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KR-20260061157-A - IL-2가 차폐된 사이토카인 및 이의 사용 방법

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Abstract

본 발명은 특히 약화된 인터루킨 2(interleukin 2, IL-2) 폴리펩타이드, VHH 차폐 모이어티, 담체 모이어티 및 항-PD1 표적화 모이어티를 포함하는 차폐된 사이토카인을 제공한다. 일부 실시형태에서, IL-2 폴리펩타이드는 단백질분해성 절단형 링커를 포함함으로써 종양 미세환경과 같은 표적 부위에서 단백질분해효소에 의해 활성화될 수 있도록 조작된다. VHH 차폐 모이어티는 사이토카인이 이의 동족 수용체 또는 단백질에 결합하거나 활성을 나타내는 것을 차단, 폐쇄, 억제(예를 들어, 감소) 또는 달리 방지(예를 들어, 차폐)한다. 표적 부위에서 절단형 링커의 단백질분해 절단 시, IL-2 폴리펩타이드가 활성화되어 이의 동족 수용체 또는 단백질에 증가된 친화성으로 결합할 수 있게 된다.

Inventors

  • 존슨, 파커
  • 에릴마즈, 에르탄
  • 토마르, 디라즈
  • 니콜슨, 벤자민
  • 젠킨스, 커트
  • 비알루차, 카를 울리

Assignees

  • 실리오 디벨럽먼트, 인크.

Dates

Publication Date
20260506
Application Date
20240830
Priority Date
20230830

Claims (20)

  1. 차폐된 사이토카인으로서, a) 약화된 인터루킨 2(interleukin 2, IL-2) 폴리펩타이드, b) 중쇄 단독 항체(VHH)를 포함하는 차폐 모이어티, c) 담체 모이어티, 및 d) 항-PD1 표적화 모이어티를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  2. 제1항에 있어서, 상기 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2의 서열과 비교하여 아미노산 위치 R38, F42, K43, Y45, E62, L72, 및/또는 C125에서 돌연변이를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  3. 제2항에 있어서, 상기 돌연변이는 R38G, R38A, F42A, F42K, F42E, K43A, Y45A, Y45N, Y45R, E62R, E62S, E62A, L72G, C125A, 및/또는 C125S인, 차폐된 사이토카인.
  4. 제2항 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약화된 IL-2 폴리펩타이드가 a) C125A; b) F42E, C125A; c) E62S, C125A; d) F42A, C125A; e) Y45R, C125A; f) F42S, E62S, C125A; g) F42K; h) F42A, Y45A, L72G, C125A; i) E62R; j) Y45N; k) K43A; l) Y45A, E62S; 또는 m) R38G, Y45A, E62S 돌연변이를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  5. 제4항에 있어서, 상기 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42E 및 C125A를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  6. 제5항에 있어서, 상기 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호4를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VHH는 상기 IL-2 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는, 차폐된 사이토카인.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VHH는 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 6)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 7)를 포함하는 HCDR2, 및 ASSWYEDETDY(서열번호 8)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VHH는 서열번호 5와 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VHH는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VHH는 C-말단 아미노산 연장부를 더 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  12. 제11항에 있어서, 상기 C-말단 연장부는 1~5개의 아미노산을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  13. 제11항에 있어서, 상기 C-말단 연장부는 A, AS, AST, AAA, AH, GS, PP, PPP, 및 GP로 이루어진 군에서 선택되는, 차폐된 사이토카인.
  14. 제13항에 있어서, 상기 차폐 모이어티는 AAA를 포함하는 C-말단 아미노산 연장부를 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  15. 제14항에 있어서, 서열번호 12와 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는 차폐된 사이토카인.
  16. 제15항에 있어서, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 차폐된 사이토카인.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 Fab, 단일 사슬 Fv(single chain Fv, scFv), 단일 도메인 항체(VHH), 하나 이상의 CDR, 가변 중쇄[variable heavy chain, VH], 가변 경쇄[variable light chain, VL], Fab-유사 이중특이적 항체(Fab-like bispecific antibody, bsFab), 단일 도메인 항체 연결 Fab(single-domain antibody-linked Fab, s-Fab), 항체 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 항원 결합 도메인을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 GYTFTNYY(서열번호 172)의 중쇄 CDR1 서열, INPSNGGT(서열번호 173)의 중쇄 CDR2 서열, 및 ARRDYRFDMGFDY(서열번호 174)의 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 KGVSTSGYSY(서열번호 177)의 경쇄 CDR1 서열, LAS(서열번호 178)의 경쇄 CDR2 서열, 및 QHSRDLPLT(서열번호 179)의 경쇄 CDR3 서열을 포함하는, 차폐된 사이토카인.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 GYTFTNYY(서열번호 172)의 중쇄 CDR1 서열, INPSNGGT(서열번호 173)의 중쇄 CDR2 서열, ARRDYRFDMGFDY(서열 번호 174)의 중쇄 CDR3 서열, KGVSTSGYSY(서열번호 177)의 경쇄 CDR1 서열, LAS(서열번호 178)의 경쇄 CDR2 서열, 및 QHSRDLPLT(서열번호 179)의 경쇄 CDR3 서열을 포함하는, 차폐된 사이토카인.

Description

IL-2가 차폐된 사이토카인 및 이의 사용 방법 관련 출원에 대한 상호참조 본 출원은 2023년 8월 30일에 출원된 미국 가출원 제63/579,684호에 대한 우선권 및 이의 이익을 주장하며, 상기 가출원의 내용은 전체가 본원에 참조로 원용된다. 서열목록의 참조로의 포함 본 명세서는 본원과 함께 제출된 서열목록(2024년 8월 30일에 XTX_IL2_04WO1_SL.xml이라는 명칭의 XML 파일로 전자적으로 제출됨)을 참조하고 이를 포함한다. .xml 파일은 2024년 8월 28일에 생성되었으며 크기는 171,326 바이트이다. 서열목록의 전체 내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다. 암은 미국에서 두 번째로 주요한 사망 원인으로, 그 다음 5가지 주요 원인(만성 호흡기 질환, 뇌졸중, 사고, 알츠하이머병 및 당뇨병)보다 더 많은 사망자를 낸다. 특히 표적 치료법으로 큰 진전이 있었지만, 이 분야에서는 아직 해야 할 일이 많다. 면역요법 및 이 분야의 한 갈래인 면역종양학은 악성 종양을 치료하기 위한 실행 가능하고 유망한 치료 선택사항을 만들어내고 있다. 구체적으로, 암의 한 가지 특징이 면역 회피라는 것이 현재 인식되어 있으며, 면역체계를 재활성화시켜 암을 인식하고 치료하기 위해 표적을 확인하고 이러한 표적에 대한 치료법을 개발하기 위한 상당한 노력이 있었다. 사이토카인 치료법은 항종양 세포독성을 유도하기 위해 면역체계를 자극하는 효과적인 전략이다. 특히, 인터루킨-2(interleukin-2, IL-2)의 재조합 형태인 Proleukin(알데스류킨)은 전이성 신세포 암종 및 흑색종의 치료를 위해 FDA에서 승인받았다. 불행하게도, 환자에게 투여되는 사이토카인은 일반적으로 매우 짧은 반감기를 가지므로, 빈번한 투여를 필요로 한다. 예를 들어, Proleukin이라는 상표명으로 판매되는 알데스류킨의 제품 라벨에는 5분 정맥 내[intravenous, IV] 주입을 받은 환자에서 이 약물의 반감기가 85분인 것으로 나타났다고 언급되어 있다. 추가로, 고용량의 사이토카인을 투여하면 전신 면역 활성화를 통해 혈관 누출과 같은 건강에 유해한 결과를 유발할 수 있다. 이러한 발견은 전신 면역 활성화와 연관된 부작용 없이 종양을 효과적으로 표적화하는 IL-2 폴리펩타이드 치료제를 개발할 필요성을 보여준다. 본 발명은 특히 약화된 IL-2 및 VHH 차폐 모이어티를 포함하는 차폐된 사이토카인을 제공한다. VHH 차폐 모이어티는 IL-2 사이토카인에 결합하고, 원치 않는 표적에서 사이토카인의 생물학적 활성을 억제한다. 원하는 표적(예를 들어, 종양)에서 절단 시, 차폐 모이어티는 사이토카인에서 방출되어, IL-2 폴리펩타이드의 기능을 활성화시킨다. 특히, 본 발명의 약화된 IL-2 및 VHH 차폐 모이어티를 포함하는 차폐된 사이토카인은 (1) IL-2 사이토카인의 기능이 원치 않는 표적에서 억제되도록 하는 효과적인 차폐 효율; (2) VHH 차폐 모이어티를 방출시키키 위한 단백질분해효소에 의한 효율적인 IL-2 활성화; (3) 혈장이 아닌 종양에서의 선택적인 IL-2 활성화; 및 (4) 생체 내 효능(예를 들어, 높은 종양 성장 억제)을 특징으로 한다. 일 양태에서 본 발명은 특히 약화된 IL-2 폴리펩타이드, 중쇄 단독 항체(VHH)를 포함하는 차폐 모이어티, 담체 모이어티, 및 항-PD1 표적화 모이어티를 포함하는 차폐된 사이토카인을 제공한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2서열과 비교하여 아미노산 위치 R38에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2서열과 비교하여 아미노산 위치 F42에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2서열과 비교하여 아미노산 위치 K43에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2서열과 비교하여 아미노산 위치 Y45에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2 서열과 비교하여 아미노산 위치 E62에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2 서열과 비교하여 아미노산 위치 L72에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 2를 갖는 성숙한 IL-2 서열과 비교하여 아미노산 위치 C125에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42E 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 E62S 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42A 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 Y45R 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42S, E62S, 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42K 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 F42A, Y45A, L72G, 및 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 E62R 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 Y45N 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 K43A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 Y45A 및 E62S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 R38G, Y45A 및 E62S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 C125A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서 약화된 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 4를 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 IL-2 폴리펩타이드에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서 VHH는 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 6)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 7)를 포함하는 HCDR2, 및 ASSWYEDETDY(서열번호 8)에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 85 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 88 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 90 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 92 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 93 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 94 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 95 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 96 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 97 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 98 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5와 적어도 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 아미노산 연장부를 포함한다. 일부 실시형태에서 연장부는 VHH의 N-말단에 있다. 일부 실시형태에서 연장부는 VHH의 C-말단에 있다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 1개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 2개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 3개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 4개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 5개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 6개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 7개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 8개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 9개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노 연장부는 10개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 A이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 AS이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 AST이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 AAA이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 AH이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 GS이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 PP이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 PPP이다. 일부 실시형태에서 아미노산 연장부는 잔기 GP이다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 85 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 88 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 90 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 92 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 93 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 94 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 95 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 96 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 97 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 98 % 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 VHH는 서열번호 12와 적어도 9