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KR-20260061909-A - Composition for enhancing immunity comprising extract of Gastrodia elata

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Abstract

본 발명은 천마, 박하, 세신 및/또는 시호 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 천마, 박하, 세신 및/또는 시호 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대식세포 및 NK세포 활성을 증가시키고, 면역 증진 관련 사이토카인 분비를 증가시키는 등 다양한 면역 기능 증진 효과가 있어, 이를 면역력이 저하된 개체 등의 면역 증진 용도로 활용할 수 있다. 또한, 본 발명의 천마, 박하, 세신 또는 시호 추출물은 천연물로서 부작용이 적은 바, 이를 식품, 사료, 의약품, 의약외품 등의 소재로 활용 가능하다.

Inventors

  • 신희순
  • 이소영
  • 임경민
  • 임은영
  • 정선영
  • 김근동
  • 김승일
  • 김영인
  • 송주혜
  • 송현지
  • 엄지은
  • 유상혁
  • 유지연

Assignees

  • 한국식품연구원

Dates

Publication Date
20260506
Application Date
20241028

Claims (14)

  1. 천마( Gastrodia elata ) 추출물, 박하( Mentha arvensis ) 추출물, 세신( Asarum sieboldii ) 추출물 및 시호( Bupleurum falcatum ) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 각 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것인, 식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 면역 증진은 항암제 또는 면역억제제 처리로 인해 저하된 면역력이 증가되는 것인, 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 대식세포 활성을 증가시키는 것인, 식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 NK세포 활성을 증가시키는 것인, 식품 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품.
  7. 천마( Gastrodia elata ) 추출물, 박하( Mentha arvensis ) 추출물, 세신( Asarum sieboldii ) 추출물 및 시호( Bupleurum falcatum ) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 면역 증진은 항암제 또는 면역억제제 처리로 인해 저하된 면역력이 증가되는 것인, 약학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 조성물은 대식세포 활성을 증가시키는 것인, 약학적 조성물.
  10. 제7항에 있어서, 상기 조성물은 NK세포 활성을 증가시키는 것인, 약학적 조성물.
  11. 천마( Gastrodia elata ) 추출물, 박하( Mentha arvensis ) 추출물, 세신( Asarum sieboldii ) 추출물 및 시호( Bupleurum falcatum ) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 면역 증진용 의약외품 조성물.
  12. 천마( Gastrodia elata ) 추출물, 박하( Mentha arvensis ) 추출물, 세신( Asarum sieboldii ) 추출물 및 시호( Bupleurum falcatum ) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 사료 조성물.
  13. 천마( Gastrodia elata ) 추출물, 박하( Mentha arvensis ) 추출물, 세신( Asarum sieboldii ) 추출물 및 시호( Bupleurum falcatum ) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 바이러스 억제용 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 바이러스는 인플루엔자 바이러스(influenza virus), 호흡기세포융합바이러스(Respiratory syncytial virus) 또는 코로나 바이러스(coronavirus)인, 바이러스 억제용 조성물.

Description

천마 추출물 등을 포함하는 면역 증진용 조성물 {Composition for enhancing immunity comprising extract of Gastrodia elata} 본 발명은 천마(Gastrodia elata) 추출물, 박하(Mentha arvensis) 추출물, 세신(Asarum sieboldii) 추출물 및 시호(Bupleurum falcatum) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 식품 조성물; 약학적 조성물; 의약외품 조성물; 및 사료 조성물;에 관한 것이다. 면역 반응은 체내에 존재하는 자기방어체계로서, 독소와 같은 외부물질 또는 박테리아, 바이러스 등과 같은 병원체(pathogen)를 자기가 아닌 이물질로 인식하여 제거하고 대사시키는 과정이다. 면역 반응은 면역 기능의 변화를 조절하여 정상상태로 회복시키거나 변화의 폭을 줄여주는 작용으로, 면역 기능 증진과 면역 기능 억제로 구분된다. 그 중 면역 기능 증진은 외부 물질이나 병원체로부터 자신을 보호하는 기능을 말하며, 기본적으로 신체 내 면역세포의 활성화에 기인한 염증반응에 의해 이루어진다. 면역계는 크게 물리적 장벽, 내재면역, 적응면역의 3차 방어선을 지니고 있다. 상피조직, 리소자임(lysozyme), 프로테아제(protease), 정상균총(normal flora) 등에 의한 1차 방어선에서 제대로 병원균을 방어하지 못하면, 대식세포(macrophage), 자연살해세포(natural killer cell), 수지상세포(dendritic cell)에 의한 2차 방어선인 내재면역이 활성화되어 병원균을 저지하게 된다. 내재면역에 의해 제거되지 못한 병원체는 3차 면역방어선인 적응면역을 활성화시킴으로써, T 세포와 B 세포에 의한 면역글로불린의 생성과 사이토카인(cytokine)의 분비를 통해, 표적세포(target cell)를 파괴한다. 대식세포(macrophage)는 면역반응 세포 중 하나로 혈액, 비장, 간, 조직 및 림프절 등에 널리 분포되어 있으며, 미생물을 제거하는 식균작용뿐 아니라 표적세포를 제거하는 역할을 한다. 대식세포는 면역조절 물질에 의해 자극 및 활성화되어 IFN-γ, TNF-α, 산화질소(nitric oxide, NO) 등을 분비함으로써 미생물 및 표적세포를 제거할 수 있다. 이렇듯 대식세포는 선천성 면역반응뿐만 아니라 적응성 면역반응에도 관여하기 때문에 대식세포의 활성화는 외부 병원체로부터 야기되는 질병을 근원적으로 차단할 수 있다. NK세포(natural killer cell)는 선천적인 면역을 담당하는 혈액 속 백혈구의 일종으로, 간과 골수에서 성숙한다. 바이러스에 감염된 세포나 암세포를 직접 공격해 없애는 것이 NK세포의 주 기능이다. NK세포가 바이러스에 감염된 세포나 암세포를 공격할 때는 퍼포린(perforin)을 분비해 감염 세포나 암세포의 세포막에 구멍을 내고, 여기에 그랜자임(granzyme)을 내어 이 세포들을 사멸시킨다. 이밖에 NK세포는 다른 면역세포 증식을 유도하는 등의 역할을 하는 면역반응을 일으키는 물질인 케모카인(chemokine)과 사이토카인(cytokine)을 분비할 수도 있다. 현재까지 면역력 증진을 목적으로 한 많은 백신 면역증강제가 개발 중이지만, 널리 사용되고 있는 면역증강제인 명반항원보강제(alum adjuvant)는 상대적으로 낮은 면역증강 효율을 나타내며, 자가면역반응 발생과 같은 부작용 보고가 있다. 이러한 면역증강제의 안전성 문제로 인해, 상대적으로 안전한 천연물을 이용한 건강기능식품에 관한 수요가 높아지고 있다. 이러한 상황에서, 본 발명자들은 천연물로서 각각 천마(Gastrodia elata), 박하(Mentha arvensis), 세신(Asarum sieboldii) 및 시호(Bupleurum falcatum) 추출물이 대식세포 활성을 증진시키고, NK세포 활성을 증진시키는 등, 다양한 면역 기능 증진 효능을 나타내는 것을 확인한 바, 이를 면역력이 저하된 개체 등의 면역 증진 용도로 활용할 수 있음을 발견하였다. 이러한 천연재료는 화학 치료제의 사용에 의한 부작용 문제로부터 자유로울 수 있다는 장점이 있다. 도 1은 천마 추출물 처리에 따른 RAW 264.7 대식세포(a), 복막 대식세포(b) 및 골수 유래 대식세포(c)의 IL-6 생성량 변화를 나타낸 것이다. 도 2는 박하 추출물 처리에 따른 RAW 264.7 대식세포(a), 복막 대식세포(b) 및 골수 유래 대식세포(c)의 IL-6 생성량 변화를 나타낸 것이다. 도 3은 세신 추출물 처리에 따른 RAW 264.7 대식세포(a), 복막 대식세포(b) 및 골수 유래 대식세포(c)의 IL-6 생성량 변화를 나타낸 것이다. 도 4는 시호 추출물 처리에 따른 RAW 264.7 대식세포(a), 복막 대식세포(b) 및 골수 유래 대식세포(c)의 IL-6 생성량 변화를 나타낸 것이다. 도 5는 천마 추출물 처리에 따른 NK세포의 세포사멸능 평가 결과를 나타낸 것이다. 도 6은 박하 추출물 처리에 따른 NK세포의 세포사멸능 평가 결과를 나타낸 것이다. 도 7은 세신 추출물 처리에 따른 NK세포의 세포사멸능 평가 결과를 나타낸 것이다. 도 8은 시호 추출물 처리에 따른 NK세포의 세포사멸능 평가 결과를 나타낸 것이다. 이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다. 제조예 1. 천마(Gastrodia elata), 박하(Mentha arvensis), 세신(Asarum sieboldii) 및 시호(Bupleurum falcatum) 추출물의 제조 천마, 박하, 세신 및 시호의 건조 시료를 분쇄하여 분말을 얻은 후, 분말에 10배 중량의 증류수를 가하여 80℃에서 6시간동안 추출하였다. 추출물을 여과하고 감압농축 및 동결건조하여 분말상의 천마, 박하, 세신 및 시호 추출물을 얻었다. 실시예 1. 대식세포 사이토카인 생성능 평가 실시예 1.1. RAW 264.7 대식세포 사이토카인 생성능 천마, 박하, 세신 또는 시호 추출물의 대식세포 사이토카인 생성능에 대한 영향을 평가하기 위하여, RAW 264.7 세포 모델에서 사이토카인 생성능을 평가하였다. Murine macrophage cell line인 Raw 264.7 세포는 American Type Culture Collection (ATCC)을 통해 구입하였으며, DMEM + 10% FBS + 1% penicillin-streptomycin의 배지를 이용하여 37℃, 5% CO2 Incubator에서 배양하였다. 세포 계수기를 이용하여 세포 수 측정을 한 이후, 48-well plate에 1 Х 105 cell/well씩 분주하고 37℃, 5% CO2의 incubator에서 24시간 동안 안정시켰다. 이후 기존 상등액을 제거해 준 뒤, 각 추출물 샘플(50 μg/mL 농도)을 500 μL씩 처리하였다. 세포배양기에서 24시간 동안의 배양을 마친 후, 상등액을 회수하여 IL-6의 농도는 ELISA Kit (BD 社)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 측정하였다. 그 결과, 도 1a, 도 2a, 도 3a 및 도 4a에 나타난 바와 같이, 천마, 박하, 세신 및 시호 추출물을 각각 50 g/mL 농도 처리 시, 모두 IL-6의 생성량이 대조군에 비해 유의하게 증가함을 확인하였다. 이러한 결과는 천마, 박하, 세신 및 시호 추출물이 면역 세포를 자극하여 관련 사이토카인 생성을 증가시키는 바, 면역 증진에 도움을 줄 수 있음을 시사한다. 실시예 1.2. 복막 대식세포(Peritoneal macrophage) 사이토카인 생성능 복막 대식세포(Peritoneal macrophage)를 얻기 위해서, 5주령의 수컷 BALB/c 마우스에 3% Brewer thioglycollate medium 2mL를 복강 투여하였다. 복강 투여하고 72시간 이후, DMEM + 10% FBS + 1％ penicillin-streptomycin 배양 배지를 활용하여 복강에서 peritoneal macrophage를 회수하였다. 회수된 세포 현탁액을 1,500 rpm에서 5분간 원심분리하고 배지에 재부유 시킨 후, 30 μm cell strainer를 이용하여 단세포화하였다. 세포 계수기를 이용하여 세포 수 측정을 한 이후, 48-well plate에 5 Х 105 cell/well씩 분주하고 37℃, 5% CO2의 세포배양기에서 24시간 동안 안정화 과정을 가졌다. 안정화 이후, 기존 상등액을 제거해 준 뒤 각 추출물(50 μg/mL 농도)을 500 μL씩 처리하였다. 세포배양기에서 24시간 동안의 배양을 마친 후, 상등액을 회수하여 IL-6의 농도는 ELISA Kit (BD 社)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 측정하였다. 그 결과, 도 1b, 도 2b, 도 3b 및 도 4b에 나타난 바와 같이, 복막 대식세포에 천마, 박하, 세신 및 시호 추출물을 각각 50 g/mL 농도 처리 시, 모두 IL-6의 생성량이 대조군에 비해 유의하게 증가함을 확인하였다. 실시예 1.3. 골수 유래 대식세포(Bone marrow-derived macrophages, BMDM) 사이토카인 생성능 골수 유래 대식세포(Bone marrow-derived macrophages, BMDM)를 얻기 위해, 5주령의 수컷 BALB/c 마우스를 Isoflurane으로 마취 후 희생시켰다. 마우스의 피부를 벗겨 하지를 드러낸 다음 근처의 주요 근육들을 제거하고 고관절, 아킬레스건, 무릎 관절을 차례로 절단하여 대퇴골과 경골을 분리하였다. 분리한 대퇴골과 경골의 끝을 잘라낸 후, PBS를 사용하여 골수를 세척하였다. 회수한 골수 세척액은 원심분리 (200 Х g, 5 min, 4 ℃)한 뒤 DMEM + 10% FBS + 1％ penicillin-streptomycin + 1ng/mL M-CSF1 의 배양 배지로 현탁하고 100 μm cell strainer에 통과시켰다. 현탁액의 세포 수를 측정하고 12 well plate에 1x106 cells/mL을 1mL 분주한 이후 37℃, 5% CO2 Incubator에서 안정화시켰