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KR-20260061158-A - VHH가 차폐된 사이토카인 및 이의 사용 방법

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Abstract

본 발명은 IL-2 폴리펩타이드, 항-IL-2 VHH 차폐 모이어티 및 단백질분해로 절단 가능한 펩타이드를 포함하는, VHH가 차폐된 사이토카인에 관한 것이다. 항-IL-2 VHH 차폐 모이어티는 IL-2를 차폐하여 사이토카인 또는 이의 기능적 단편이 이의 동족 수용체에 결합하는 것을 감소시키거나 방지한다. 표적 부위에서 단백질분해 절단 시, IL-2가 활성화되며, 이는 IL-2가 이의 동족 수용체에 결합할 수 있거나 더 많이 할 수 있게 한다.

Inventors

  • 존슨, 파커
  • 에릴마즈, 에르탄
  • 토마르, 디라즈
  • 니콜슨, 벤자민
  • 비알루차, 카를 울리

Assignees

  • 실리오 디벨럽먼트, 인크.

Dates

Publication Date
20260506
Application Date
20240829
Priority Date
20230830

Claims (20)

  1. IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)에 있어서, GX 1 X 2 FX 3 X 4 X 5 X 6 MG(서열번호 49)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1으로서, X 1 은 S/L이고/이거나, X 2 는 I/T이고/이거나, X 3 는 S/G이고/이거나, X 4 는 I/S이고/이거나, X 5 는 N/Y이고/이거나 X 6 는 V/A인, HCDR1; AISSGGSTX 1 YX 2 DSVKG(서열번호 54)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2로서, X 1 은 N/Y이고/이거나 X 2 는 A/P인, HCDR2; ASSX 1 YEDETDY(서열번호 58)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3로서, X 1 은 W/F/Y인, HCDR3를 포함하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  2. IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)로서, GSIFSINVMG(서열번호 44)와 동일하거나 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 6개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)와 동일하거나 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)와 2개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; ASSWYEDETDY(서열번호 55)와 동일하거나 ASSWYEDETDY(서열번호 55)와 1개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  3. IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)로서, GSIFSINVMG(서열번호 44), GSIFSSNVMG(서열번호 45), GSIFSINAMG(서열번호 46), GSIFSIYVMG(서열번호 47), GLTFGSYAMG(서열번호 48)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; AISSGGSTNYADSVKG서열번호 50), AISSGGSTNYPDSVKG(서열번호 51), AISSGGSTYYADSVKG(서열번호 52), AISSGGSTYYPDSVKG(서열번호 53)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 ASSWYEDETDY(서열번호 55), ASSFYEDETDY(서열번호 56), ASSYYEDETDY(서열번호 57)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  4. IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)로서, (1) 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 ASSWYEDETDY(서열번호 55)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (2) 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSFYEDETDY(서열번호 56)를 포함하는 HCDR3; (3) 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)를 포함하는 HCDR3; 또는 (4) 아미노산 서열 GSIFSSNVMG(서열번호 45)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)를 포함하는 HCDR3 중에서 선택되는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3를 포함하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSWYEDETDY(서열번호 55)를 포함하는 HCDR3를 포함하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는, 중쇄 단독 항체(VHH).
  7. 표 2에 열거된 서열 중 어느 하나와 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는, IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH).
  8. 제7항에 있어서, VHH1(서열번호 1), VHH6(서열번호 6), VHH7(서열번호 7), VHH9(서열번호 9), VHH12(서열번호 12), VHH26(서열번호 26), 또는 VHH27(서열번호 27) 중 어느 하나와 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VHH.
  9. 제7항에 있어서, VHH1(서열번호 1)과 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VHH.
  10. 제7항에 있어서, VHH1(서열번호 1)과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VHH.
  11. 제7항에 있어서, VHH12(서열번호 12)와 적어도 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VHH.
  12. 제7항에 있어서, VHH12(서열번호 12)와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VHH.
  13. 제7항에 있어서, VHH1(서열번호 1)에 대해 S27L, I28T, S30G, I31S, N32Y, V33A, Q44G, R45L, L47W, A49S, N58Y, A60P, M96A, W101F, W101Y, W109R, Q114L로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 치환을 포함하는 VHH.
  14. 제7항에 있어서, VHH1(서열번호 1)에 대해 a) A60P; b) I31S, M96A; c) I31S, M96A, W101F; d) M96A; e) N32Y, M96A; f) N32Y, M96A, W101F; g) N58Y, A60P, M96A, W101F; h) N58Y, M96A; i) Q44G; j) Q44G, M96A, W101F; k) Q44G, M96A, W101Y; l) Q44G, R45L; m) Q44G, R45L, L47W, A49S; n) Q44G, R45L, L47W, A49S, M96A, W101F; o) Q44G, R45L, L47W, A49S, M96A, W101Y; p) Q44G, R45L, M96A, W101F; q) Q44G, R45L, M96A, W101Y; r) S27L, I28T, S30G, I31S, V33A, N58Y, M96A; s) S27L, I28T, S30G, I31S, V33A, N58Y, M96A, W101F; t) V33A, M96A; u) V33A, M96A, W101F; v) W101F; w) W101Y; x) N58Y, A60P, M96A, W101Y; y) I31S, M96A, W101Y; z) V33A, M96A, W101Y; aa) N32Y, M96A, W101Y; bb) S27L, I28T, S30G, I31S, N58Y, V33A, M96A, W101Y; cc) Q44G, N58Y, A60P, M96A, W101F; dd) I31S, Q44G, R45L, M96A, W101F; ee) V33A, Q44G, R45L, M96A, W101F; ff) N32Y, Q44G, M96A, W101F; gg) S27L, I28T, S30G, I31S, N58Y, V33A, Q44G, R45L, L47W, A49S, M96A, W101F; hh) Q44G, N58Y, A60P, M96A, W101Y; ii) I31S, Q44G, R45L, M96A, W101Y; jj) V33A, Q44G, R45L, M96A, W101Y; kk) N32Y, Q44G, M96A, W101Y; ll) S27L, I28T, S30G, I31S, N58Y, V33A, Q44G, R45L, L47W, A49S, M96A, W101Y; mm) W109R, Q114L; nn) M96A, W101F, W109R, Q114L; 및 oo) M96A, W101Y, W109R, Q114L로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 치환을 포함하는 VHH.
  15. 제7항에 있어서, a) Q44G; b) Q44G, M96A, W101F; c) Q44G, M96A, W101Y; d) Q44G, R45L; e) I31S, M96A, W101Y; 및 f) I31S, Q44G, R45L, M96A, W101Y로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 치환을 포함하는 VHH.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 1~5개 아미노산을 포함하는 C-말단 연장부를 더 포함하는 VHH.
  17. 제16항에 있어서, 상기 C-말단 연장부는 A, AS, AST, AAA, AH, GS, PP, PPP, GP에서 선택되는, VHH.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 VHH를 포함하는 단백질.
  19. 제18항에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 단백질.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 담체 모이어티를 더 포함하는 단백질.

Description

VHH가 차폐된 사이토카인 및 이의 사용 방법 관련 출원에 대한 상호참조 본 출원은 2023년 8월 30일에 출원된 미국 가출원 제63/579,603호에 대한 우선권 및 이의 이익을 주장하며, 상기 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 원용된다. 서열목록의 참조로의 포함 본 명세서는 본원과 함께 제출된 서열목록(2024년 8월 29일에 XTX_4GC_02WO1_SL.xml이라는 명칭의 XML 파일로 전자적으로 제출됨)을 참조하고 이를 포함한다. .xml 파일은 2024년 8월 28일에 생성되었으며 크기는 218,340 바이트이다. 서열목록의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 암은 미국에서 두 번째로 주요한 사망 원인으로, 그 다음 5가지 주요 원인(만성 호흡기 질환, 뇌졸중, 사고, 알츠하이머병 및 당뇨병)보다 더 많은 사망자를 낸다. 특히 표적 치료법으로 큰 진전이 있었지만, 이 분야에서는 아직 해야 할 일이 많다. 면역요법 및 이 분야의 한 갈래인 면역종양학은 악성 종양을 치료하기 위한 실행 가능하고 유망한 치료 선택사항을 만들어내고 있다. 구체적으로, 암의 한 가지 특징이 면역 회피라는 것이 현재 인식되어 있으며, 면역체계를 재활성화시켜 암을 인식하고 치료하기 위해 표적을 확인하고 이러한 표적에 대한 치료법을 개발하기 위한 상당한 노력이 있었다. 사이토카인 치료법은 항종양 세포독성을 유도하기 위해 면역 체계를 자극하는 효과적인 전략이다. 특히, 인터루킨-2(interleukin-2, IL-2)의 재조합 형태인 Proleukin(알데스류킨)은 전이성 신세포 암종 및 흑색종의 치료를 위해 FDA에서 승인받았다. 불행하게도, 환자에게 투여되는 사이토카인은 일반적으로 매우 짧은 반감기를 가지므로, 빈번한 투여를 필요로 한다. 예를 들어, Proleukin이라는 상표명으로 판매되는 알데스류킨의 제품 라벨에는 5분 정맥[intravenous, IV] 주입을 받은 환자에서 이 약물의 반감기가 85분인 것으로 나타났다고 언급되어 있다. 추가로, 고용량의 사이토카인을 투여하면 전신 면역 활성화를 통해 혈관 누출과 같은 건강에 유해한 결과를 유발할 수 있다. 이러한 발견은 전신 면역 활성화와 연관된 부작용 없이 종양을 효과적으로 표적화하는 IL-2 폴리펩타이드 치료제를 개발할 필요성을 보여준다. 본 발명은 특히 본원에 기재된 임의의 차폐된 또는 표적화된 IL-2 사이토카인에서 차폐 모이어티로서 사용될 수 있는 신규한 항-IL-2 항원 결합 단편(예를 들어, VHH)을 제공한다. VHH 차폐 모이어티는 IL-2 사이토카인에 결합하고, 바람직하지 않은 표적에서 사이토카인의 생물학적 활성을 억제한다. 원하는 표적(예를 들어, 종양)에서 절단시, 차폐 모이어티는 사이토카인에서 방출되어, IL-2 폴리펩타이드의 기능을 활성화시킨다. 특히, 본 발명의 VHH 차폐 모이어티는 개선된 결합 동역학, 효과적인 IL-2 차폐 효율(즉, 비표적 환경에서 IL-2를 억제함), 및 종양-미세환경에서 항종양 반응을 촉진시키기 위해 IL-2에서 일단 방출되면 IL-2 활성을 나타내게 하는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 VHH 차폐 모이어티는 IL2 활성을 효과적으로 차폐하거나 억제하여, 차폐된 IL2 사이토카인의 CD8+ T 세포에 대한 pSTAT5 활성을 기준으로 한 EC50 값이 차폐 모이어티가 없는 IL-2 사이토카인과 비교하여 300배 초과이다. VHH 차폐 모이어티가 IL-2 사이토카인 분자에서 절단되면, IL-2 기능이 회복된다. 본 발명은 또한 다른 것들 중에서도, 차폐된 사이토카인 또는 VHH 차폐 모이어티를 포함하는 표적화된 사이토카인을 제공한다. 특히, 본 발명의 차폐된 사이토카인 또는 표적화된 사이토카인은 (1) IL-2 사이토카인의 기능이 바람직하지 않은 표적에서 억제되도록 하는 효과적인 차폐 효율; (2) VHH 차폐 모이어티를 방출시키기 위한 단백질분해효소에 의한 효율적인 IL-2 활성화; (3) 혈장이 아닌 종양에서의 선택적인 IL-2 활성화; 및 (4) 생체 내 효능(예를 들어, 높은 종양 성장 억제)을 특징으로 한다. 일부 양태에서 본 발명은 GX1X2FX3X4X5X6MG(서열번호 49)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1으로서, X1은 S/L이고/이거나, X2는I/T이고/이거나, X3는 S/G이고/이거나, X4는 I/S이고/이거나, X5는N/Y이고/이거나 X6는 V/A인, HCDR1 ; AISSGGSTX1YX2DSVKG(서열번호 54)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2로서, X1 은 N/Y이고/이거나 X2는 A/P인 HCDR2; ASSX1YEDETDY(서열번호 58)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3로서, X1은 W/F/Y인, HCDR3를 포함하는 IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)를 제공한다. 일부 양태에서 본 발명은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 동일하거나 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 6개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)와 동일하거나 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)와 2개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; ASSWYEDETDY(서열번호 55)와 동일하거나 ASSWYEDETDY(서열번호 55)와 1개 이하의 아미노산 잔기만큼 차이가 나는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는 IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)를 제공한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 5개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 4개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 3개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 2개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 GSIFSINVMG(서열번호 44)와 1개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR2는 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)와 1개 이하의 아미노산 잔기만큼 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서 본 발명은 GSIFSINVMG(서열번호 44), GSIFSSNVMG(서열번호 45), GSIFSINAMG(서열번호 46), GSIFSIYVMG(서열번호 47), GLTFGSYAMG(서열번호 48)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; AISSGGSTNYADSVKG서열번호 50), AISSGGSTNYPDSVKG(서열번호 51), AISSGGSTYYADSVKG(서열번호 52), AISSGGSTYYPDSVKG(서열번호 53)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 ASSWYEDETDY(서열번호 55), ASSFYEDETDY(서열번호 56), ASSYYEDETDY(서열번호 57)에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3를 포함하는 IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)를 제공한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 아미노산 서열 GSIFSSNVMG(서열번호 45)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 아미노산 서열 GSIFSINAMG(서열번호 46)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 아미노산 서열 GSIFSIYVMG(서열번호 47)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR1은 아미노산 서열 GLTFGSYAMG(서열번호 48)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR2는 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR2는 아미노산 서열 AISSGGSTNYPDSVKG(서열번호 51)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR2는 아미노산 서열 AISSGGSTYYADSVKG(서열번호 52)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR2는 아미노산 서열 AISSGGSTYYPDSVKG(서열번호 53)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR3는 아미노산 서열 ASSWYEDETDY(서열번호 55)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR3는 아미노산 서열 ASSFYEDETDY(서열번호 56)를 포함한다. 일부 실시형태에서 HCDR3는 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)를 포함한다. 일부 양태에서 본 발명은 하기에서 선택되는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3를 포함하는, IL-2에 결합하는 중쇄 단독 항체(VHH)를 제공한다. (1) [아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSWYEDETDY(서열번호 55)를 포함하는 HCDR3], (2) [아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSFYEDETDY(서열번호 56)를 포함하는 HCDR3], (3) [아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)를 포함하는 HCDR3], 또는 (4) [아미노산 서열 GSIFSSNVMG(서열번호 45)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSYYEDETDY(서열번호 57)를 포함하는 HCDR3]. 일부 실시형태에서 중쇄 단독 항체(VHH)는 아미노산 서열 GSIFSINVMG(서열번호 44)를 포함하는 HCDR1, 아미노산 서열 AISSGGSTNYADSVKG(서열번호 50)를 포함하는 HCDR2, 및 아미노산 서열 ASSWYEDETDY(서열번호 55)를 포함하는 HCDR3