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KR-20260061237-A - 이중 특이성 항체 및 그 응용

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Abstract

본 발명은 CD3 및 종양 타깃을 표적으로 하는 이중 특이성 항체 및 그 응용을 제공한다. 해당 이중 특이성 항체는 제1항원 결합 영역, 제2항원 결합 영역 및 Fc 부위를 포함하며; 상기 Fc 부위는 제1 Fc 펩타이드 및 제2 Fc 펩타이드를 포함하며; 상기 제1항원 결합 영역은 scFv 조각 및 제1분자의 결합 단백질 또는 그의 조각을 포함하며, 상기 제1분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 상기 scFv 조각의 N단에 연결되며, 상기 scFv 조각의 C단은 상기 제1 Fc 펩타이드의 N단에 연결되며; 상기 제2항원 결합 영역은 제2분자의 결합 단백질 또는 그의 조각을 포함하며, 상기 제2분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 상기 제2 Fc 펩타이드의 N단에 연결되며; 상기 제1분자는 상기 제2분자와 동일하며, 상기 scFv 조각은 CD3 결합 활성을 가진다. 본 발명의 이중 특이성 항체는 T세포와의 결합이 약해 종양과의 결합이 강하며 안전성이 좋아 항암 활성이 높기에 적용 및 약물 개발 가치가 높다.

Inventors

  • 카오, 궈슈아이
  • 청, 잉
  • 리, 양양
  • 우,위에이

Assignees

  • 허페이 티지 이뮤노파마 컴퍼니 리미티드

Dates

Publication Date
20260506
Application Date
20240904
Priority Date
20230906

Claims (20)

  1. 제1항원 결합 영역, 제2항원 결합 영역 및 Fc 부위를 포함하며; 상기 Fc 부위는 제1 Fc 펩타이드 및 제2 Fc 펩타이드를 포함하며; 상기 제1항원 결합 영역은 scFv 조각 및 제1분자의 결합 단백질 또는 그의 조각을 포함하며, 상기 제1분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 상기 scFv 조각의 N단에 연결되며, 상기 scFv 조각의 C단은 상기 제1 Fc 펩타이드의 N단에 연결되며; 상기 제2항원 결합 영역은 제2분자의 결합 단백질 또는 그의 조각을 포함하며, 상기 제2분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 상기 제2 Fc 펩타이드의 N단에 연결되며; 상기 제1분자는 상기 제2분자와 동일하며, 상기 scFv 조각은 CD3 결합 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  2. 제1항 있어서, 상기 제1분자 및 상기 제2분자는 MICA, PDL1, CD47, TIGIT, CD73, CD33, CEACAM1, CEACAM5, CEACAM6, STING, WNT, Beta catenin, B7H3, VISITA, CD19, BCMA, CD22, CD20, CD123, CD38, CEA, CD25, CD46, CD138, PSCA, PSMA, PSA, MUC1, MUC16, NY-ESO-1, GD2, WT1, Mesothelin, MAGE-A3, GPC3, PRAME, Globo H, AFP, Trop2, FOLR1, SP, Sca-1, CD133또는 EPCAM에서 선택되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  3. 제2항 있어서, 상기 제1분자 및 상기 제2분자는 모두 MICA인 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  4. 제1항 있어서, 상기 결합 단백질 또는 그의 조각은 항체 또는 그의 항원 결합 조각, 수용체 및 리간드 중 최소 하나에서 선택되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  5. 제1항 있어서, 상기 제1분자의 결합 단백질 및/또는 상기 제2분자의 결합 단백질 또는 그들의 조각은 각각 독립적으로Fab 조각 및 scFab 중 하나에서 선택되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  6. 제1항 있어서, 상기 제1분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 제1 Fab 조각이며, 및/또는 상기 제2분자의 결합 단백질 또는 그의 조각은 제2 Fab 조각인 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  7. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각의 CH1 조각의 C단은 상기 scFv 조각의 N단에 연결되며, 상기 scFv 조각의 C단은 상기 제1 Fc 펩타이드의 N단에 연결되며, 및/또는 상기 제2 Fab 조각의 CH1 조각의 C단은 상기 제2 Fc 펩타이드의 N단에 연결되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  8. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및 상기 제2 Fab 조각은 MICA 결합 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  9. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및 상기 제2 Fab 조각은 모두 제2중사슬 가변 영역 CDR1~3 및 제2경사슬 가변 영역 CDR1~3을 포함하며; 여기서, 제2중사슬 가변 영역CDR1은 SEQ ID NO: 7에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지며, 제2중사슬 가변 영역CDR2은 SEQ ID NO: 8에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지며, 제2중사슬 가변 영역CDR3은 SEQ ID NO: 9에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지며, 제2경사슬 가변 영역CDR1은 SEQ ID NO: 10에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지며, 제2경사슬 가변 영역CDR2은 SEQ ID NO: 11에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지며, 제2경사슬 가변 영역CDR3은 SEQ ID NO: 12에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  10. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및/또는 상기 제 2 Fab 조각은 제2중사슬 프레임워크 영역 및/또는 제2경사슬 프레임워크 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  11. 제10항 있어서, 상기 제2중사슬 프레임워크 영역 및/또는 상기 제2경사슬 프레임워크 영역의 최소 일부는 쥐 유래 항체, 인간 유래 항체, 영장류 유래 항체, 소 유래 항체, 말 유래 항체, 젖소 유래 항체, 돼지 유래 항체, 양 유래 항체, 산양 유래 항체, 개 유래 항체, 고양이 유래 항체, 토끼 유래 항체, 낙타 유래 항체, 당나귀 유래 항체, 사슴 유래 항체, 밍크 유래 항체, 닭 유래 항체, 오리 유래 항체, 거위 유래 항체, 칠면조 유래 항체, 투계 유래 항체 및 그것들의 변체 중 최소 하나에 유래하며, 바람직하게는 쥐 유래 항체, 인간 유래 항체 및 영장류 유래 항체 중 하나에 유래하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  12. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및 상기 제2 Fab 조각은 각각 독립적으로 SEQ ID NO:29에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가진 제2중사슬 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가진 제2경사슬 가변 영역을 포함한다. 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  13. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및/또는 상기 제2 Fab 조각은 또한 CH1 조각 및 CL 조각을 포함하며, 여기서 상기 제2중사슬 가변 영역의 C 단은 상기 CH1 조각의 N 단에 연결되며, 상기 제2경사슬 가변 영역의 C 단은 상기 CL 조각의 N 단에 연결되며, 상기 CH1 조각은 사슬간 이황결합으로 상기 CL 조각에 연결되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  14. 제6항 있어서, 상기 제1 Fab 조각 및 상기 제2 Fab 조각은 각각 독립적으로 SEQ ID NO: 31에 표시된 아미노산 서열을 가진 상기 제2중사슬 가변 영역 및 CH1 조각, 및 SEQ ID NO: 32에 표시된 아미노산 서열을 가진 상기 제2경사슬 가변 영역 및 CL 조각을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 scFv 조각은 제1중사슬 가변 영역 CDR1~3 및 제1경사슬 가변 영역 CDR1~3을 포함하며; 여기서, 제1중사슬 가변 영역CDR1은 SEQ ID NO: 1에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 제1중사슬 가변 영역CDR2은 SEQ ID NO: 2에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 제1중사슬 가변 영역CDR3은 SEQ ID NO: 3에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 제1경사슬 가변 영역CDR1은 SEQ ID NO: 4에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 제1경사슬 가변 영역CDR2은 SEQ ID NO: 5에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 제1경사슬 가변 영역CDR3은 SEQ ID NO: 6에 표시된 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 scFv 조각은 제1중사슬 프레임워크 영역 및/또는 제1경사슬 프레임워크 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  17. 제16항 있어서, 상기 제1중사슬 프레임워크 영역 및/또는 상기 제1경사슬 프레임워크 영역의 최소 일부는 쥐 유래 항체, 인간 유래 항체, 영장류 유래 항체, 소 유래 항체, 말 유래 항체, 젖소 유래 항체, 돼지 유래 항체, 양 유래 항체, 산양 유래 항체, 개 유래 항체, 고양이 유래 항체, 토끼 유래 항체, 낙타 유래 항체, 당나귀 유래 항체, 사슴 유래 항체, 밍크 유래 항체, 닭 유래 항체, 오리 유래 항체, 거위 유래 항체, 칠면조 유래 항체, 투계 유래 항체 및 그것들의 변체 중 최소 하나에 유래하며, 바람직하게는 쥐 유래 항체, 인간 유래 항체 및 영장류 유래 항체 중 하나에 유래하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 scFv 조각은 SEQ ID NO:33에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가진 제1중사슬 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34에 표시된 또는 그의 보수적 개질 형식의 아미노산 서열을 가진 제1경사슬 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  19. 제18항 있어서, 상기 scFv 조각은 또한 연결 펩타이드 1를 포함하며; 여기서 상기 연결 펩타이드 1의 N단은 상기 제1중사슬 가변 영역의 C단에 연결되며, 상기 연결 펩타이드 1의 C단은 상기 제1경사슬 가변 영역의 N단에 연결되며, 또는 상기 연결 펩타이드 1의 N단은 상기 제1경사슬 가변 영역의 C단에 연결되며, 상기 연결 펩타이드 1의 C단은 상기 제1중사슬 가변 영역의 N단에 연결되는 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.
  20. 제19항 있어서, 상기 연결 펩타이드 1는 （GGGGS）n에 표시된 아미노산 서열을 가지며, 여기서 n은 1 이상의 정수이고, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인 것을 특징으로 하는 이중 특이성 항체.

Description

이중 특이성 항체 및 그 응용 본 발명은 생물의약 분야에 속하며, 구체적으로, 본 발명은 이중 특이성 항체 및 그 응용에 관하여, 더욱 구체적으로, 본 발명은 항체, 핵산 분자, 벡터 또는 형질전환체, 세포, 약물 조합물 및 키트 그리고 그 응용에 관한 것이다. 암은 인류의 생존 및 발전에 영향을 미치는 중대한 질병이며, 최신 데이터에 따르면 전 세계에서 매년 약 1,900만 건의 새로운 암 사례가 발생하고, 매년 약 1,000만 건의 암 사망이 보고되고 있어 발생률 및 사망률이 증가 추세에 있다. 수술으로 인한 절제 외에 화학요법이나 방사선요법 등 기존 암 치료 방법은 부작용이 크고 재발하기 쉽다. 최근에는 종양 타깃 항체, 면역 체크포인트 항체, 이중 특이성 항체 등을 이용한 면역 치료가 암 치료의 새로운 관심사 및 새로운 희망이 되고 있다. PD-1/L1을 대표로 하는 면역 치료는 큰 가능성을 보여주고 있지만, 현재 승인된 가장 적용 범위가 넓은 PD-1/L1 치료법이라 하더라도 전체 반응률은 겨우 30%에 불과해 여전히 많은 환자들이 혜택을 받지 못하고 있다. 그 주요 이유 중 하나는 면역 체크포인트 요법이 "차가운 종양"에 대해 효과가 없다는 점이다. T세포는 표면의 T세포 수용체(TCR)를 통해 신생 항원(neo-antigen), 즉 종양 유전자 변이의 항원을 인식하지만, 일부 종양은 유전자 변이 빈도가 낮고 신생 항원의 종류가 적어 "차가운 종양”이라고 불린다. 면역 체크포인트 요법과 같은 현재의 PD-1/L1 요법은 T세포 자체의 기능을 회복시킴으로 항암 효과를 달성하지만, "차가운 종양"에서는 T세포가 종양을 효과적으로 인식하지 못하기 때문에 면역 체크포인트 요법은 "차가운 종양"에 대해 무효가 된다. CD3에 기반한 이중 특이성 항체(이하 "CD3 이중 특이성 항체”라 약칭된다)는 T세포를 종양 국소에 유인해 T세포와 종양을 연결해 T세포의 활성화를 촉진해 종양을 말살함으로써, 새로운 항원을 필요로 하지 않고 T세포를 유도해 "차가운 종양”을 말살할 수 있다. CD3 이중 특이성 항체는 T세포 및 종양 세포를 결합한 뒤 강력한 활성화 신호를 일으키므로, 어느 정도 면역 체크포인트 분자의 억제 신호를 무시할 수도 있다. 그러나 CD3 이중 특이성 항체도 다량의 염증 촉진성 사이토카인, 예를 들어 TNFα, IL-6 등의 생성을 촉진하며 강력한 사이토카인 폭풍 및 과도한 면역 반응을 일으키고, 신체에 손상을 주며, 심한 경우 생명을 위협할 가능성이 있다. 따라서 CD3 기반 이중 특이성 항체는 임상에서 좋은 적용 전망을 가지고 있지만, 안전성을 더욱 높여야 한다. CD3 이중 특이성 항체의 안전성 문제를 해결하는 방법 중 하나는, CD3 이중 특이성 항체와 종양 타깃 간의 결합 친화성을 높여 CD3와의 친화성을 낮춰 T세포와의 결합을 약화시킴으로, CD3 이중 특이성 항체 약물이 종양 부위에 더 많이 분포하도록 하여, 종양 부위의 약물 농도를 높여 말초의 약물 농도를 낮추어 오프 타깃 독성을 감소시키는 것이다. 따라서 임상에서는 안전성이 높여 임상 적용 가치가 높은 CD3 이중 특이성 항체의 개발이 시급한 과제가 된다. 본 발명의 상기 및/또는 추가의 형태 및 장점은 다음 도면을 참조해 실시예를 기술함으로써 명확하고 이해하기 쉬워진다. 도 1은 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 CD3ХMICA 이중 특이성 항체의 모식을 묘사한다. 도 2는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3Хh5A1002 1:1, Cross3Хh5A1002 2:1, UCT1Хh5A1002 2:1 항체와 MICA 단백질과의 결합에 관한 ELISA 결과를 묘사한다. 도 3는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체와CD3E&D단백질과의 결합에 관한 ELISA 결과를 묘사한다. 도 4는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체 연결CD3E&D과의 MICA 단백질과의 결합에 관한 ELISA 결과를 묘사한다. 도 5는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 1:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체와 CD8+ T세포와의 결합에 관한 세포 유동 분석 결과를 묘사한다. 도 6는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 1:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체와 HCT-15결직장암 세포와의 결합에 관한 세포 유동 분석 결과를 묘사한다. 도 7는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 1:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 HCT-15 결장·직장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 8는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 1:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 NCI-H1299 폐암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 9는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3Хh5A1002 1:1, Cross3Хh5A1002 2:1, UCHT1Хh5A1002 1:1, UCHT1Хh5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 PANC-1 췌장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 10는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3Хh5A1002 1:1, Cross3Хh5A1002 2:1, UCHT1Хh5A1002 1:1, UCHT1Хh5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 A498 신장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 11는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 1:1, UCHT1×h5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 PC-3 전립선암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 12는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 1:1, Cross3×h5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC를HCT-15 결장·직장암 세포와 함께 배양한 후 면역 활성화성 사이토카인IL-2 및 IFN-γ의 분비를 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 13는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 2:1, UCHT1×h5A1002 2:1, SP34×h5A1002 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 HCT-15 결장·직장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 14는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 2:1, Cross3×1D5 1:1, Cross3×1D5 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 HCT-15 결장·직장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 15는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 2:1, Cross3×13A9 1:1, Cross3×13A9 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 HCT-15 결장·직장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 16는 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한Cross3×h5A1002 2:1, Cross3×619 1:1, Cross3×619 2:1 항체를 통해 PBMC로 인한 HCT-15 결장·직장암 세포의 말살을 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 17은 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3Хh5A1002 2:1 항체를 통해 면역 재구성 마우스의 A-375 인간 흑색종 모델에서 체내 약효를 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 18은 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3Хh5A1002 2:1 항체를 통해 면역 재구성 마우스의 NCI-H1299 인간 폐암 모델에서 체내 약효를 촉진하는 결과를 묘사한다. 도 19은 본 발명의 구체적인 실시 형태에 의한 Cross3Хh5A1002 2:1 항체를 통해 면역 재구성 마우스의 PC-3 인간 전립선암 모델에서 체내 약효를 촉진하는 결과를 묘사한다. 다음은 본 발명의 실시 형태를 상세히 설명하고, 실시 형태의 사례는 첨부 도면에 제시되어 있다. 다음은 첨부된 도면을 참고하여 기술된 사례가 예시 적인 것이며, 본 발명을 설명하는 것을 목적으로 하고, 본 발명을 제한함으로 이해하면 안 된다. 또한 '제1', '제2'와 같은 용어는 묘사 목적에만 사용되며, 상대적인 중요성을 암시/의미함 또는 제시된 기술적 특징의 수량을 암시함으로 이해하면 안 된다. 이로 인해 '제1' 또는 '제2'에 한정된 특성은 최소 하나의 특성을 명시적이거나 암시적으로 포함할 가능성이 있다. 본 발명의 기술에서는 특별히 명확한 구체적 제한이 없는 한, ‘복수'의 의미는 최소 두 개, 예를 들어 두 개, 세 개 등을 가리킨다. 본 명세서에서 공개된 범위의 끝점 또는 임의의 값은 해당 정확한 범위 또는 값에 한정되는 것이 아니라, 이들 범위 또는 값은 그 범위 또는 값에 근접한 값을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 수치 범위에 대해서는 각 범위의 끝점 값의 사이, 각 범위의 끝점 값과 개별 점 값과의 사이, 그리고 개별 점 값의 사이를 서로 결합함으로써 하나 또는 여러 개의 새로운 수치 범위를 얻을 가능성이 있으며, 이러한 수치 범위는 본 명세서에 구체적으로 공개된 것으로 간주되어야 한다. 용어 및 정의 본 발명을 더 쉽게 이해하기 위해, 다음 몇 가지 기술 및 과학 용어를 구체적으로 정의한다. 특별한 정의가 없는 한, 이 명세서에 사용된 모든 기타 기술 및 과학 용어는 해당 업계 종사자에게 일반적으로 이해된 의미를 가지고 있다. 아미노산 잔기의 약어는 이 분야에서 자주 사용되는 20가지 L-아미노산 중 하나를 나타내는 표준적인 3자리 및/또는 1자리 코드이다. 본 명세서에서 '항체'라는 용어는 보통 하나 또는 다중 항원인식부위를 식별할 수 있는 항체를 의미하