法。
  10. 前記エクソソーム処理液を用いて前記エクソソームに対して前処理を行うステップは、具体的に、前記エクソソーム処理液と前記エクソソームを混合し、反応させることであり、 好ましくは、前記エクソソーム処理液と前記エクソソームの体積比は１：（２～３０）であり、 好ましくは、前記反応の時間は５～１２０ｍｉｎであり、 好ましくは、前記反応の温度は２５～４２℃であり、 好ましくは、前記エクソソームは、全血、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、尿の一種または複数の組み合わせから由来するものであり、 好ましくは、前記方法はさらに以下のステップを含み、 （１）前処理後のエクソソームと捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズを混合し、反応させ、捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズ－エクソソームの複合体を得ること、 （２）捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズ－エクソソームの複合体と発光物質で標識された検出抗体を混合し、反応させ、捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズ－エクソソーム－発光物質で標識された検出抗体の複合体を得ること、 （３）捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズ－エクソソーム－発光物質で標識された検出抗体の複合体と発光基質を混合し、反応させ、発光強度を検出し、エクソソームサンプル中のタンパク質の含有量を取得すること、 好ましくは、ステップ（１）、（２）における前記反応の時間は５～１２０ｍｉｎであり、 好ましくは、ステップ（１）、（２）における前記反応の温度は２５～４２℃であり、 好ましくは、ステップ（３）におけるエクソソームサンプル中のタンパク質の含有量を取得する方法は、タンパク質キャリブレーターを使用して標準曲線法により標準曲線を構築し、その後検出した発光強度に基づいてエクソソームサンプル中のタンパク質の含有量を計算する、ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
  11. 請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液のａ１）～ａ６）のうち少なくとも一種における使用であって、 ａ１）エクソソーム物質の存在の有無を検出すること、 ａ２）エクソソーム物質の含有量を検出すること、 ａ３）疾病を診断または補助診断する製品を製造すること、前記疾病はエクソソーム物質の存在の有無、または含有量により診断または補助診断されるものであり、 ａ４）疾病の重症度を評価する製品を製造すること、前記疾病の重症度はエクソソーム物質の含有量により評価されるものであり、 ａ５）エクソソーム物質の存在の有無を検出する製品を製造すること、 ａ６）エクソソーム物質の含有量を検出する製品を製造すること、 前記物質は、核酸、タンパク質のうち少なくとも一種を含む、ことを特徴とするエクソソーム処理液の使用。
  12. 前記核酸はＤＮＡおよびＲＮＡのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記物質はタンパク質を含み、 好ましくは、前記製品は試薬、試薬キット、検出システムのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記エクソソームは、全血、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、尿の一種または複数の組み合わせから由来するものである、ことを特徴とする請求項１１に記載の使用。
  13. ａ１）～ａ２）のいずれか一種の方法であって、 ａ１）請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液を用いて前記エクソソームに対して前処理を行うステップを含む、エクソソーム物質の存在の有無を検出する方法、 ａ２）請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液を用いて前記エクソソームに対して前処理を行うステップを含む、エクソソーム物質の含有量を検出する方法、 前記物質は、核酸、タンパク質のうち少なくとも一種を含む、ことを特徴とする方法。
  14. 前記核酸は、ＤＮＡおよびＲＮＡのうち少なくとも一種を含み、 好ましくは、前記物質はタンパク質を含み、 好ましくは、前記エクソソームは、全血、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、尿のうち一種または複数の組み合わせから由来するものである、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  15. エクソソームＣＡ１２５を検出する物質の製品の製造における使用であって、 前記製品はｇ１）～ｇ３）のうち少なくとも一種に用いられ、 ｇ１）肺疾患を診断または補助診断すること、 ｇ２）肺疾患の重症度を評価すること、 ｇ３）肺線維症を診断または補助診断すること、を特徴とする使用。
  16. 前記肺疾患は肺炎または間質性肺疾患を含み、 好ましくは、前記ＣＡ１２５を検出する物質は遺伝子レベルおよび／またはタンパク質レベルでＣＡ１２５を検出する物質を含み、さらにタンパク質レベルでＣＡ１２５を検出する物質を含み、 好ましくは、前記製品は試薬、試薬キット、検出チップまたは検出システムであり、 好ましくは、前記製品は請求項１～４のいずれか一項に記載のエクソソーム処理液を含む、ことを特徴とする請求項１５に記載の使用。
  17. ｇ１）～ｇ３）のいずれか一種の方法。 ｇ１）被検サンプル中のエクソソームＣＡ１２５の含有量、発現量および／または活性を検出するステップを含む、肺疾患を診断または補助診断する方法、 ｇ２）被検サンプル中のエクソソームＣＡ１２５の含有量、発現量および／または活性を検出するステップを含む、肺疾患の重症度を評価する方法、 ｇ３）被検サンプル中のエクソソームＣＡ１２５の含有量、発現量および／または活性を検出するステップを含む、肺線維症を診断または補助診断する方法。
  18. ｇ１）～ｇ２）における前記肺疾患は肺炎または間質性肺疾患を含み、 好ましくは、ｇ１）～ｇ３）において請求項１５または１６に記載の製品を用いて被検サンプル中のエクソソームＣＡ１２５の含有量、発現量および／または活性を検出する、ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。

Description

本発明は生物検出技術分野に属し、具体的にはエクソソームＣＡ１２５を検出する物質の肺疾患を診断または補助診断する製品の製造における使用に関する。 （関連出願） 本出願は２０２３年５月１５日に提出された出願番号２０２３１０５４７５７９２の中国特許出願の優先権を主張し、その全内容を引用により本明細書に組み込み、すべての目的のために引用するものとする。 間質性肺疾患（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ、ＩＬＤ）は進行性呼吸困難、乾性咳嗽を主要症状とする異質性疾患群であり、病変部位は肺実質にあり、広範な炎症とびまん性線維化を伴う。肺線維症は間質性肺疾患の共通の変化の一つとして、具体的には肺胞上皮細胞損傷、びまん性局所肺胞炎、線維芽細胞の病理性間質増殖、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の肺間質および肺胞への沈着として現れ、不可逆的な肺構造の再構築と機能喪失、ガス交換障害を引き起こし、さらには呼吸不全を引き起こす。間質性肺炎と肺線維症の早期診断は投薬を指導し予後を改善することができ、現在臨床で常用される診断手段には肺機能検査、胸部ＨＲＣＴおよび侵襲的な経気管支肺胞洗浄液検査と肺生検があるため、ＩＬＤ疾患の早期スクリーニングおよび進行度モニタリングのための血清学的検査は近年有望な研究分野となっている。 現在すでに臨床に用いられているＩＬＤ補助診断の血清マーカーにはシアル化糖鎖抗原（ＫＬ－６）があるが、ＫＬ－６の検出率と感度は十分に高くないため、普及していない。糖類抗原ＣＡ１２５は現在最も広く使用されている腫瘍血清マーカーであり、主に中皮、ミュラー管上皮、ミュラー管誘導体に発生する体腔上皮組織に発現し、これらの組織に組織病変または異常増殖が発生するとＣＡ１２５レベルの明らかな上昇をもたらす。複数の研究により、肺癌患者の血清中で、ＣＡ１２５陽性率は６０％～７０％に達することが確認されている。さらに、研究により血清ＣＡ１２５とＩＬＤには有意な相関性があり、特発性肺線維症（ＩＰＦ）と他のＩＬＤを区別できることが確認されている。 エクソソームは直径３０ｎｍ～１５０ｎｍ、平均直径１００ｎｍの細胞外小胞を指し、細胞質膜の陥入を経て他の細胞内小胞および細胞小器官と融合して形成される。エクソソームは豊富なタンパク質、核酸、脂質および代謝物を含み、これらの物質を通じて、エクソソームは受容体細胞の下流シグナル経路を調節することにより細胞－細胞間コミュニケーションの媒体となることができる。 エクソソームは疾病の発生および進展において重要な役割を果たし、疾病診断及び治療において独特の優位性と潜在的価値を有する。エクソソーム中のタンパク質も潜在的なバイオマーカーとして広く研究されている。ＣＡ１２５はＭＵＣ１６遺伝子が発現する細胞膜上に存在する糖タンパク質であり、最新の研究により卵巣癌のエクソソームのＣＡ１２５含有量は血液中の遊離ＣＡ１２５より高いことが発見されたが、エクソソーム上のＣＡ１２５タンパク質の肺疾患における診断への応用についてはまだ報告されていない。 効果実施例２において比較例１、比較例２および実施例５で提供される検出方法によりエクソソーム上のＣＡ１２５タンパク質含有量の検出を行った結果図である。効果実施例３における血清ＣＡ１２５とエクソソーム上のＣＡ１２５の間質性肺疾患を診断するためのＲＯＣ曲線図である。効果実施例４における健康人群、ＩＬＤ陽性かつ既上市血清ＫＬ－６検出試薬結果陰性サンプル、ＩＬＤ陽性かつ既上市血清ＫＬ－６検出試薬結果陽性サンプルを実施例５で提供される検出方法によりエクソソーム上のＣＡ１２５タンパク質含有量の検出を行った結果図である。 以下、具体的な実施例により本発明の内容をさらに詳細に説明する。 これらの実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。 以下の実施例において具体的な条件が明記されていない実験方法は、通常は通常の条件に従い、または製造メーカーが提案する条件に従う。本実施例で使用される材料、試薬等は、特別な説明がない限り、商業的に入手した試薬および材料である。 本実施例における略語および重要な用語の定義は以下の通りである。 Ｔｒｉｓ： トリスヒドロキシメチルアミノメタン ＢＳＡ： ウシ血清アルブミン Ｔｗｅｅｎ－２０： ツイーン２０ ＥＤＴＡ－２Ｎａ： エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム ＭＥＳ： モルホリノエタンスルホン酸 ＥＤＣ： １－エチル－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩 ＮＨＳ： Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド ＢＮＤ： ５－ブロモ－５－ニトロ－１，３－ジオキサン。 実施例１ エクソソーム処理液 エクソソーム処理液であって、重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、Ｔｒｉｓ １％、十二水和リン酸水素二ナトリウム ０．６％、二水和リン酸二水素ナトリウム ０．６％、ＮａＣｌ ０．８％、ＢＳＡ １％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．１％、ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０５％、トレハロース １％、アジ化ナトリウム ０．１％、水 残量、ｐＨ７．５である。 実施例２ エクソソーム処理液 エクソソーム処理液であって、重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、Ｔｒｉｓ ２％、十二水和リン酸水素二ナトリウム １％、二水和リン酸二水素ナトリウム ０．８％、ＮａＣｌ １％、ＢＳＡ ２％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．５％、ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．２％、トレハロース ２％、アジ化ナトリウム ０．２％、水 残量、ｐＨ７．５である。 実施例３ エクソソーム処理液 エクソソーム処理液であって、重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、Ｔｒｉｓ １．５％、十二水和リン酸水素二ナトリウム ０．８％、二水和リン酸二水素ナトリウム ０．７％、ＮａＣｌ ０．９％、ＢＳＡ １．５％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．３％、ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．１％、トレハロース １．５％、アジ化ナトリウム ０．１５％、水 残量、ｐＨ７．５である。 実施例４ エクソソーム処理液 エクソソーム処理液であって、重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、Ｔｒｉｓ １％、十二水和リン酸水素二ナトリウム ０．６％、二水和リン酸二水素ナトリウム ０．６％、ＮａＣｌ ０．８％、ＢＳＡ １％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．１％、ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０５％、トレハロース １％、プロクリン３００ ０．１％、水 残量、ｐＨ７．５である。 実施例５ エクソソーム上のＣＡ１２５タンパク質の検出方法 エクソソーム上のＣＡ１２５タンパク質の検出方法であって、以下のステップを含む。 （１）磁気ビーズコーティング物の調製 １）磁気ビーズ活性化： １ｍＬの磁気ビーズ活性化緩衝液（質量濃度１％のＭＥＳを含む水溶液）に１０ｍｇの磁気ビーズを加え、ＥＤＣ溶液（最終濃度０．５ｍｇ／ｍＬ）およびＮＨＳ溶液（最終濃度１ｍｇ／ｍＬ）を加え、室温で３０ｍｉｎ反応させて、磁気ビーズを活性化し、その後磁気分離により上清を除去する。 ２）抗体結合： １ｍＬの磁気ビーズ結合緩衝液（質量濃度１％のＭＥＳを含む水溶液）で１０ｍｇの磁気ビーズを再懸濁し、３００μｇのＣＡ１２５捕獲抗体（北京開景、カタログ番号：ＢＸＡ００３）を加え、室温で２ｈ孵育し、磁気ビーズ－抗体結合物の溶液を得る。 ３）ブロッキング： 磁気ビーズ－抗体結合物の溶液に１００μＬのブロッキング剤（質量濃度１％のウシ血清アルブミン水溶液）を加え、室温で２ｈ孵育する。 ４）洗浄： 磁気分離により上清を除去した後、１ｍＬの磁気ビーズ洗浄液（質量濃度０．１％のプロクリン３００のＰＢＳ緩衝液を含む）を加えて洗浄し、洗浄ステップを２回繰り返した後、磁気分離により上清を除去し、ＣＡ１２５捕獲抗体でコーティングされた磁気ビーズ（ＣＡ１２５磁気ビーズコーティング物）を得る。 ５）磁気ビーズコーティング物のワーキング溶液の調製： ＣＡ１２５磁気ビーズコーティング物を磁気ビーズコーティング物の希釈液で希釈し、濃度０．５ｍｇ／ｍＬの磁気ビーズコーティング物のワーキング溶液を得る。その中で、磁気ビーズコーティング物の希釈液は重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、Ｔｒｉｓ ０．１％、ＮａＣｌ ２％、ＢＳＡ ３％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．５％、アジ化ナトリウム ０．１％、水 残量、ｐＨ７．５である。 （２）アクリジニウムエステル標識物の調製 １）アクリジニウムエステル母液の調製： アクリジニウムエステルを無水ＤＭＳＯに溶解し、最終濃度を５ｍｇ／ｍＬとする。 ２）標識反応： ０．２Ｍ ＮａＨＣＯ３（ｐＨ＝９．０）溶液で３００μｇのＣＡ１２５検出抗体（北京開景、カタログ番号：ＢＸＡ００４）を希釈し、１５μＬのアクリジニウムエステル母液を加え、３００μＬに定容し、この時アクリジニウムエステルの濃度は０．２５ｍｇ／ｍＬであり、アルミホイルで包み、混合液を恒温混合器に置き、室温で３０分間標識する。 ３）クエンチング反応： １００μＬの標識終止緩衝液（質量濃度１０％リジンの０．２Ｍ ＮａＨＣＯ３溶液、ｐＨ ９．０を含む）を加え、室温で３０分間混合する。 ４）精製： 脱塩カラムを使用して標識抗体を精製し、アクリジニウムエステル標識タンパク質成分を収集し濃度を検出し、ＣＡ１２５検出抗体アクリジニウムエステル標識物を得る。 ５）発光物質標識抗体のワーキング溶液（アクリジニウムエステル標識物のワーキング溶液）の調製： ＣＡ１２５検出抗体アクリジニウムエステル標識物をアクリジニウムエステル標識物の希釈液で希釈し、濃度０．４μｇ／ｍＬのアクリジニウムエステル標識物のワーキング溶液を得る。その中で、アクリジニウムエステル標識物の希釈液は重量百分率で以下の成分からなる。すなわち、ＭＥＳ ０．１％、ＮａＣｌ ２％、ＢＳＡ ３％、Ｔｗｅｅｎ－２０ ０．１％、アジ化ナトリウム ０．１％、水 残量、ｐＨ６．５である。 （３）エクソソームサンプルの前処理 １）サンプル前処理： 血清または血漿をＰＢＳで１倍希釈した後、０．２２μｍフィルター膜を使用してろ過し、細胞片やその他の不純物を除去する。 ２）エクソソーム抽出： エクソソーム自動抽出装置を使用してエクソソームを抽出する。 １０μＬのエクソソームサンプルと９０μＬの実施例１のエクソソーム処理液を混合し、３７℃で５ｍｉｎ反応させる。 （４）測定対象のエクソソームサンプル中のＣＡ１２５含有量の検出と計算 １）ステップ（３）で得られた前処理後のサンプル２０μＬを取り、磁気ビーズコーティング物のワーキング溶液５０μＬを加え、混合後３７℃で５ｍｉｎ孵育し、その後磁気分離し、洗浄して結合されていない物質を除去し、上清を除去し、磁気ビーズコーティング物－エクソソーム複合体を得る。 ２）磁気ビーズコーティング物－エクソソーム複合体に発光物質標識抗体のワーキング溶液（アクリジニウムエステル標識物のワーキング溶液）５０μＬを加え、混合後３７℃で５ｍｉｎ孵育し、その後磁気分離し、洗浄して結合されていない物質を除去し、磁気ビーズコーティング物－エクソソーム－標識物複合体を得る。 ３）得られた磁気ビーズコーティング物－エクソソーム－標識物複合体に１００μＬのアクリジニウムエステル予備発光液（０．１ｗｔ％の３０ｗｔ％過酸化水素および０．２ｍｏｌ／Ｌ硝酸を含む水溶液）および１００μＬの発光液（０．１ｗｔ％セチルトリメチルアンモニウムクロリドおよび０．２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムを含む水溶液）を加え、十分に混合した後、最大発光強度を測定し、標準品の検出で得られた発光強度を標準曲線にフィッティングし、標準曲線によって測定対象のエクソソームサ