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KR-102958710-B1 - GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터

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Abstract

본 개시의 양태는 GM1 강글리오시드증, 테이 삭스병 및 샌드호프병과 같은 리소좀 축적병의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 조성물은 베타-갈락토시다제를 인코딩하는 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 베타-헥소사미니다제 서브유닛(예를 들어, HEXA, HEXB 또는 이들의 조합)을 인코딩하는 바이러스 벡터를 포함한다.

Inventors

  • 에스터베스, 미구엘, 세나

Assignees

  • 유니버시티 오브 매사추세츠

Dates

Publication Date
20260506
Application Date
20191004
Priority Date
20181005

Claims (20)

  1. SEQ ID NO: 18 또는 19에 제시된 서열을 포함하는 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 재조합 AAV(rAAV).
  2. 제1항에 있어서, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10 및 AAVrh10으로부터 선택되는 혈청형의 캡시드 단백질을 포함하는 rAAV.
  3. 제1항에 있어서, AAVrh8 혈청형의 캡시드 단백질을 포함하는 rAAV.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV가 둘 이상의 ITR을 포함하고, 여기서 각각의 ITR이 AAV1 ITR, AAV2 ITR, AAV3 ITR, AAV4 ITR, AAV5 ITR 및 AAV6 ITR로 구성된 군으로부터 선택되는 rAAV.
  5. SEQ ID NO: 18 또는 19에 제시된 서열을 포함하는 분리된 핵산.
  6. 제5항의 분리된 핵산을 포함하는 분리된 숙주 세포.
  7. 제6항에 있어서, 진핵 세포인 분리된 숙주 세포.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 포유동물 세포인 분리된 숙주 세포.
  9. 제6항에 있어서, 원핵 세포인 분리된 숙주 세포.
  10. 제9항에 있어서, 박테리아 세포인 분리된 숙주 세포.
  11. 제6항 또는 제7항에 있어서, AAV 캡시드 단백질을 인코딩하는 분리된 핵산을 추가로 포함하는 분리된 숙주 세포.
  12. 제11항에 있어서, 캡시드 단백질이 AAVrh8 캡시드 단백질 또는 AAVrh10 캡시드 단백질인 분리된 숙주 세포.
  13. (i) SEQ ID NO: 18에 제시된 서열을 포함하는 제1 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제1 rAAV; 및 (ii) SEQ ID NO: 19에 제시된 서열을 포함하는 제2 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제2 rAAV 를 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는, 리소좀 축적병을 치료하기 위한 약학적 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 제1 rAAV 및/또는 제2 rAAV가 AAVrh8 혈청형을 갖는 캡시드 단백질을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 제1 rAAV 및 제2 rAAV가 1:1의 벡터 게놈 (vg) 복사체 비로 조성물에 존재하는 약학적 조성물.
  16. 제13항에 있어서, 테이 삭스병 또는 샌드호프병을 치료하기 위한 약학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서, rAAV 또는 약학적 조성물이 두개내 주사, 뇌내 주사, 또는 대뇌 심실 시스템, 소뇌숨뇌수조 또는 척수강내 공간을 통한 CSF로의 주사에 의해 투여되는 약학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 기재된 재조합 AAV(rAAV)를 수용하는 용기를 포함하는 키트.
  19. (i) SEQ ID NO: 18에 제시된 서열을 포함하는 제1 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제1 rAAV를 포함하는 제1 용기; 및 (ii) SEQ ID NO: 19에 제시된 서열을 포함하는 제2 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 제2 용기 를 포함하는 키트.
  20. 제19항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제3 용기를 추가로 포함하는 키트.

Description

GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터 관련 출원 본 출원은 35 U.S.C. § 119(e) 하에 "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2018년 10월 5일에 출원된 미국 가특허 출원 일련 번호 62/741,848, "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2019년 3월 6일에 출원된 62/814,587, "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2019년 3월 8일에 출원된 62/815,996, "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2019년 3월 29일에 출원된 62/826,863", "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2019년 4월 29일에 출원된 62/840,359, 및 "GM1 및 GM2 강글리오시드증의 치료를 위한 RAAV 벡터"의 명칭으로 2019년 5월 16일에 출원된 62/848,858의 출원일의 이익을 주장하며, 각 출원의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다. EFS-WEB을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 언급 본 출원은 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록(명칭: "Sequence Listing"; 크기: 80,237 바이트; 및 Patent-In 3.5으로 작성됨)을 포함하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 분야 본 개시는 일부 양태에서 리소좀 축적병의 치료에 유용한 재조합 아데노-관련 바이러스(rAAV), 조성물 및 키트를 제공한다. 일부 구체예에서, 리소좀 축적병은 GM1 또는 GM2 강글리오시드증(예를 들어, 테이 삭스병)이다. 연방 지원 연구 본 발명은 국립보건원에 의해 수여되는 수여 번호 HD060576 하에 정부의 지원으로 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에 특정 권리를 갖는다. 배경 GM1 강글리오시드증은 인간 유전자 GLB1의 돌연변이에 의해 야기되는 상염색체 열성 신경병성 리소좀 축적병이다. 인간 GLB1 유전자는 중추 신경계(예를 들어, GM1 강글리오시드) 및 말초 조직(예를 들어, 올리고당, 당단백질 및 글리코사미노글리칸)의 수많은 분자로부터 말단 갈락토스 잔기를 제거하는 효소 β-D-갈락토시다제(βgal)를 인코딩한다. 리소좀 βgal 활성의 결핍은 GM1 강글리오시드 및 이의 아시알로-유도체 GA1이 그 합성 속도가 가장 높은 중추 신경계에 주로 축적되게 한다. GM1 강글리오시드증은 한결같이 치명적이며 효과적인 요법이 존재하지 않는다. 테이 삭스병(GM2 강글리오시드증) 및 샌드호프(Sandhoff)병은 각각 HEXA 및 HEXB 유전자의 돌연변이에 의해 야기되는 상염색체 열성 리소좀 축적병으로, β-N-아세틸-D-헥소사미니다제(Hex) 효소 활성의 결핍을 초래한다. Hex 효소는 HexA 및 HexB 단백질 서브유닛을 포함하는 이종이량체이다. Hex 활성의 결핍은 중추 신경계에서 GM2 강글리오시드의 점진적인 축적을 초래하고 이에 따른 신경변성을 초래한다. 테이 삭스병은 끊임 없이 진행되는 신경계의 쇠퇴와 궁극적인 죽음을 특징으로 한다. 테이 삭스병의 증상은 잦은 발작, 삼킴 곤란, 운동 조절 상실 및 잦은 호흡기 감염을 포함한다. 샌드호프병은 또한 CNS의 점진적인 쇠퇴를 특징으로 하며, 보행 이상, 삼킴 및 언어 장애, 말초 신경병증, 정신적 증상 및 궁극적인 사망을 초래한다. 현재 테이 삭스병 또는 샌드호프병에 대한 질병-변형 치료 옵션은 없으며, 항경련제 및 진경제를 포함하는 증상 치료만이 가능하다. 개요 본 개시의 양태는 유전자 전달을 위한 재조합 AAV 벡터에 관한 것이다. 일부 현재의 AAV 벡터는 대상체에서 부작용(예를 들어, 세포독성)을 야기하는 높은 수준의 유전자 발현을 전달한다. 본 개시는 조작된 조절 요소가 부작용의 유도 없이 치료량의 트랜스진을 제공하기 위해 트랜스진 발현 수준을 조절할 수 있다는 인식에 부분적으로 기초한다. 일부 양태에서, 본 개시는 키메라 인트론을 통해 리소좀 축적병-관련 단백질(예를 들어, HEXA, HEXB, GLB1 등)을 인코딩하는 트랜스진에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 재조합 AAV(rAAV)를 제공한다. 일부 양태에서, 본 개시는 키메라 인트론을 통해 트랜스진에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 재조합 AAV(rAAV)를 제공하며, 여기서 프로모터 및 트랜스진은 키메라 인트론에 의해 분리되고, 핵산은 인핸서 요소를 함유하지 않으며, 트랜스진은 리소좀 축적병-관련 단백질(예를 들어, HEXA 및/또는 HEXB 및/또는 GLB1)을 인코딩한다. 일부 구체예에서, 프로모터는 닭 베타-액틴(CB) 프로모터를 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 인트론은 닭 베타 액틴 인트론 및/또는 토끼 베타 글로빈 인트론을 포함한다. 일부 구체예에서, 핵산은 하나 이상의 비번역 서열, 예를 들어, 토끼 베타-글로불린 엑손 1 및/또는 엑손 2로부터의 비번역 서열을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 인트론은 2개의 비번역 서열의 측면에 위치한다(예를 들어, 제1 비번역 서열은 프로모터와 키메라 인트론 사이에 위치하고 제2 비번역 영역은 키메라 인트론과 트랜스진의 제1 코돈 사이에 위치한다). 일부 구체예에서, βgal은 인간 βgal이다. 일부 구체예에서, 본 개시에 의해 기재된 rAAV는 베타-헥소사미니다제 서브유닛 알파(HexA)를 인코딩하는 트랜스진을 포함한다. 일부 구체예에서, HEXA는 SEQ ID NO: 20에 제시된 서열로 표시된다. 일부 구체예에서, 트랜스진은 베타-헥소사미니다제 서브유닛 베타(HexB)를 인코딩한다. 일부 구체예에서, HEXB는 SEQ ID NO: 21에 제시된 서열로 표시된다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 rAAV의 적어도 하나의 캡시드 단백질은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10 또는 AAVrh10 캡시드 단백질이다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 rAAV의 적어도 하나의 ITR은 AAV1 ITR, AAV2 ITR, AAV3 ITR, AAV4 ITR, AAV5 ITR 또는 AAV6 ITR로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 ITR은 전장 ITR이다. 일부 구체예에서, rAAV는 2개의 ITR을 포함하고, 여기서 하이브리드 프로모터 및 트랜스진은 2개의 ITR 사이에 위치한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 rAAV는 혈청형 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10 또는 AAVrh10 중 하나를 갖는다. 일부 구체예에서, 본 개시는 본원에 기재된 rAAV의 성분을 인코딩하는 핵산에 관한 것이다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본 개시는 SEQ ID NO: 1 내지 6 또는 16 내지 19로부터 선택되는 서열을 포함하는 분리된 핵산을 제공한다. 일부 양태에서, 본 개시는 SEQ ID NO: 20 또는 21에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 인코딩하는 서열을 포함하는 분리된 핵산을 제공한다. 일부 구체예에서, rAAV의 성분을 인코딩하는 핵산(예를 들어, SEQ ID NO:1 내지 6 또는 16 내지 19로부터 선택되는 서열 또는 SEQ ID NO:1 내지 6 또는 16 내지 19로부터 선택되는 서열의 일부를 포함하는 핵산)은 숙주 세포에 포함된다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 포유동물 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 원핵 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 AAV 캡시드 단백질(e.g., AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10 또는 AAVrh10 캡시드 단백질)을 인코딩하는 분리된 핵산을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시는 (i) 키메라 인트론을 통해 베타-헥소사미니다제 서브유닛 알파(HexA)를 인코딩하는 트랜스진에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 제1 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제1 rAAV; 및 (ii) 키메라 인트론을 통해 베타-헥소사미니다제 서브유닛 베타(HexB)를 인코딩하는 트랜스진에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 제2 핵산을 함유하는 캡시드를 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 rAAV 및 제2 rAAV는 조성물에 1:1의 비로 존재한다. 일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 바와 같은 재조합 AAV(rAAV) 또는 약학적 조성물을 리소좀 축적병(예를 들어, 테이 삭스병, GM2 강글리오시드증, 샌드호프병, 모르키오 증후군 B 등)을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 리소좀 축적병을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 리소좀 축적병은 테이 삭스병 또는 샌드호프병이다. 일부 구체예에서, rAAV 또는 약학적 조성물은 두개내 주사, 뇌내 주사, 또는 대뇌 심실 시스템, 소뇌숨뇌수조 또는 척수강내 공간을 통한 CSF로의 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 구체예에서, 본 개시는 본원에 기재된 바와 같은 rAAV 또는 약학적 조성물을 GM2 강글리오시드증을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 GM2 강글리오시드증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 바와 같은 재조합 AAV(rAAV)를 수용하는 용기; 또는 본원에 기재된 바와 같은 재조합 AAV(rAAV)를 포함하는 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 구체예에서, 키트는 약학적으로 허용되는 담체를 수용하는 용기를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, rAAV 또는 rAAV와 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물은 동일한 용기에 수용된다. 일부 구체예에서, 용기는 주사기이다. 일부 양태에서, 본 개시는 SEQ ID NO: 23에 제시된 바와 같이 인간